HPLC法測定呋喃甲醛中3-呋喃甲酸

萬國盛，蘭公劍，崔甜甜，許悅，林萍，徐丹

（南京正大天晴制藥有限公司，江蘇 南京 210046）

呋喃甲醛別名糠醛，廣泛地應用于醫藥、食品、日化和石油工業等行業，以其作為原料直接或間接衍生出的化工產品達數千種[1]。根據質量源于設計（QbD）理念[2]，呋喃甲醛作為醫藥原料時，應對其中可能存在的雜質進行研究和控制，否則可能會對最終藥品的質量產生影響，3-呋喃甲酸是呋喃甲醛中可能存在的雜質之一，為保障后續藥品的質量，需對其進行研究和控制。

高效液相色譜（HPLC）法是現行《中國藥典》各品種項下有關物質檢查最為常用的方法，高效液相色譜儀也是醫藥化工企業研發實驗室和質量控制實驗室的常規裝備，本研究開發了高效液相色譜法測定呋喃甲醛中3-呋喃甲酸的含量，各項實驗表明該方法操作簡便，準確度較高，且實用性強。

1 實驗部分

1.1 試藥

呋喃甲醛對照品（質量分數：97.89%，來源：安耐吉化學技術有限公司）；3-呋喃甲酸對照品（含量：100.0%，來源：上海瀚鴻科技有限公司）；呋喃甲醛（南京化學試劑有限公司）。

1.2 儀器與試劑

Agilent 1260 infinity型高效液相色譜儀（Agilent公司）；Water Arc型高效液相色譜儀（Waters公司）；MSU225P-1CE-DI型電子天平（Sartorius公司）；乙腈（色譜純，TEDIA公司）；實驗用水為默克 Millipore超純水儀自制超純水。

1.3 色譜條件

采用YMC Pack Pro C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，流動相A為0.1%磷酸溶液，流動相B為乙腈，梯度洗脫：0～15 min，流動相A 90%～10%；15～23 min，流動相A 50%～90%；23～32 min，流動相A 90%），流速為1.0 mL?min-1，檢測波長220 nm，柱溫30 ℃。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

溶劑：50%乙腈溶液。

系統適用性溶液：取呋喃甲醛對照品和3-呋喃甲酸對照品各適量，加50%乙腈溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含呋喃甲醛對照品0.2 mg和3-呋喃甲酸對照品1 μg的混合溶液，搖勻。

對照品貯備液：密稱取3-呋喃甲酸對照品約20 mg，置100 mL量瓶中，加50%乙腈使溶解并稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液：取3-呋喃甲酸對照品適量，精密稱定，用50%乙腈溶解并稀釋制成每1 mL含1 μg的溶液，搖勻。

供試品溶液：取呋喃甲醛20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加50%乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2 方法學驗證

2.2.1 專屬性

在建立的色譜條件下空白溶劑對檢測無干擾，系統適用性溶液中3-呋喃甲酸色譜峰與相鄰峰之間的分離度大于1.5，方法專屬性良好（見圖1）。

圖1 系統適用性溶液色譜圖

2.2.2 檢測限和定量限

根據人用藥品技術要求國際協調理事會（ICH）指導原則Q2（R1）中信噪比（S/N）法分別確定本品的檢測限（LOD）和定量限（LOQ）[3]，按S/N≥3∶1確定檢測限濃度，按S/N≥10∶1確定定量限濃度。取3-呋喃甲酸對照品適量，用50%乙腈溶液逐級稀釋，在建立的色譜條件下進樣分析，測得3-呋喃甲酸的檢測限和定量限分別為30.8 ng?mL-1和102.7 ng?mL-1，表明方法的檢測靈敏度良好。

2.2.3 線性和范圍

取上述“2.1溶液的制備”項下對照品貯備液適量，用50%乙腈溶液依次稀釋得到3-呋喃甲酸濃度分別為0.103、0.513、0.821、1.027、1.232、1.540和2.053 μg?mL-1的系列線性溶液，在建立的色譜條件下依次進樣測定，記錄色譜圖，以峰面積（A）為縱坐標，以濃度（C，μg·mL-1）為橫坐標進行線性回歸，線性回歸方程為y=9 460.2x-129.19，相關系數r=0.999 7，表明線性關系良好。

2.2.4 準確度

本次研究中準確度以回收率（%）評價，取呋喃甲醛供試品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，精密加入上述“2.1溶液的制備”項下對照品貯備液適量，用50%乙腈稀釋至刻度，分別制成相當于50%、100%、150%質量分數的加樣回收率試驗溶液，每個濃度水平平行配制3份，在建立的色譜條件下依次進樣分析，計算加樣回收率及RSD（n=9），測的3-呋喃甲酸的平均回收率為97.0%，回收率RSD（n=9）為1.3%，表明方法的準確度良好。詳細試驗結果見表1。

表1 3-呋喃甲酸的回收率試驗結果

2.2.5 重復性

取呋喃甲醛供試品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，精密加入上述“2.1溶液的制備”項下對照品貯備液0.5 mL，用50%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，平行配制6份，作為重復性測試溶液，在建立的色譜條件下連續進樣分析，記錄色譜圖，測定每一份溶液中3-呋喃甲酸的含量，并計算含量的RSD。結果各化合物含量的RSD（n=6）為0.79%，表明方法的重復性良好。

2.2.6 中間精密度

由不同實驗人員在不同日期，使用不同的高效液相色譜儀，照“2.2.5 重復性”項下的方法進行試驗，將測定結果與重復性項下測得的6份結果合并計算各化合物含量的RSD。結果各化合物含量的RSD（n=12）為1.0%，表明方法的中間精密度良好。

2.2.7 溶液的穩定性

照“2.1溶液的制備”項下方法制備對照品溶液，在室溫條件下放置2、4、8、12、24和36 h進樣分析，記錄色譜圖，考察3-呋喃甲酸峰面的變化情況，并以不同時間點測得峰面積的RSD進行評價。結果在不同時間點測得的3-呋喃甲酸峰面積的RSD為2.3%，表明溶液在室溫條件下放置36 h穩定性良好。

2.3 樣品測定

照“2.1溶液的制備”項下方法制備系統適用性溶液、對照品溶液和供試品溶液，采用建立的色譜方法對呋喃甲醛樣品中的3-呋喃甲酸進行測定，記錄色譜圖，采用外標法計算3-呋喃甲酸含量，結果3個批次樣品中均未檢出3-呋喃甲酸，本品質量可控。

3 結果與討論

3-呋喃甲酸結構中有呋喃環和羧基官能團具有共軛結構，因此可以利用其紫外吸收特征選用紫外檢測器進行檢測；在方法建立過程中還對柱溫、柱流速以及流動相A中磷酸的濃度進行了考察，結果顯示在所建立的色譜條件上，使柱溫變化±5 ℃、柱流速變化±0.1 mL?min-1、流動相A中磷酸濃度變化±0.5%后，本方法依然可以準確測定3-呋喃甲酸的含量，表明方法的耐用性較好。

4 結 論

本研究建立了高效液相色譜法測定呋喃甲醛中3-呋喃甲酸含量的分析方法，方法學驗證結果表明，所建立的方法專屬性強、精密度好、準確度高可以穩定的用于呋喃甲醛中3-呋喃甲酸的測定，為呋喃甲醛的質量控制提供了有效的支撐，也可為其他醫藥原料或藥品中的3-呋喃甲酸的測定提供參考。