2011—2020年蒙自市狂犬病流行病學調查分析

王艷芬，張雅倫，舒相華，張瑩，張雅靖，王余磊，呂濤，張智慧，潘瓊，黃鑫，董燕，宋春蓮*

(1.蒙自市動物疫病預防控制中心，云南 蒙自 661199； 2.云南農業大學動物醫學院，云南 昆明 650201； 3.昆明市豬病防治重點實驗室，云南 昆明 650201；4.昆明市動物疫病防控技術科技創新中心，云南 昆明 650201)

狂犬病(Rabies)俗稱“瘋狗病”“恐水癥”，是由狂犬病病毒引起的一種以侵害中樞神經系統為特征的高度致死性的人獸共患傳染病，我國將其歸于二類動物疫病，是迄今為止唯一病死率達 100%的急性傳染病。狂犬病毒外形呈彈狀，內含有單鏈RNA，病毒顆粒長130～240nm，直徑65～80 nm[1]。狂犬病病毒易被日光、紫外線、甲醛、新潔爾滅、50%～70%酒精等滅活。人主要是通過直接接觸感染，大多是被攜帶狂犬病毒的動物抓傷、咬傷或舔舐傷口處，或者狂犬病患病動物唾液和組織液直接接觸傷口發生感染。也能夠通過吸入氣溶膠而感染[2]。臨床表現以恐水、畏光、吞咽困難、流涎、狂躁等為主要特征。當前，仍然沒有有效藥物和療法治療狂犬病[3]，暴露前或暴露后接種狂犬疫苗是唯一有效的預防手段[4]，在被患狂犬病動物或疑似患狂犬病動物咬傷、舔舐后，應立即用流水、肥皂水沖洗傷口，并及時注射狂犬病疫苗，降低狂犬病的發病率。狂犬病的發病過程可分為3個階段：一是局部組織內繁殖期；二是侵入中樞神經期；三是向各器官擴散期。狂犬病發生不分季節，一年四季都可能發生，在我國，狂犬病發生集中在夏秋兩季[2]，居全球第二，僅次于印度。有資料表明，狂犬病病毒主要由蝙蝠傳播[5]，而犬是人和動物間傳播狂犬病病毒的主要連接對象。我國狂犬病的流行，自20世紀50年代以來出現過3次高峰[6]，由此可見，我國狂犬病疫情依然比較嚴重，而且狂犬病疫區在我國呈不斷擴大的趨勢，全國已有28個省市報告過狂犬病。為了防止狂犬病的發生和傳播，對易感動物進行狂犬病疫苗免疫預防是一項至關重要的工作。

目前，關于狂犬病抗體檢測技術主要有酶聯免疫吸附試驗、間接免疫熒光法、快速熒光灶抑制試驗、膠體金免疫層析技術等。狂犬病抗原檢測技術主要有熒光抗體試驗、乳膠凝集試驗、免疫組織化學、原位雜交法、反轉錄聚合酶鏈式反應、基因芯片技術等。抗體檢測中酶聯免疫吸附試驗具有快速、敏感、簡便的優點，抗原檢測中熒光RT-PCR方法具有較高的特異性和靈敏度。本次檢測采用ELISA和熒光RT-PCR方法完成檢測，通過此次檢測，能夠為蒙自市7個街道(鄉、鎮)狂犬病的防控工作提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料來源

材料來源于2011—2020年蒙自市7個街道(鄉、鎮)(文瀾街道、草壩鎮、雨過鋪街道、新安鎮、冷泉鎮、西北勒鄉、期路白鄉)，經“春季或秋季集中免疫加日常補免”程序免疫狂犬病疫苗的犬只,犬血清和唾液棉拭子分別為282份和124份。

1.2 采樣方法及保存

參照《動物狂犬病病毒中和抗體檢測技術》(GB/T 34739—2017)，無菌采集犬血液不少于2mL,室溫或37℃靜置60min，4℃放置1h后, 6000r /min離心5min,收集上清,-20℃以下保存待檢。無菌采集犬唾液棉拭子放置于有PBS的2mL離心管中，4℃放置2h后，擠壓棉球，并離心取上清液，-20℃以下保存待檢。

1.3 主要設備

全波長酶標儀(Multiskan SKY)，熒光定量PCR儀(BIO RAD美國伯樂)，高速冷凍離心機(Thermo Fisher)。

1.4 主要試劑

狂犬病 ELISA 檢測試劑盒(上海艾研生物科技有限公司)、狂犬病熒光RT-PCR試劑盒(北京海森通生物科技有限責任公司)。

1.5 檢測方法

ELISA檢測方法，將分離后的血清，參照ELISA 試劑盒說明書進行操作。熒光RT-PCR檢測方法，所有采集的拭子參照熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書進行操作。

1.6 結果判定

ELISA檢測結果PI(阻斷率)>35%判斷為陽性。熒光RT-PCR檢測結果Ct值≤30.0，且出現特定的擴增曲線，判定為陽性。

2 結果

2.1 抗體檢測結果

282份犬血清進行免疫抗體檢測，結果見表1。總陽性率為74.1%。其中2011年、2013年、2015年分別為61.8%、56.0%、67.9%，低于70%為免疫不合格；2019年、2020年抗體陽性率較高，均超過90%，免疫效果良好。

表1 2011—2020年蒙自市7個街道(鄉、鎮)犬只狂犬病免疫抗體檢測結果

2.2 2011-2020年免疫抗體水平變化結果分析

如圖1可見，免疫抗體水平10年呈上升趨勢。其中2013年最低，2019年最高。

圖1 2011—2020年狂犬病免疫抗體水平趨勢圖

2.3 抗原檢測結果

由表2可見，124份犬唾液棉拭子檢測結果，2017年和2020年陽性率均為23.1%，表明該地區有犬感染狂犬病病毒，并出現發病犬傷人的情況。

表2 2011—2020年犬狂犬病抗原檢測結果

2.4 地理分布

根據對抗原陽性樣品的來源追蹤，發現抗原陽性樣品來自西北勒和期路白2個鄉，且陽性樣品數均為3份，其他街道(鄉、鎮)均未檢出抗原陽性樣品。

2.5 年齡分布

西北勒和期路白2個鄉出現狂犬病發病犬咬人情況，對被咬傷的12人進行年齡調查，結果顯示2～8歲有3人，24～45歲有4人，50～86歲有5人，成年人的占比高于未成年人，這可能與被咬傷者的活動能力和活動軌跡有一定關系。

3 討論

3.1 蒙自市7個街道(鄉、鎮)發病犬流行病學調查結果

在對發病犬和被病犬咬傷病例的調查中發現，時間在5—9月，此時正處于夏秋季節，天氣炎熱，犬易煩躁發狂，這一結果與其他地區報道的病例多發生在氣候溫暖的季節，具有明顯的季節性特征[7，8]相符合，發病犬出現在蒙自市相對較偏遠山區鄉，且發病犬未經免疫。有報道，我國農村犬狂犬病免疫率為48.7%，城市中犬的整體免疫率約為59.3%[6]，農村地區的免疫率低于城市。狂犬病目前尚無特效治療方法，只能依靠疫苗免疫預防，該地犬發病可能與未經疫苗免疫有直接聯系，增加了狂犬病發病概率。本次抗原檢測2017年有3例犬狂犬病發病病例出現且咬傷8人，有資料顯示，我國因患狂犬病致死案例就有90例，僅次于印度居世界第二[9]。狂犬病病毒的傳播途徑多種多樣，可通過舔咬直接接觸傳播，也可污染周圍環境，造成間接傳播[10]，同群犬中可能通過相互舔咬或污染環境而造成交叉感染。

3.2 狂犬病疫苗免疫中存在的問題

2011—2020年抗體陽性率基本呈現逐年升高趨勢，2013 年最低，2019年最高，其次是2020年，出現這種情況可能與使用疫苗的種類有關，2019年、2020年均使用狂犬病弱毒疫苗，其他年份均使用狂犬病滅活疫苗，陳玉華[11]在試驗中得出結論，PRRS弱毒疫苗的免疫效果明顯優于滅活苗。盧毅[12]指出高致病性豬藍耳病弱毒疫苗的抗體水平和抗體上升速度較快,免疫作用較強,在使用時可以優先考慮弱毒疫苗。弱毒疫苗具有免疫原性好、免疫期長等特性，結合蒙自市7個街道(鄉、鎮)的疫苗免疫合格率，在狂犬病的免疫預防時，應該優先采用弱毒疫苗進行免疫。

3.3 狂犬病的危害及防控

此次抗體檢測分析，每年采集到的樣本量較少，可能會造成抗體檢測結果有誤差，但是也能說明蒙自市狂犬病免疫抗體陽性率逐年增加；抗原檢測結果暴露出狂犬病在該地區存在，且狂犬病的危害較為嚴重，不僅是對易感動物，人也容易被病毒攜帶動物咬傷、抓傷，導致狂犬病的發生。狂犬病的防控應按照不同地區制定不同的狂犬病免疫程序，每年有計劃地開展狂犬病免疫抗體和病原學監測，及時掌握免疫效果和疫情動態。同時，定期開展狂犬病流行病學調查，掌握犬只養殖情況和免疫情況，分析狂犬病防控過程中存在的問題及疫情風險因素，提出科學防控方案。加強狂犬病對社會公共安全危害的宣傳力度，提高人們對狂犬病的認知度，增強人們對犬只咬傷、抓傷的處理意識，完善規范養犬管理制度，要求對所有犬只進行拴養，降低發病風險。增強人們的防護意識，注重環境消毒工作，對疑似發病犬或死亡犬進行上報，集中到固定地點進行嚴格消毒并無害化處理，不隨意丟棄，不私自處理，以免造成疫病傳播。