三線定量膠體金免疫親和試紙法定量中藥飲片中黃曲霉毒素B1及B1、B2、G1、G2總量的研究

范妙璇，傅欣彤，陳奕菲，陳思妮，陳 晶，張 婷，陳有根

·藥材與資源·

三線定量膠體金免疫親和試紙法定量中藥飲片中黃曲霉毒素B1及B1、B2、G1、G2總量的研究

范妙璇，傅欣彤*，陳奕菲，陳思妮，陳 晶，張 婷，陳有根

北京市藥品檢驗所，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，中藥成分分析與生物評價北京市重點實驗室，北京 102206

利用三線膠體金側流向免疫色譜技術，針對中藥特點對樣品前處理和檢測曲線進行研究，建立快速、準確的定量測定中藥飲片中黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2總量的方法，迅速檢測中藥飲片中黃曲霉毒素的污染程度。利用膠體金免疫親和法建立《中國藥典》2020年版規定限度的24種中藥飲片中黃曲霉毒素測定方法，進行方法學驗證，并對60種中藥飲片，共計195批次樣品進行分類測定。同時利用液質聯用（三重四級桿質譜法）對上述樣品進行定量檢測，并比對2種檢測方法。采用配對檢驗法比較2種方法的檢測結果是否存在顯著性差異；通過加入其他真菌毒素對試紙條的特異性進行考察。通過膠體金側流向免疫色譜技術測定中藥飲片中黃曲霉毒素含量，膠體金方法和液質聯用方法檢測結果一致，無顯著性差異，加樣回收率為80.3%～119.7%，與黃曲霉毒素M1和M2、赭曲霉毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮等其他真菌毒素沒有交叉反應。單獨研究黃曲霉毒素B1與B1、B2、G1和G2總量之間無交叉干擾，且其含量測定符合《中國藥典》2020年版規定的標準檢驗要求。膠體金檢測方法可以準確、定量、快速檢測中藥飲片中黃曲霉毒素含量。該方法具有簡單、快捷和低毒等優點。

黃曲霉毒素；三線膠體金側流向免疫色譜技術；膠體金免疫親和法；中藥飲片；液質聯用法；赭曲霉毒素；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇；玉米赤霉烯酮

真菌毒素污染被世界衛生組織列為食源性疾病的重要根源，其中黃曲霉毒素的危害最大[1-3]。黃曲霉毒素（aflatoxins，AFTs）是黃曲霉和寄生曲霉等菌種產生的次生代謝產物，是一類化學結構類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物，以黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）、黃曲霉毒素B2（aflatoxin B2，AFB2）、黃曲霉毒素G1（aflatoxin G1，AFG1）、黃曲霉毒素G2（aflatoxin G2，AFG2）的危害和毒性最大[4-5]。1993年AFTs被世界衛生組織的癌癥研究機構劃定為I類致癌物[6]。AFTs是一類毒性極強的物質，其毒性相當于氰化鉀的10倍、砒霜的68倍，可引起肝臟的急慢性損害，同時還對腎臟等其他多種組織器官造成嚴重損害,并具有致癌、致畸、致細胞突變的“三致”作用[7-10]。因此各國相繼制定了食品中AFTs限量的法規，以保護健康[11-15]。

為了加強中藥材的質量控制，國家食品藥品監督管理局增加了中藥材的安全性指標控制項目，尤其是加強對中藥材中AFTs的控制，《中國藥典》2020年版中增加了AFTs的檢查方法，并針對24種中藥材及飲片開展AFTs檢查，并明確規定了AFB1的限量不得超過5 μg/kg、AFTs總量（以AFB1、AFB2、AFG1、AFG2總量計）的限量標準為10 μg/kg[16]。

目前，AFTs的檢測方法有高效液相色譜法（HPLC）、薄層色譜法（TLC）[17-26]和酶聯免疫吸附法（ELISA）[27]。液相色譜質譜聯用法，尤其是三重四極桿質譜檢測器具有靈敏度高、特異性強、選擇性好、抗基質背景干擾能力強等特點，多用于復雜基質的檢測[28-33]，其目前也被《中國藥典》2020年版四部AFTs檢查法作為仲裁的驗證法應用[16]。《中國藥典》中規定的儀器檢測方法雖然準確，但標準檢驗方法，前處理復雜，液相及質譜法檢測儀器昂貴，飲片生產經營企業檢測均有一定的困難，無法滿足廉價、快速現場檢測的要求。在檢測黃曲霉菌技術的發展中還有膠體金免疫色譜法、毛細管電泳法、生物傳感器法、熒光免疫分析熒光偏振免疫分析法、膜基質免疫分析法、免疫芯片檢測法等[34-35]。膠體金技術檢測AFTs的方法具有快速、簡便、低毒等優勢，近年來開始應用于糧食飼料領域[36-39]，其不僅能夠檢測糧油、飼料、水稻以及玉米等谷物中AFB1、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1等微生物毒素，還檢測牛奶中三聚氰胺、水產品中氯霉素和硝基呋喃代謝物等非法添加劑、食物中副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌以及農藥重金屬的殘留[40-41]。但是中藥中膠體金快速檢測受到基質干擾問題非常大。根據研究發現不同的中藥基質AFT污染差異性較大，中藥材柏子仁與薏苡仁本身所含有的成分可以為霉菌的生長提供充足的養分，產毒真菌在這2種油脂與淀粉類基質中容易大量繁殖，導致AFT污染率高[42]；大棗等提取液較黏的樣品，存在糖、黏液質和大分子蛋白等基質的干擾；陳皮、使君子、檳榔、蜈蚣等色素干擾較大的樣品都會產生假陽性。所以亟需建立適用于中藥檢測的特殊前處理方式及結果矯正曲線等新的膠體金AFTs檢測方法研究。

膠體金技術又稱側流向免疫色譜技術，是以膠體金作為示蹤標記物應用于樣品中待測物檢測的一種免疫檢測技術，可用于樣品中待測物質的快速定性或定量檢測，是一種穩定、靈敏的檢測方法[43-45]。其反應原理為試樣提取液中的AFTs與檢測條中的膠體金微粒發生反應，AFTs與膠體金微粒的結合物以及游離的膠體金微粒在側流作用下移動，當到達檢測線時，包被的抗原與游離膠體金微粒結合，膠體金微粒富集后呈現紅色，其顏色深淺與試樣中AFTs的含量相關。用配套讀數儀測定檢測條上檢測線和質控線顏色深淺，根據顏色深淺和讀數儀內置標準曲線計算出試樣中AFTs的含量[46-47]，通常只能進行定性檢測，無法準確定量；而市場上少數可用于定量測定的二線試紙存在無法抗基質背景干擾而出現假陽性率高、定量曲線不穩定、且檢測范圍較窄，無法稀釋后檢測等問題。而本方法中使用的AFTs定量檢測條，則針對這一情況在技術上做了改進，增加了一條檢測線，形成三線定量檢測條，即包括2條檢測線和1條質控線，同時使用讀數儀，實現待測樣品的準確定量。三線定量檢測條的意義在于可以增加定量結果的準確性和穩定性，同時能夠增加定量檢測的范圍，檢測范圍較其他膠體金檢測條更寬。

此外與傳統食品檢測不同，中藥的基質背景復雜，色素黏液質及中藥中不同有效成分（如黃酮類、蒽醌類、菲醌類化合物等）都會給膠體金檢測帶來不同程度的影響。根據此情況，研發出幾種不同的前處理方法，分別解決此問題，以使膠體金可以作為一種中藥AFTs通用的檢測方法。并且針對中藥基質背景干擾的問題，重新對內部工作曲線進行矯正，針對中藥精確度要求高，含量范圍大等特點本研究開發了3個讀數曲線進行低、中、高3個質量濃度的檢測。該研究利用競爭法原理，在傳統免疫分析的基礎上引入膠體金快速檢測方法，發展出AFTs膠體金免疫快速定量檢測技術。該方法實現了簡單、靈敏、準確、快捷、低毒等優點，10～30 min完成前處理，10 min內可完成1～4個樣品的定量檢測，順應了快速檢測的發展方向。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

ROSA定量讀數儀、ROSA 45 ℃恒溫孵育器、黃曲霉毒素全封閉三線定量檢測條、黃曲霉毒素B1全封閉三線定量檢測條購自北京中檢葆泰生物技術有限公司；IKA A11basic中藥粉碎機、VORTEX 2渦旋振蕩儀，購自德國IKA公司；XPE204千分之一分析天平，購自德國賽多利斯公司；DT5-2B離心機，購自北京時代北利離心機有限公司；實驗用水為高純水，甲醇、乙腈均為色譜純。

賽默飛世爾超高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜儀（UHPLC-TSQ Quantum），美國賽默飛世爾公司，配有二極管陣列檢測器（PDA）、電噴霧離子源（ESI）、Xcalibur工作站等。

1.2 樣品與對照品

共收集河北、安徽、江蘇、云南、天津、重慶、北京等省市的市售遠志、大棗、使君子、麥芽、柏子仁、蓮子、桃仁、酸棗仁、薏苡仁、檳榔、僵蠶、全蝎、水蛭、肉豆蔻、陳皮、地龍、胖大海、決明子、蜈蚣、蜂房、九香蟲、延胡索、土鱉蟲、馬錢子等60種中藥飲片樣品，每個品種2個批次。共計120個批次。經北京市藥檢所杜小偉主管藥師鑒定均為正品，具體信息見表1。

表1 樣品信息

續表1

對照品AFTB1（批號L19044A）、AFTB2（批號L18323B）、AFTG1（批號L15331C）、AFTG2（批號L15391A）、AFTM1（批號L19082M）、AFTM2（批號1I00F12）、伏馬毒素B1（批號L18183F）、赭曲霉毒素A（批號L19122A）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（批號1I00F04）、玉米赤霉烯酮（批號L18351Z），以上對照品質量分數均≥98%，均購自美國Supelco公司。

2 方法

2.1 樣品準備

參照《中國藥典》2020年版藥材和樣品取樣法（通則0211）進行取樣。取代表性的樣品50 g，用粉碎機將樣品粉碎至全部通過二號篩，充分混合均勻。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 樣品提取方法1 遠志、大棗、使君子、麥芽、柏子仁、蓮子、桃仁、酸棗仁、薏苡仁、僵蠶、水蛭、全蝎、巴戟天、人參、太子參、紅參、紅花、何首烏、蒲公英、甘草片、牛膝、板藍根、黃芪、法半夏、澤瀉、淡豆豉、延胡索、椒目、六神曲、神曲。

取代表性均勻粉末（過二號篩）樣品，精密稱取樣品2 g至離心管中；加入4 mL（遠志、大棗、使君子、麥芽、柏子仁、蓮子、桃仁、酸棗仁、薏苡仁、僵蠶、水蛭、全蝎、巴戟天、人參、太子參、紅參、紅花、何首烏、牛膝、板藍根、法半夏、澤瀉、淡豆豉、延胡索、椒目、六神曲、神曲）或6 mL（蒲公英、甘草片、黃芪）70%甲醇，渦旋振蕩2 min；4500 r/min離心10 min（離心后的樣品在2 h內使用）；精密量取100 μL離心后的上清液至含有1.0 mL黃曲霉稀釋緩沖液的離心管中，作為供試品溶液（樣品上清液加入稀釋緩沖液中如果有沉淀，可充分混勻后進行離心，取離心后上清液檢測）。

2.2.2 樣品提取方法2 肉豆蔻、胖大海、地龍、梔子、三七、魚腥草、車前草、焦神曲、金銀花、炒白術、蜂房、土鱉蟲、玉竹、九香蟲、白茅根、知母、白花蛇舌草、茯苓、枳殼、馬錢子、炒枳殼。

取代表性均勻粉末（過二號篩）樣品，精密稱取樣品2 g至離心管中；加入4 mL（肉豆蔻、胖大海、梔子、三七、焦神曲、金銀花、炒白術、蜂房、土鱉蟲、玉竹、九香蟲、白茅根、知母、白花蛇舌草、茯苓、枳殼、馬錢子、炒枳殼）或6 mL（地龍、車前草）或8 mL（魚腥草）甲醇（可根據樣品特性加大提取液比例），渦旋振蕩2 min；4500 r/min離心10 min（離心后的樣品在2 h內使用）；精密量取100 μL離心后的上清液至含有1.0 mL黃曲霉的稀釋緩沖液（聚山梨酯20-磷酸鹽緩沖液）的離心管中，充分混勻，10 000 r/min離心5 min，作為供試品溶液（樣品上清液加入稀釋緩沖液中如果有沉淀，可充分混勻后進行離心，取離心后上清液檢測）。

2.2.3 樣品提取方法3 決明子、蜈蚣、銀杏葉、陳皮、虎杖、檳榔。

取代表性均勻粉末（過二號篩）樣品，精密稱取樣品2 g至離心管中；加入4 mL甲醇溶液，渦旋振蕩2 min；4500 r/min離心10 min；取上清液過NH2鍵合硅膠（500 mg/3 mL）萃取小柱，收集濾液；精密量取100 μL濾液至含有1.0 mL 黃曲霉稀釋緩沖液的離心管中，充分混勻，作為供試品溶液（樣品上清液加入稀釋緩沖液中如果有沉淀，可充分混勻后進行離心，取離心后上清液檢測）。

2.2.4 樣品提取方法4 大黃、大青葉、黃連。

取代表性均勻粉末（過二號篩）樣品，精密稱取樣品2 g至離心管中；加入10 mL 85%乙腈溶液，渦旋振蕩2 min；4500 r/min離心10 min；取上清液過NH2鍵合硅膠固相萃取柱（500 mg/3 mL），收集濾液；精密量取2.5 mL濾液，用20 mL水進行稀釋，混勻稀釋液；移取醇活化C18固相萃取柱（500 mg/3 mL）（3 mL甲醇及3 mL水分別淋洗小柱使活化），把混勻后的稀釋液全部過活化過的C18固相萃取柱，然后用5 mL水淋洗柱子；用1 mL甲醇洗脫C18固相萃取柱，收集洗脫液；精密量取100 μL洗脫液至含有1 mL黃曲霉稀釋緩沖液的離心管中，充分混勻，此為一次稀釋液，用于檢測。

2.3 供試品溶液稀釋液的制備

如果供試品溶液質量分數超過30 ng/g需要進行二次稀釋：精密量吸取“2.2”項方法制備的供試品溶液300 μL至含有1.0 mL黃曲霉稀釋緩沖液的離心管中，充分混勻，作為供試品溶液稀釋液。

2.4 膠體金免疫色譜方法定量檢測

取ROSA黃曲霉毒素定量檢測條和AFTs稀釋緩沖液，恢復至室溫（20～25 ℃）；孵育器溫度 （45±1）℃。緩慢移取300 μL稀釋的提取液檢測條樣品室中。孵育5 min，孵育結束后，取出檢測試紙條放至室溫下，水平放置10 min。將檢測試紙條插入讀數儀。選擇對應頻道，選擇相應的AFTs讀數，讀取結果。該方法的檢測范圍為0～150 μg/kg，共3個讀數頻道。頻道1讀取質量分數低于10 ng/g的樣品，靈敏度為0.01 ng/g；頻道2讀取質量分數10～30 ng/g的樣品，靈敏度為1 ng/g；頻道3讀取質量分數為30～150 ng/g的樣品，靈敏度為1 ng/g。

2.5 液質聯用色譜儀（LC/MS-MS）比對檢測實驗方法

2.5.1 供試品溶液的制備 取供試品粉末約15 g（過二號篩），精密稱定，置于均質瓶中，加入氯化鈉3 g，精密加入70%甲醇溶液75 mL，高速攪拌2 min（攪拌速度大于11 000 r/min），離心5 min（離心轉速2500 r/min），精密量取上清液15 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，量取續濾液20.0 mL，通過免疫親和柱，體積流量3 mL/min，用水20 mL洗脫，洗脫液棄去，使空氣進入柱子，將水擠出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2 mL量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5.2 色譜、質譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為10 mmol/L醋酸銨水溶液-甲醇，梯度洗脫：0～4.5 min，35%～85%乙腈；4.5～6.0 min，85%～100%乙腈；6.0～6.5 min，100%～35%乙腈；6.5～10.0 min，35%乙腈；柱溫25 ℃；體積流量0.3 mL/min。

以三重四極桿串聯質譜儀檢測；電噴霧離子源（ESI），釆集模式為正離子模式；各化合物監測離子對和碰撞電壓（CE）見表2。

2.5.3 系列混合對照品溶液的制備 精密量取AFTs混合對照品溶液（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的標示質量濃度分別為1.0、0.3、1.0、0.3 μg/mL）適量，用70%甲醇稀釋成含AFB2、AFG2質量濃度分別為0.03、0.06、0.12、0.24、0.48、0.96、1.92、2.88 ng/mL，含AFB1、AFG1質量濃度分別為0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、3.2、6.4、9.6 ng/mL的系列對照品溶液，即得。參照《中國藥典》2020年版四部通則2351 AFTs測定法第二法進行檢測。

表2 AFB1、AFB2、AFG1、AFG2對照品監測離子對、碰撞電壓參考值

3 結果與分析

3.1 方法專屬性

膠體金側流向免疫色譜快速定量檢測方法特異性實驗。

3.1.1 AFB1特異性驗證實驗 選取空白70%甲醇（平行6份），蓮子、薏苡仁、地龍、酸棗仁陰性樣品（平行2份），加入AFB1、AFB2、AFG1、AFG2混合對照品溶液（質量分數分別為5、20、50 μg/kg）、AFM1對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、AFM2對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、玉米赤霉烯酮對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、伏馬毒素B1對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、赭曲霉毒素A對照品溶液（質量分數為30 μg/kg），除添加AFTs對照品的樣品可以檢測出AFTs外，其余添加樣品測定結果均為陰性，結果見表3。

3.1.2 AFTs總量特異性驗證實驗 選取空白70%甲醇（平行6份），蓮子、薏苡仁、地龍、酸棗仁陰性樣品（平行2份），加入AFB1對照品溶液（質量分數分別為5、20、50 μg/kg），AFB2、AFG1、AFG2混合對照品溶液（質量分數為30 μg/kg），AFM1對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、AFM2對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、玉米赤霉烯酮對照品溶液（質量分數為30 μg/kg）、伏馬毒素B1對照品溶液（質量分數為30 μg/kg），赭曲霉毒素A對照品溶液（質量分數為30 μg/kg），除添加AFTs對照品的樣品可以檢測出AFTs外，其余添加樣品測定結果均為陰性，結果見表4。

3.2 膠體金側流向免疫色譜快速定量檢測方法穩定性實驗

將空白樣品進行加標，目標質量分數分別為2.5、5、8、10、50、80、130 μg/kg。分別做6個平行，置于室溫下[48]進行樣品檢測。經系列數據分析發現，實驗孵育結束后，將膠體金條水平放置10 min，可以觀察到膠體金條的檢測線和質控線顯色清晰，且穩定性檢測結果RSD＜5%，說明放置10 min讀數檢測方法的穩定性良好。檢測結果見表5。

表3 AFB1特異性驗證實驗結果(n = 6)

ND-未檢測到

ND-not detected

表4 AFTs總量特異性驗證實驗結果(n = 6)

表5 穩定性試驗結果(n = 6)

3.3 加樣回收率試驗

3.3.1 AFB1 取樣品2.0 g，共9份，根據不同樣品本底的結果，選擇低、中、高3水平分別添加對照品總質量分數為5、20、50 μg/kg的對照品，每個加標水平平行3份，按“2.2”項方法制備供試品溶液并測定，計算各加樣水平樣品的加樣回收率和RSD，結果見表6。結果表明，加樣回收率為80.3%～119.7%，RSD為0.1%～9.9%。

3.3.2 AFTs總量 取樣品2.0 g，共9份，根據不同樣品本底的結果，選擇低、中、高3水平分別添加對照品AFB1質量濃度為5、10、50 μg/kg的對照品，每個加標水平平行3份，按“2.2”項方法制備供試品溶液并測定，計算各回收率和相對標準偏差，結果見表6。結果表明，加樣回收率為80.6%～118.6%，RSD為0.4%～13.2%。

3.4 實際樣品的檢測

3.4.1 樣品的AFB1檢測 按照上述供試品溶液制備方法，進行實際樣品檢測。120批次樣品中，AFB1的檢出率為97.5%，但是檢測結果都低于5 μg/kg的限度。結果見表7。

3.4.2 樣品的黃曲霉總量的檢測 檢測按照上述供試品溶液制備方法，進行實際樣品檢測。120批次樣品中，AFTs總量的檢出率為90.8%。98.3%樣品低于10 μg/kg的限度，有2個批次超出，為遠志樣品。結果見表7。

3.5 膠體金側流向免疫色譜快速定量檢測方法準確性實驗

3.5.1 AFB1三線膠體金快速定量法與LC/MS-MS標準方法 分別對60種陽性樣品進行檢測，采用配對檢驗法比較2種方法的檢測結果是否存在顯著性差異。經計算，值為0.669，自由度為59，＞0.05，說明膠體金快速定量檢測方法與藥典中LC/ MS-MS標準方法之間無顯著性差異。結果見表7。

3.5.2 AFTs總量 三線膠體金快速定量法與LC/MS-MS標準方法分別對60種中藥飲片的61批次樣品（其中遠志樣品為2批次）進行平行比對檢測，采用配對檢驗法比較2種方法的檢測結果是否存在顯著性差異。經計算值為?0.053，自由度為59，＞0.05，說明三線膠體金快速定量檢測方法與藥典中LC/MS-MS標準方法之間無顯著性差異。結果見表7。

表6 60種中藥樣品三線膠體金AFTs檢測及方法學驗證(n = 3)

續表6

表7 60種中藥飲片 (61批次)中AFB1及AFTs總量的膠體金法和LC/MS-MS法檢測結果

續表7

4 討論

本研究對60種不同種類中藥飲片建立了三線膠體金側流向免疫色譜檢測AFB1及AFB1、AFB2、AFG1、AFG2總量方法，同時進行分類測定方法，對該本方法的穩定性、特異性、準確度以及加標回收率進行評價，同時跟藥典LC/MS-MS標準方法進行比對，差異較小。

經系列數據分析發現，實驗孵育結束后將膠體金條水平放置10 min讀數可以觀察到膠體金條的檢測線和質控線顯色清晰，且穩定性檢測結果良好。

試驗樣品中，多數檢測出AFTs，AFB1的檢出率為90.8%，AFTs總量的檢出率為97.5%。樣品中有2個批次AFTs總量超出10 μg/kg的限度，均為遠志樣品。除與儲藏運輸等條件有關，也與遠志特殊的炮制方法以及非產地加工等原因有關，在外源性安全控制中應加以注意。

研究結果可以看出，本方法的檢測結果和藥典LC/MS-MS標準方法結果相吻合，AFB1和總量2種方法的線性關系值為0.999 5與0.999 2。配對檢驗法表明膠體金快速定量檢測方法與藥典中LC/MS-MS標準方法之間無顯著性差異。加標嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素和赭曲霉毒素，檢測結果都顯示未檢出，特異性好，與其他真菌毒素沒有交叉反應，加樣回收率為80.3%～119.7%。

與LC/MS-MS方法相比，三線膠體金試劑條檢測法單、快捷，10 min內可完成1～4個樣品的定量檢測，順應了快速檢測的發展方向。同時操作簡單，無需專業人員培訓，檢測成本低，在醫院、藥店、中藥材及飲片企業以及藥材采購環節的實際工作中，無需特殊儀器設備和試劑，可以大批量檢測中藥材及中藥飲片中AFTs，極大的提高工作效率，具有較高的應用價值[49]。并且操作過程無需使用毒素對照品溶液，滿足各種檢測的需求，整個操作過程對環境無污染，對于檢測人員的健康起到最大程度的保護。

本研究建立適用于中藥檢測的特殊前處理方式、結果矯正曲線等新的方法研究，并為中藥行業定量控制AFTs，制定一種低毒快速環保的測定方法及相關標準具有很大意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quantitative study of total amount of aflatoxins B1 and B1, B2, G1 and G2 in Chinese herbal pieces by colloidal gold immunoaffinity method

FAN Miao-xuan,FU Xin-tong, CHEN Yi-fei, CHEN Si-ni, CHEN Jing, ZHANG Ting, CHEN You-gen

Beijing Key Laboratory of Analysis and Evaluation on Chinese Medicine, NMPA Key Laboratory for Quality Evaluation of Traditional Chinese Patent Medicine, Beijing Institute for Drug Control,Beijing 102206, China

A rapid and accurate method for quantitative determination of aflatoxins B1, B2, G1, and G2 in Chinese herbal pieces was established by using colloidal gold-side flow immunochromatography, and the pollution level of aflatoxins in prepared slices of Chinese herbal pieces was determined rapidly.The content of aflatoxin in 24 kinds of Chinese herbal pieces was determined by colloidal gold immunoaffinity method, and the results were compared by liquid mass spectrometry. The pairedtest was used to compare whether there was significant difference between the two methods. The specificity of the test strip was investigated by adding other fungal toxins. Tonga calculated the recovery rate.Theaflatoxin content in the Chinese herbal pieces were determined through side to immune colloidal gold chromatography technology. The test results of colloidal gold method and LC-MS/MS method were consistent. There was no significant difference, result in three levels in the low recovery rate was between 80.3% and 119.7%, and aflatoxin M1 and M2, ochre and aspergillus toxin, vomiting toxins and corn gibberellic ketene and other mycotoxins had no cross reaction, which met the requirements.Colloidal gold assay can be used for accurate, quantitative and rapid determination of aflatoxins in prepared slices. The method has the advantages of simplicity, rapidity and low toxicity.

total aflatoxins; immune colloidal gold lateral-flow technology; colloidal gold immune affinity method; Chinese herbal pieces; LC-MS method; ochratoxin; deoxynivalenol; zearalenone

R283.6

A

0253 - 2670(2021)17 - 5275 - 12

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.17.020

2021-07-23

范妙璇，研究方向為中藥質量分析。Tel: (010)52779500 E-mail: fmxzhy@126.com

傅欣彤，沈陽藥科大學54期中藥專業校友；北京市藥品檢驗研究院中藥室主任，主任藥師；現為國家藥典委員會第十一屆藥典委員；國家及北京市科技獎勵辦評審專家；北京市新藥審評專家；北京中醫藥大學兼職專碩導師；參與國家科技部、國家中醫藥管理局、北京市科委等課題項目；曾獲北京市科學技術二等獎1項，三等獎3項，北京市中醫管理局科技成果二等獎2項；從事藥品檢驗、藥品標準研究工作30年；主要研究方向為中藥質量控制。E-mail: fuxintong68@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]