海風(fēng)藤飲片質(zhì)量分析

刁興彬，王海燕，柴發(fā)永，李 強(qiáng)，陳俊亮

（1. 山東省食品藥品審評查驗(yàn)中心，山東 濟(jì)南 250014；2. 泰安市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，山東 泰安271000；3. 山東明仁福瑞達(dá)制藥股份有限公司，山東 濟(jì)南 250104）

海風(fēng)藤為少常用中藥，有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)的功能，用于治療風(fēng)寒濕痹、關(guān)節(jié)疼痛、筋脈拘攣、跌打損傷[1]。《中國藥典》2020年版規(guī)定海風(fēng)藤為胡椒科植物風(fēng)藤Piper kadsura(Choisy) Ohwi的干燥藤莖。夏、秋二季采割，除去根、葉，曬干[2]。風(fēng)藤主要分布于浙江、福建、廣東等省[3]。近期通過走訪多個藥材市場以及飲片使用單位，并收集樣品49份，發(fā)現(xiàn)海風(fēng)藤飲片質(zhì)量存在一定問題。采用按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與探索性研究結(jié)合的方法，對收集到的49批海風(fēng)藤質(zhì)量進(jìn)行評價，并對發(fā)現(xiàn)的問題提出建議，為進(jìn)一步加強(qiáng)對海風(fēng)藤的質(zhì)量管理提供依據(jù)。

1 按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)總體情況

1.1 樣品情況

海風(fēng)藤是我省2020年重點(diǎn)抽檢品種，共收集到樣品49批次，其中從醫(yī)療機(jī)構(gòu)收集樣品29批，占全部樣品批次的59.2 %；從批發(fā)零售單位收集樣品20批，占全部樣品批次的40.8 %。樣品來自全國36家生產(chǎn)企業(yè)，主要集中于安徽、河北、山東、湖北等省市。

1.2 檢驗(yàn)項(xiàng)目與依據(jù)

海風(fēng)藤現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，收載于《中國藥典》2020年版一部。檢驗(yàn)項(xiàng)目有性狀、鑒別（顯微鑒別、薄層鑒別）、檢查（水分、總灰分、酸不溶性灰分）、浸出物。

1.3 按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)情況

對收集到的49批樣品，按法定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)39批次符合規(guī)定，合格率為79.6 %，10批次不符合規(guī)定，不合格率為20.4 %，不合格項(xiàng)目為性狀，主要是摻入大量非藥用部位（主要為葉）。

1.3.1 性狀 按藥典標(biāo)準(zhǔn)，對海風(fēng)藤樣品的性狀進(jìn)行檢驗(yàn)。經(jīng)檢驗(yàn)，39批海風(fēng)藤飲片性狀符合規(guī)定，合格率79.6 %，10批海風(fēng)藤飲片性狀不符合規(guī)定，不合格率20.4 %。

圖1 海風(fēng)藤合格樣品

圖2 海風(fēng)藤不合格樣品

結(jié)果分析：海風(fēng)藤標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為干燥藤莖，在檢驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)16批次摻入了部分非藥用部位（葉），其中10批次海風(fēng)藤摻入大量非藥用部位葉。具體原因：其一估計是藥農(nóng)在采收時，不小心將藤莖上附著的葉子帶入；另一原因估計是藥農(nóng)為了增加樣品重量，故意將葉加入。

1.3.2 顯微鑒別 取本品粉末，置顯微鏡下觀察，對收集到的49批海風(fēng)藤，對抽驗(yàn)到的49批海風(fēng)藤樣品進(jìn)行顯微鑒別檢驗(yàn)，結(jié)果全部符合規(guī)定。

結(jié)果分析：粉末鑒別，是中藥飲片鑒別的重要手段。海風(fēng)藤樣品的粉末顯微特征較為明顯，石細(xì)胞、砂晶、木纖維、皮層纖維較為常見，特征明顯。但粉末鑒別也有其局限性，即在區(qū)分同科同屬的藥材飲片時，區(qū)分難度較大。

1.3.3 薄層色譜鑒別 按藥典標(biāo)準(zhǔn)，對抽驗(yàn)到的49批海風(fēng)藤樣品進(jìn)行薄層色譜鑒別。供試品色譜中，在與海風(fēng)藤對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果符合規(guī)定。

方法局限性：藥典標(biāo)準(zhǔn)薄層色譜鑒別，在供試品溶液的制備中需過硅膠G柱，薄層色譜用硅膠G的目數(shù)一般在1000目左右，用量為15 g，裝于內(nèi)徑為1.5～2 cm的層析柱，不易洗脫，操作性較差。

1.3.4 水分檢查 海風(fēng)藤藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：“水分含量不得過12.0 %”。所抽取49批樣品，所測數(shù)值均低于限度12.0 %，均符合規(guī)定，見圖3。由圖3可見，水分含量集中在6.0 %～10.0 %范圍內(nèi)，估計與抽樣時季節(jié)相對濕度較大有關(guān)系，藥材飲片的水分與儲運(yùn)環(huán)節(jié)有較大關(guān)系，必要時需進(jìn)行相應(yīng)降溫除濕措施，以保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)性、準(zhǔn)確性。

圖3 水分含量頻數(shù)分布圖

1.3.5 灰分檢查 海風(fēng)藤藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：“總灰分：不得過10.0 %；酸不溶性灰分：不得過2.0 %”。本次專項(xiàng)抽驗(yàn)對49批海風(fēng)藤進(jìn)行了總灰分、酸不溶性灰分檢查，結(jié)果全部符合規(guī)定，合格率100 %，見圖4、圖5。由圖4可見，所抽取的49批樣品，有17批總灰分在9.0 %以上，接近限度10.0 %；由圖5可見，有6批酸不溶性灰分在1.7 %～2.0 %之間，接近限度2.0 %，估計與采收過程有關(guān)，因風(fēng)藤原植物有部分匍匐枝，易引入泥沙。

圖4 總灰分頻數(shù)分布圖

圖5 酸不溶性灰分頻數(shù)分布圖

1.3.6 浸出物 按《中國藥典》2020年版四部通則2201浸出物測定法，以熱浸法測定，用稀乙醇作溶劑，測定抽取的49批海風(fēng)藤的浸出物，結(jié)果全部符合規(guī)定，合格率100 %，見圖6。由圖6可見，所抽取的49批樣品，浸出物測定值均高于10.0 %，多集中在12.0 %～18.0 %范圍區(qū)間。另有6批數(shù)值略高于含量限度10.0 %，估計與海風(fēng)藤的儲存有關(guān)。海風(fēng)藤屬胡椒科植物干燥藤莖，飲片含部分揮發(fā)油成分，儲存時間過長，夏季儲存溫度過高，均會導(dǎo)致海風(fēng)藤浸出物下降。

圖6 浸出物頻數(shù)分布圖

1.4 標(biāo)準(zhǔn)評價

海風(fēng)藤現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《中國藥典》2020年版一部。按藥典標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，從檢驗(yàn)結(jié)果及分析來看，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)雖可起到一定的質(zhì)量控制作用，但仍存在一些問題。

（1）中國藥典規(guī)定的海風(fēng)藤原植物，只有風(fēng)藤Piper kadsura(Choisy) Ohwi一種，但通過文獻(xiàn)查閱，記載海風(fēng)藤的原植物多達(dá)9科19種植物。經(jīng)市場調(diào)研，市場上銷售的并非只有風(fēng)藤一種，而是有胡椒科多種植物、松蘿類、異形南五味子類等多種地方習(xí)用品混淆存在，市場上抽驗(yàn)不合格率較高。按藥典標(biāo)準(zhǔn)，可將藥典用海風(fēng)藤與松羅類和異形南五味子類混淆品加以區(qū)分，但是很難將同科屬植物山蒟加以區(qū)分。

（2）粉末顯微鑒別，對于鑒別不同科屬植物來源的飲片具有很好的定性鑒別作用，但對于同科屬植物來源的飲片比較難以區(qū)分。海風(fēng)藤雖已經(jīng)炮制切厚片，但做橫切片進(jìn)行橫切面顯微鑒別仍可較易制備，考慮部分品種粉末顯微鑒別定性鑒別效果不好，且炮制后橫切片較易制備，藥典中宜加入橫切面顯微鑒別。

（3）薄層色譜鑒別方法可操作性較差，洗脫過程難度較大，可對鑒別方法進(jìn)一步優(yōu)化。

2 探索性研究總體情況

2.1 研究項(xiàng)目及目的

根據(jù)海風(fēng)藤法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)及藥材市場調(diào)研中發(fā)現(xiàn)的問題，緊緊圍繞飲片安全性、可控性，開展了以下兩個方面的探索性研究：（1）橫切面顯微鑒別。針對現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中無法將海風(fēng)藤與同科屬植物山蒟區(qū)分的情況，加入橫切面顯微鑒別； （2）薄層色譜鑒別方法優(yōu)化。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中薄層色譜鑒別方法復(fù)雜，洗脫過程不易控制，重現(xiàn)性不好，需進(jìn)行方法優(yōu)化。

2.2 探索性研究分項(xiàng)檢驗(yàn)

2.2.1 橫切面顯微鑒別 據(jù)文獻(xiàn)資料記載及對市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)，目前全國商品海風(fēng)藤主要為來源于非藥典品山蒟的藤莖，藥典品風(fēng)藤資源較少，商品來源較少。且按現(xiàn)有藥典標(biāo)準(zhǔn)，也無法將二者加以區(qū)分。擴(kuò)展性研究中加入了對飲片橫切面的鑒別研究。

測定方法：取本品橫切面，置顯微鏡下觀察：表皮細(xì)胞略成方形，外壁角質(zhì)層略厚。非腺毛1～2個細(xì)胞，長40～80 μm。皮層中棕色分泌細(xì)胞散在，維管束18～33個排列成環(huán)，韌皮束外側(cè)有纖維束及厚壁細(xì)胞群排成半月形，石細(xì)胞單個或數(shù)個散在于兩側(cè)，木質(zhì)部由導(dǎo)管、管胞、木纖維和木薄壁細(xì)胞組成。髓內(nèi)維管束6～13個排成一環(huán)，維管束內(nèi)外兩側(cè)有纖維束，髓內(nèi)有分泌細(xì)胞散在，中心有1黏液道。

測定結(jié)果與分析：取49批樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)5批基本符合上述橫切面鑒別特征，并初步判定為風(fēng)藤植物來源的海風(fēng)藤（藥典品），44批符合山蒟的橫切面鑒別特征，并初步判定為山蒟植物來源的海風(fēng)藤（習(xí)用品，浙海風(fēng)藤）。合格率為10.2 %，不合格率為89.8 %。樣品橫切面見圖7、圖8，橫切面區(qū)別點(diǎn)見表1。

表1 風(fēng)藤與山蒟藤莖橫切面區(qū)別

圖7 橫切面顯微鑒別（風(fēng)藤藤莖）

圖8 橫切面顯微鑒別（山蒟藤莖）

綜上，橫切面顯微鑒別可較為有效地對海風(fēng)藤進(jìn)行鑒定。

2.2.2 薄層色譜鑒別 《中國藥典》2020年版一部海風(fēng)藤薄層色譜鑒別項(xiàng)下供試品溶液制備方法為：“取本品粉末2 g，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2 ml使溶解，加入硅膠G 3 g，混勻，置水浴上揮干溶劑，加于硅膠G柱（15 g，內(nèi)徑為1.5～2 cm）上，用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1:1）混合溶液100 ml洗脫，收集洗脫液”，供試液在過硅膠G柱時，洗脫過程難以進(jìn)行，可操作性差，因此優(yōu)化為：取本品粉末2 g，加甲醇20 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至約2 ml，作為供試品溶液。并將藥典標(biāo)準(zhǔn)中展開劑三氯甲烷-丙酮-甲醇（7:1:0.5）優(yōu)化為石油醚（60～90 ℃）-丙酮（3:1），操作簡便，分離效果好。取6批樣品（樣品A為藥典品風(fēng)藤藤莖，樣品B、C、D為山蒟藤莖，樣品E、F為山蒟莖葉）進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見圖9。結(jié)果顯示，對供試品溶液制備方法及展開劑進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化，可得到較好分離效果。

圖9 海風(fēng)藤薄層色譜鑒別結(jié)果

綜上，經(jīng)優(yōu)化后的薄層色譜鑒別方法，操作簡單，斑點(diǎn)清晰，分離效果較好。

2.2.3 對習(xí)用品山蒟納入新版藥典的思考與建議 通過查閱《中藥志》、《常用中藥材品種整理與質(zhì)量研究》，并通過市場調(diào)查及專家咨詢，藥典品海風(fēng)藤（風(fēng)藤）植物資源分布狹窄，僅在福建、海南等地零星分布，植物資源極度匱乏，市場上存在的商品量極少。山蒟分布廣，資源量多，對市場上銷用海風(fēng)藤鑒定結(jié)果顯示，全國大多數(shù)省區(qū)應(yīng)用最廣、流通量最大的海風(fēng)藤，原植物為山蒟的藤莖。綜合研究結(jié)果表明，中藥海風(fēng)藤以來源于植物風(fēng)藤及山蒟的藤莖質(zhì)量最好，近年研究表明，風(fēng)藤和山蒟均含抗血小板聚集作用強(qiáng)的海風(fēng)藤酮、山蒟素等，且有研究表明風(fēng)藤和山蒟在化學(xué)成分和藥理作用方面相近。鑒于近年風(fēng)藤資源很少，商品海風(fēng)藤的主要來源為山蒟，建議在進(jìn)一步研究的基礎(chǔ)上，將山蒟增列為海風(fēng)藤的植物來源納入新版藥典標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)論

海風(fēng)藤的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《中國藥典》2020年版一部，檢驗(yàn)項(xiàng)目包括：性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分檢查、總灰分檢查、酸不溶性灰分檢查、浸出物含量測定。通過檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，海風(fēng)藤的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡單，不能有效控制藥材質(zhì)量，建議進(jìn)一步提高海風(fēng)藤飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。另鑒于近年風(fēng)藤資源匱乏，風(fēng)藤與山蒟化學(xué)成分與藥理作用相近，考慮能否將山蒟增列為海風(fēng)藤的植物來源納入新版藥典標(biāo)準(zhǔn)。

本次抽驗(yàn)的海風(fēng)藤樣品，按現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，合格率為79.6 %，不合格率為20.4 %；按探索性研究方法檢驗(yàn)，合格率僅為10.2 %，不合格率為89.8 %，風(fēng)險相對較高。海風(fēng)藤作為常用中藥品種，總體質(zhì)量狀況一般，存在一定風(fēng)險性。