利用質量控制和方法確認數據評定肉蓯蓉藥材中指標含量測量不確定度

李先芝，劉 洋，石 豪，關宏霞，林 露，嚴 玲，錢全全，胡 楊

(勁牌有限公司 中藥保健食品質量與安全湖北省重點實驗室，湖北 大冶 435100)

肉蓯蓉為列當科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanchetubulosa(Schenk) Wight 的干燥帶鱗葉的肉質莖[1]，被譽為“沙漠人參”，是中國傳統的名貴中藥材[2-5]。在2015年版《中華人民共和國藥典：一部》中規定，松果菊苷、毛蕊花糖苷是肉蓯蓉藥材的含量測定指標，其含量檢測采用高效液相色譜法進行測定。松果菊苷、毛蕊花糖苷作為肉蓯蓉藥材的質量控制指標，評定其含量測定不確定度對于評價肉蓯蓉藥材的質量有著重要意義。

按照《化學檢測領域測量不確定度評定利用質量控制和方法確認數據評定不確定度(RB/T 141 2018)》[6]，在期間精密度測量條件下，獲得肉蓯蓉的質量控制結果和方法確認數據，應用安德森-達林統計檢驗對測量系統正態性與獨立性假設進行檢驗，對期間精密度不確定度分量uR′和偏倚不確定度分量ub進行合并，最終計算出樣品水平下的合成標準不確定度uc與擴展不確定度U[7]，以一種相對簡單的方法對肉蓯蓉藥材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的測量不確定度進行了評定。

2 肉蓯蓉藥材含量檢測

肉蓯蓉藥材的含量檢測參照2015年版《中華人民共和國藥典：一部》“肉蓯蓉”項下“含量測定”進行：色譜條件與系統適用性試驗：以C18鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動相A，以0.1%甲酸溶液為流動相B，按表1中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為330 nm。理論板數按松果菊苷峰計算應不低于3 000[1]。

表1 流動相梯度洗脫條件

對照品溶液的制備：取松果菊苷對照品、毛蕊花糖苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，即得[1]。

供試品溶液的制備：取本品粉末(過四號篩)約1 g，精密稱定，置100 mL棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，搖勻，稱定重量，浸泡30 min，超聲處理40 min(功率250 W，頻率35 kHz)，放冷，再稱定重量，加50%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續濾液，即得[1]。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，得到對照品溶液與供試品溶液中各化合物的保留時間與峰面積，根據保留時間進行定性，峰面積進行定量，計算得到藥材中松果菊苷、毛蕊花糖苷的含量[1]。

3 測量系統的安德森-達林檢驗

實驗室根據高效液相色譜法(通則0512)，將肉蓯蓉藥材樣品(QCS樣品)納入日常檢測中，在期間精密度測量條件下，對肉蓯蓉藥材中的松果菊苷、毛蕊花糖苷含量進行不確定度評定。

實驗室在近2個月的時間內，得到24個測試結果(m=24，單位為%)，統計受控檢驗按下式計算，結果見表2。

表2 期間精密度條件下松果菊苷測量結果統計

(續表2)

表3 期間精密度條件下毛蕊花糖苷測量結果統計

(續表3)

4 期間精密度不確定度分量uR′的評定

當所用QCS樣品的測量涵蓋全部分析過程時，樣品水平下的uR′評定采用uR′=SR′，式中：SR′為期間精密度標準差。根據表2的統計信息，求得uR′松=SR′松=0.115%。根據表3的統計信息，求得uR′毛=SR′毛=0.06%。

5 偏倚不確定度分量ub的評定

偏倚不確定度分量的評定采用加標回收實驗分析進行。實驗室進行了肉蓯蓉藥材中50%、80%、100%、120%、150%、200%加標量的加標回收試驗，每個水平加標量做三平行?；厥章蕯祿姳?。

多水平的偏倚不確定度分量ub的評定采用公式進行計算，式中bi為第i個回收率與平均回收率的差值。由表4的數據計算得到ub松=0.023 1%；由表5的數據計算得到ub毛=0.026 1%。

表4 多水平的松果菊苷加標回收試驗數據

表5 多水平的毛蕊花糖苷加標回收試驗數據

6 擴展不確定度分量U的評定

在95%概率下，擴展不確定度按U=2uc=2計算。式中：U為擴展不確定度；uc為合成標準不確定度。

已知uR′松=0.115%，ub松=0.023 1%，由上式求得肉蓯蓉藥材中松果菊苷含量的測量不確定度合理估計值為：U=2=0.24%。

已知uR′毛=0.06%，ub松=0.026 1%，由上式求得肉蓯蓉藥材中毛蕊花糖苷含量的測量不確定度合理估計值為：U=2=0.13%。

7 討論

在期間精密度測定條件下，基于質量控制結果和方法確認數據，可算出期間精密度不確定度uR′，同時根據加標回收實驗結果，可以算出偏倚不確定度分量ub，即可得出合成標準不確定度uc和擴展不確定度U。

此種不確定度評定方法要求有充分的重復測量次數，所得到的不確定度具有統計學的嚴格性，更為客觀。期間精密度實驗數據為勁牌有限公司不同實驗室在不同時期檢測得到，且uR′的評定數據經過安德森-達林檢驗，證明整個檢測系統處于穩定受控狀態。

從擴展不確定度的評定結果看，測量不確定度主要來源于期間精密度不確定度分量。而期間精密度不確定度分量采用的是期間精密度條件下的標準差，表明實驗室環境條件的變化對檢測結果的影響較大，提示實驗室在日常質量控制工作中應加強此方面的控制，從而確保檢測結果真實、可信。