百藥煎質量標準研究

華麗萍

（常州市武進中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 常州 213161）

0 引言

百藥煎又名制百藥煎、百草煎，為漆樹科植物鹽膚木Rhus chinensis Mill.、青麩楊Rhus potanin Ⅱ Maxim.或紅麩楊Rhus pun-jabensis Stew.var.sinica (Diels) Rehd.et Wils.葉上的蟲癭,即五倍子，同茶葉、酒糟或酒曲等經發(fā)酵制成的塊狀物[1]，主要成分為五倍子中可水解鞣質水解后產生的沒食子酸[2-3]，具有清熱化痰，生津止渴等功效，臨床上可用于肺熱咳嗽，風火牙痛，口舌糜爛，久痢脫肛等癥的治療[4]。目前百藥煎在《浙江省炮制規(guī)范（2015 年版）》《四川省炮制規(guī)范（2015年版）》等地方標準中有收載，但是各版本質量標準檢查方法或檢查項均或多或少存在不合理之處，本研究通過對多批次百藥煎的性狀、鑒別、檢查（水分、總灰分、黃曲霉毒素）、沒食子酸含量測定、微生物限度等進行研究，從而建立一種科學、合理的評價百藥煎質量的標準及方法。

1 材料

1.1 儀器

Agilent1100 高效液相色譜儀（VWD 檢測器，美國安捷倫科技有限公司）；1/10 萬電子分析天平（BP-211D 型，德國Sartorius）；Agilent 1260 液相色譜儀（FLD 檢測器，美國安捷倫科技有限公司），METTLER XS-205 電子天平；醫(yī)用超聲波清洗儀（KQ-1000E 型，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

百藥煎（編號S1-18），經南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院劉輝主任鑒定為五倍子經發(fā)酵而制成的干燥曲塊，詳見表1。

表1 百藥煎樣品信息

沒食子酸對照品（購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-200803）；黃曲霉毒素混合對照品（購自中國食品藥品檢定研究院，批號：610001-201703）；聚酰胺-6-薄膜（購自國藥集團化學試劑有限公司，批號：20160906），五倍子對照藥材（購自上海源葉生物科技有限公司，批號：Z20A9B68266）。

乙腈、甲醇為色譜醇，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 性狀

所收集的18 批樣品中S11、S17 為灰白色塊狀物。氣微，味酸、澀、微甘；S6、S14、S16 為棕褐色塊狀物。氣微，味酸、澀、微甘；其他批均為黑褐色塊狀物。氣微，味酸、澀、微甘。規(guī)定本品性狀為：灰白色至黑褐色塊狀物，氣微，味酸、澀、微甘。

2.2 鑒別

取本品粉末0.2g，加甲醇10mL，超聲處理15min（功率280W，頻率53kHz），濾過，濾液作為供試品溶液。另取五倍子對照藥材0.5g，加甲醇10mL，超聲15min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。再取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1mL 含1mg 的溶液，作為對照品溶液。

照薄層色譜法（《中國藥典》2015 版四部附錄0502）試驗，吸取供試品1μL、對照藥材溶液，對照品溶液各3μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以75%乙醇-冰醋酸（50:1）為展開劑，展開，取出晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液顯色，日光下檢視。

2.3 檢查

2.3.1 水分

取供試品適量，照2015 版《中國藥典》四部通則0832 水分測定法（第二法）測定，結果見表2。

表2 18 批百藥煎水分、總灰分、黃曲霉毒素、沒食子酸含量測定結果

18 批樣品中最高水分9.37%，最低水分6.67%，平均水分為8.01%，以平均值的120%設限，規(guī)定本品的水分應不得過10.0%。

2.3.2 總灰分

取供試品適量，照2015 版《中國藥典》四部通則2302 灰分測定法（第一法，總灰分測定法）測定，結果見表2。

18 批樣品中最高總灰分3.12%，最低總灰分1.51%，平均總灰分為2.50%，以平均值的120%設限，規(guī)定本品的總灰分應不得過3.0%。

2.3.3 黃曲霉毒素

照黃曲霉毒素測定法（《中國藥典》2015 年版四部通則2351 第一法）測定。

結果所測的18 批樣品均未檢出黃曲霉毒素，但由于本品為發(fā)酵類中藥飲片，且所檢測的樣本量有限，因此仍將黃曲霉毒素檢查列入百藥煎質量標準。

2.4 含量測定

百藥煎主要成分為五倍子可水解鞣質水解后產生的沒食子酸，沒食子酸具有確切的抗炎、抑菌作用[5-7]，與百藥煎功效一致，因此通過測定沒食子酸的含量，可以有效的控制其質量。

2.4.1 對照品貯備液的制備

取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL 含178.04μg 的對照品貯備液，備用。

2.4.2 供試品溶液的制備

取百藥煎粉末（過四號篩，170103）約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理20min（功率280W，頻率53kHz），放冷，再稱定重量，以提取溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1～50mL 量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1%磷酸（15:85）為流動相；柱溫為30℃，檢測波長273nm，理論塔板數按沒食子酸峰計算應不低于3000。

2.4.4 線性關系考察

精密吸取“2.4.1”項下的對照品儲備液適量，加50%甲醇分別稀釋1、2、5、10、25、50 倍，制成質量濃度為4.45μg/mL、8.90μg/mL、17.80μg/mL、35.61μg/mL、89.02μg/mL、178.04μg/mL的對照品溶液，精密吸取各對照品溶液10μL，依法進樣，記錄峰面積。以進樣濃度為橫坐標（X，μg/mL），峰面積為縱坐標（Y），進行回歸，沒食子酸的線性回歸方程為Y=31.367，X=10.019，R2=1，表明沒食子酸在此濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.4.5 精密度試驗

精密吸取沒食子酸對照品溶液（35.61μg/mL）10μL 注入液相色譜儀，重復進樣6 次，沒食子酸峰面積的RSD 為0.32%。表明儀器的精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液及對照品溶液10μL，于0、2、4、8、12、24h 時分別進樣，每次進樣量10μL，測定，計算。對照品溶液中沒食子酸24h 內峰面積的RSD 為0.60%、樣品溶液中沒食子酸24h 內峰面積的RSD 為1.29%，表明溶液穩(wěn)定性良好。

2.4.7 重復性試驗

取百藥煎粉末（過四號篩，170103）約0.1g，共6 份，按“2.5.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項下方法進樣，測定，計算。結果，沒食子酸平均含量為45.12%，RSD 為0.58%。結果表明重復性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的百藥煎粉末（過四號篩，170103）約50mg，共6 份，精密加入相應量對照品，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項下方法進樣，測定，計算，結果見表3。

表3 加樣回收率試驗結果

試驗結果表明，該方法準確性良好。

2.4.9 含量測定

取百藥煎樣品，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項下方法進樣，測定，計算，沒食子酸含量（按干燥品計算）測定結果見表2。

測定的18 批百藥煎中沒食子酸含量為12.01%～52.83%，平均含量為39.89%，取平均值的80%設限，規(guī)定百藥煎中沒食子酸含量應不低于30.0%。

2.5 微生物限度

照微生物限度檢查法（《中國藥典》2015 版四部附錄1106）檢查，不得檢出沙門菌（10g），耐膽鹽革蘭陰性菌應小于104cfu（1g）。

18 批百藥煎樣品中未檢出沙門菌，耐膽鹽革蘭陰性菌檢查符合規(guī)定。

3 討論

性狀研究過程中發(fā)現(xiàn)，采用米酒曲發(fā)酵后所得百藥煎飲片顏色較白酒曲淺，同種酒曲發(fā)酵后切片干燥者較粉碎后壓片的飲片顏色深，而飲片顏色與其他指標之間無相關性，因此將本品性狀描述為：灰白色至黑褐色塊狀物。由于所檢查的各批次百藥煎樣品總灰分均小于5.0%且本品非根類藥材及制品，因此不進行酸不溶性灰分檢查[8-9]。研究發(fā)現(xiàn)《四川省中藥飲片炮制規(guī)范》及部分文獻研究中百藥煎沒食子酸含量測定方法參考藥典的水解法進行測定，即加4mol/L 的鹽酸水浴3.5h 后測定[10-13]。而采用水解法測定則極不科學，該法不能區(qū)分其是否經歷了發(fā)酵過程。在沒食子酸含量測定方法研究過程中我們對樣品處理方法進行了詳細研究，主要對提取溶劑、溶劑體積、提取次數、提取時間等進行考察后最終確定了百藥煎含量測定供試品處理方法[14-15]。

本標準研究過程收集了不同廠家、不同批號共計18 批百藥煎樣品，此外我們還制備了6 批以進行驗證，結果表明制訂的標準合理、可行，專屬性強，可為百藥煎質量標準的制訂提供依據。