實時熒光核酸恒溫擴增技術在臨床診斷女性生殖道感染中的應用價值

周丹，李惠貞，黃濤，張德明，谷大偉

（深圳市中醫院 檢驗科，廣東 深圳 518033）

0 引言

女性生殖道感染是常見婦科病，常因沙眼衣原體（CT）、淋病奈瑟菌（NG）、生殖支原體（MG）、解脲脲原體（UU）等病原微生物感染所致。可通過性行為、血源、母嬰等方式傳播，因女性生殖道較為脆弱，感染可致婦科腫瘤、流產、不孕不育、月經不調等嚴重并發癥，危害女性健康[1]。實時熒光核酸恒溫擴增技術（SAT）融合核酸恒溫擴增技術及實時熒光檢測技術，具備靈敏度高、特異性高、樣本被污染風險低等特點，可迅速、準確地檢測各類病原體[2]。本次研究通過對本院近一年女性生殖道感染患者進行SAT 檢測，以觀察生殖道感染患者中CT、NG、MG、UU4 類病原體感染情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019 年1 月至2020 年2 月我院就診的生殖道感染女性患者的宮頸分泌物或尿液標本共95份。患者20～55 歲，平均（37.63±8.32）歲；病程4～17d，平均（8.74±1.36）d。納入標準：①符合生殖道感染診斷標準者[3]；②伴有尿痛、腹痛、白帶異常增多等生殖道感染臨床癥狀；③經醫學倫理會批準且患方簽署知情同意書者。排除標準：近1周內有性生活史者。

1.2 樣本采集方法

由婦科醫生采用酒精棉球于宮頸表面擦拭清潔消毒后，使用無菌棉棒伸入宮頸內旋轉1 周并停留10s 后收集宮頸分泌物，放入生理鹽水中密封。尿液標本由患者自行留取送檢。

1.3 試劑及儀器

CT、NG、MG、UU 核酸恒溫擴增檢測試劑盒由上海朗賦實業有限公司提供[國食藥監械(準)字2014 第3400925 號]，采用羅氏cobas z480 熒光定量PCR 儀進行檢測。

1.4 檢測方法

參照試劑盒說明書設定陰性及陽性對照，將樣本與核酸提取物混勻，保持溫度60℃放置5min，于室溫靜置10min 后放于磁珠分離器上5min，洗滌兩次后保留磁珠與RNA 結合體并加入核酸反應液，并移至PCR 儀中，設定溫度60℃放置10min 后降溫至42℃放置5min，并添加42℃的SAT 酶液，保持溫度，實施恒溫擴增40min。選擇羧基熒光素作為熒光標記，設定溫度42℃，每分鐘收集1 次熒光信號，依照實時獲得的熒光信號出現的時間及強度得到檢測的病原體結果。

1.5 觀察指標

觀察以上4 種病原體陽性檢出率及其混合感染率，并分析比較不同臨床診斷及不同年齡段患者中各病原體檢出率結果差異。

1.6 數據分析

2 結果

2.1 4 種病原體陽性檢出率比較

95 例患者中，4 種病原體均有陽性檢出率，單純一種病原體感染64 例（67.37%），其中UU29 例（30.53%），CT16 例（16.84%），NG11 例（11.58%），MG8 例（8.42%）；混合2 種或3 種病原體感染患者有31 例（32.63%）。

2.2 4 種病原體混合感染率比較

在31 例混合2 種或3 種病原體感染中，CT+UU混合感染占比最高，共計14 例（14.74%），詳見表1。

表1 4 種病原體混合感染率比較[n（%），n=95]

2.3 不同診斷患者中各病原體檢出率比較

在不同臨床診斷中，診斷為陰道炎患者中UU 檢出率顯著高于宮頸炎及盆腔炎，差異具有統計學意義（P<0.05），MG、NG 及CT 檢出率比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

表2 不同診斷患者中各病原體檢出率比較[n（%）]

2.4 不同年齡段患者中各病原體檢出率比較

在不同年齡段中，年齡段在36～45 歲之間女性生殖道感染者中UU 陽性檢出率顯著高于其他年齡段（P<0.05），CT、NG 及MG 檢出率比較無明顯差異（P>0.05），見表3。

表3 不同年齡段患者中各病原體檢出率比較[n（%）]

3 討論

女性生殖道感染可增加HPV 及HIV 入侵的風險，還將影響其生育能力，嚴重威脅女性生命安全及心理健康[4]。給予快速、精確的診斷以便于患者及時得到相關治療，是目前臨床工作重要目標。

既往臨床檢測生殖道感染病原體常采取陰道分泌物或宮頸分泌物直接涂片，但缺乏敏感度及特異性，檢測結果準確度較低[5]。微生物培養法作為感染性疾病診斷金標準雖具有較高敏感度及特異性，但耗時長且成本高，不適宜臨床應用[6]。聚合酶鏈反應檢測則是對病原體DNA 進行檢測，但因DNA 穩定性較高，在檢測時可出現假陽性，影響臨床診斷[7]。SAT 技術將患者標本放置于RNA 保存液中，可防止RNA 降解，通過磁珠提取病原體RNA，將具有活性的病原體RNA 逆轉錄為cDNA 并與帶有熒光標記的探針特異性結合，通過儀器可直觀檢測病原體RNA擴增循環情況，通過陽性及陰性對照，提高了檢測的靈敏度及特異性，可同時對CT、NG、MG、UU 進行檢測，在減少污染的同時縮短檢測耗時[8]。

本次研究結果顯示95 例患者中，4 種病原體均有陽性檢出率，單純一種病原體感染64 例（67.37%），其中UU29 例（30.53%），CT16 例（16.84%），NG11例（11.58%），MG8 例（8.42%）；混合2 種或3 種病原體感染患者有31 例（32.63%）；在31 例混合2種或3 種病原體感染中，CT+UU 混合感染占比最高，共計14 例（14.74%）；診斷為陰道炎患者中UU 檢出率顯著高于宮頸炎及盆腔炎，差異具有統計學意義，MG、NG 及CT 檢出率比較，差異無統計學意義。這說明UU 是女性生殖道感染的主要病原體，且主要分布于患者陰道。分析原因認為UU 依靠自身攜帶的尿素酶，依靠分解尿素為其提供代謝所需能源。由于女性生殖道生理特征，UU 更易高度定居于女性陰道，且感染者多因無自覺癥狀而延誤治療，導致女性生殖道感染患者中UU 陽性檢出率較高[9]。本次研究結果還發現年齡段在36～45 歲之間女性生殖道感染者中UU 陽性檢出率顯著高于其他年齡段，CT、NG及MG 檢出率比較無明顯差異。這表明36～45 歲女性是生殖道感染高危人群，這可能因此年齡段人群處于性活躍期，且因相關健康知識缺乏，不注重性生活前后生殖道的清潔，從而導致病原體侵入感染。因此，醫務工作者應全面開展女性生殖道感染健康宣教，此外女性也應注意保持外陰清潔，性生活前后徹底清洗外陰，定期檢查，避免過早不潔性交[10-12]。

綜上所述，SAT 技術在女性生殖道感染中具有較好的應用效果，耗時短、成本低、污染小，具有較高的臨床推廣價值。