1例抗-E合并抗-Dia標本的鑒定*

趙曉明 朱馳 于思遠 吳文娟 楊冀

血型鑒定、抗體篩選、交叉配血是輸血前必做的三大常規項目。而在抗體篩選和鑒定環節，由于細胞譜的缺陷或方法學的原因常常會導致某些抗體的漏檢。Dia抗原是Diego血型系統中最重要的抗原之一，在不同人種中的出現頻率差異很大，在蒙古族人種中的陽性率明顯高于白種人和黑人，在亞洲人群中的出現概率較低[1，2]。本文對某醫院送檢至上海市血液中心參比實驗室的一份疑難標本進行了分析研究，探討較弱不規則抗體的鑒定方法，明確患者血清中存在的不規則抗體的特異性，以指導精準配血。

材料與方法

1 臨床資料 標本來自某患者，女，41歲，漢族，孕2產2，入院時的主訴為“經期延長伴經量增多9年，盆腔包塊9年”。2019年8月B超診斷左側囊塊，卵巢來源可能，以“卵巢囊腫，子宮憩室”收治入院?；颊呒韧幸淮屋斞罚瑹o藥物過敏史。體格檢查情況如下：入院體溫36.5℃，脈搏75次/分，呼吸20次/分，血壓109/75 mmHg，眼瞼膜蒼白，左附件捫及一直徑約5 cm包塊，無壓痛。腫瘤標志物檢查未見明顯異常，血常規示血紅蛋白77 g/L，擬手術治療。

醫院輸血科對患者標本進行了常規的輸血前檢測，包括ABO和RhD血型鑒定，抗體篩選，結果顯示凝膠卡法鑒定血型為O型Rh陽性，抗體篩選呈弱陽性。因血紅蛋白偏低，手術前備懸浮紅細胞2 U。為明確抗體特異性，將血樣送至上海市血液中心參比室做進一步的血清學檢測。

2 試劑 抗-A、抗-B（批號：20171227）、抗-D（IgM）（批號：20181810）、抗-c（批號：20183101）、抗-C（批號：20183001）、抗-e（批號：20183301）、抗-E（批號：20183201）、多特異性抗球蛋白試劑（批號：20185001）、單特異性抗-IgG試劑（批號：20185102）、單特異性抗-C3d試劑（批號：20185201）、凝聚胺試劑（批號：20197502）、篩選細胞（批號：20197034）、譜細胞（批號：20190808），以上試劑均來源于上海血液生物醫藥有限公司；進口譜細胞（批號：731911，731915，731917，匈牙利，REAGENS）；IgG致敏細胞（批號：20190625，自制）；抗-IgG單抗卡（批號：IGC055F，奧森多）；抗-Dia（批號：32810-A2，英國，Lorne）。

3 方法

3.1 血型鑒定采用試管法鑒定ABO正反定型、Rh血型。

3.2 直接抗人球蛋白試驗采用試管法檢測。

3.3 不規則抗體篩選及鑒定采用鹽水試管法、抗人球蛋白法、柱凝集法、聚乙烯二醇（polyethylene glycol，PEG）增強法鑒定。抗體鑒定采用譜細胞與患者血清進行反應，根據譜細胞的反應格局，確定抗體的特異性；然后檢測患者的紅細胞抗原表型進行驗證。鹽水試管法、抗人球蛋白法、柱凝集法均按照《全國臨床檢驗操作規程》進行操作。PEG增強法的簡易操作流程為：在小試管中依次加入2滴患者血清、1滴譜細胞和4滴PEG，置于37℃水浴箱中孵育15 min后，用生理鹽水洗滌紅細胞3次后扣干，滴加1滴生理鹽水懸浮紅細胞，取30 μL紅細胞懸液加入抗人球蛋白卡中，離心觀察結果（此為卡式法），剩余的紅細胞懸液在試管內加1滴抗人球蛋白試劑，搖勻后離心觀察結果（此為試管法）。

3.4 效價測定采用經典抗人球蛋白法、凝聚胺法、PEG增強法等測定。將患者的抗血清用生理鹽水進行倍比稀釋，保證每個試管內的液體充分混勻，然后滴加相應的紅細胞懸液進行反應，肉眼觀察試驗結果，以出現±凝集強度的首管稀釋度的倒數作為抗體效價。

3.5 交叉配血采用鹽水法、凝聚胺法、柱凝集法三種方法配血。按照《全國臨床檢驗操作規程》進行操作。

結 果

1 血型鑒定患者血型為O型，CCDee，Di（a-）。

2 直接抗人球蛋白試驗多特異性抗人球蛋白、單特異性抗IgG、單特異性抗C3均為陰性。

3 抗體篩選試驗鹽水法、聚凝胺法均為陰性。

4 抗體鑒定結果

4.1 患者血清與國產譜細胞反應，鹽水法、聚凝胺法、抗人球蛋白法均未出現凝集反應；用PEG增強后經典抗人球蛋白法出現疑似抗-Dia的格局，而柱凝集法出現抗-E的反應格局，且符合劑量效應，反應格局見表1。

表1 患者血清與國產譜細胞反應結果（批次：20190808）

4.2 選擇一套進口譜細胞用PEG增強法與患者血清反應，2、4、9號細胞出現凝集，反應格局見表2。結果表明患者血清中存在抗-E抗體。但此套譜細胞中不含有Dia抗原，故另選兩套不同批次的均含有Dia抗原的進口譜細胞與患者血清反應，用PEG增強后，加入抗IgG單抗微柱卡中，與7號細胞（Dia抗原陽性）均呈現4+的凝集。結果表明患者血清中還存在抗-Dia。

表2 患者血清與進口譜細胞反應結果（批次：731915）

5 抗體效價測定如表5所示，不同檢測方法的抗-Dia效價有所差別?？?E的效價用經典抗人球蛋白法檢測結果＜1，PEG（卡）檢測結果為1。

表5 抗-Dia效價

6 交叉配血結果 選擇Dia陰性、Ec抗原陰性的懸浮紅細胞配血，鹽水、凝聚胺、柱凝集三種介質中均無凝集無溶血?；颊咻斪⒑笪匆娸斞涣挤磻?/p>

表3 患者血清與進口譜細胞反應結果（批次：731911）

表4 患者血清與進口譜細胞反應結果（批次：731917）

討 論

Dia抗原屬于Diego血型系統，幾乎為蒙古血統人種特有。至今，在Diego血型系統中，有22個抗原已被發現，其中Dia與Dib，Wra和Wrb最為重要?？?Dia一般都是通過免疫刺激產生的，研究表明抗-Dia可以引起嚴重的輸血反應和新生兒溶血癥[3-6]。本例患者有輸血史及妊娠史，我們推測其抗-Dia可能是因為妊娠了Dia陽性的孩子或者輸了Dia陽性的血液誘導產生。

該患者因抗篩陽性而送檢，但參比室抗體篩選結果為陰性，與醫院檢測結果不符，可能是譜的缺陷或方法學的原因導致抗體的漏檢。首先考慮是否有抗-Dia和/或抗-Mur，國產譜細胞的3號和10號分別含有Dia、Mur抗原，鹽水與抗-IgG單抗卡，反應均為陰性。而用PEG增強后，3號細胞呈現3+的強凝集，因此懷疑有抗-Dia。而兩套匈牙利的進口譜細胞中Di（a+）的細胞剛好E（-），反應呈陽性結果，進一步證實了抗-Dia的存在。

E抗原在人群中的分布較廣泛，陰性率在50%左右，且E抗原在Rh血型系統中僅次于D抗原。Rh抗體中，除了天然產生的抗-E和抗-C之外，多由外界的免疫刺激產生，為IgG類型的抗體[7-12]。本例患者Rh血型為CCDee，無c和E抗原，若輸注了含有c和E抗原的紅細胞，機體會產生免疫性的抗-c和抗-E抗體，再次輸血，常常會干擾輸血相容性檢測的實驗結果?？?E抗體是Rh血型系統中檢出率最高的血型不規則抗體，也可和其他血型不規則混合存在[13-15]。

該患者抗-E很弱，容易漏檢，但是輸血時輸入E陽性血的概率為50%，患者又有輸血史和妊娠史，所以很容易發生輸血反應。PEG是一種水溶性的線性聚合物，它可以降低抗體分子與水分子間的空間排斥力，使抗原和抗體更緊密接觸，增加紅細胞和抗體間的分子碰撞機會，從而促進抗原-抗體的結合反應，可以提高有臨床意義的抗體的檢出能力。

綜上所述，Dia雖為低頻抗原，但可以引起嚴重的輸血反應和新生兒溶血癥，試驗操作中應注意使用不同的含有Dia抗原的抗體鑒定試劑盒進行試驗；一些親和力較低的抗體可能常規的試驗方法無法檢測出，應使用PEG增強等方法檢測以避免有臨床意義的抗體的漏檢。臨床輸血工作者應重視對抗體篩查和鑒定的檢測，尤其是對有輸血史或/和妊娠史的患者，如檢出抗體，應選擇相應抗原陰性的配血相合的紅細胞予以輸注，以提高臨床輸血的安全、有效性。（本試驗為筆者在上海市血液中心參比實驗室進修期間完成，對沈偉、向東及血液中心各位老師的幫助與指導表示衷心的感謝?。?/p>

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