糞微生態移植聯合柳氮磺吡啶對潰瘍性結腸炎患者血清炎癥因子及T細胞亞群的影響*

孫莉莉 薛青

潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是病因尚未闡明的慢性非特異性腸道炎癥疾病。UC的發病機制可能與遺傳、環境、腸道微生態、免疫等多因素相關[1]。目前UC的治療以氨基水楊酸制劑、糖皮質激素及免疫抑制劑為主。糞微生態移植（fecal microecological transplantation，FMT）是將處理過的健康供體的糞便標本經消化內鏡置入患者腸道，重建患者腸道微生態，達到治療相關疾病的治療方式[2，3]。本研究采用糞微生態移植聯合柳氮磺吡啶治療UC，觀察其臨床療效以及對血清炎癥因子和T細胞亞群的改變，以探討其對UC患者免疫平衡和腸道微生態環境的影響，旨在為UC治療提供臨床和理論參考。

資料與方法

1 一般資料 選取我院于2018年6月～2019年12月期間收治的90例經臨床表現及結腸鏡、病理學檢查確診UC的患者為研究對象，年齡21～68歲，平均（41.64±4.16）歲，病程2～96月，平均（34.98±5.83）月。隨機將研究對象分為對照組和觀察組，每組各45例。兩組患者一般資料的比較無統計學差異（P＞0.05），具有可比性，見表1。本研究經我院倫理委員會批準，所有研究對象簽署知情同意書。

表1 一般資料的比較

2 納排標準

2.1 研究對象納入標準：①有腹瀉、腹痛、黏液血便等臨床癥狀；②符合UC診斷標準[4]，經病理及結腸鏡檢查確診為UC患者；③存在對激素類藥物依賴，減量或停用復發的患者。排除標準：①嚴重感染；②合并肝腎功能不全等內科疾病；③孕婦或哺乳期婦女；④惡性腫瘤；⑤克羅恩病。

2.2 FMT供體納入標準：供體為健康志愿者[5]，優選年齡＜60歲的供體，根據2016歐洲糞菌移植共識完成生活習慣和病史的問卷[6]，近3月內無用藥史（抗生素、抗腫瘤藥物、免疫抑制劑、糖皮質激素等），經檢查排除細菌、真菌、病毒等感染。FMT供體排除標準：（1）存在以下潛在或已知感染：①病毒性肝炎、HIV、梅毒等傳染性疾病；②近1年內有病毒性肝炎、HIV、梅毒等暴露史；③近半年內曾于疫區居住或旅游；④有吸毒、高危性行為、使用違禁藥物等。（2）腸道菌群失調：①近期有用藥史（抗生素、抗腫瘤藥物、免疫抑制劑、糖皮質激素等）；②炎癥性腸病；③消化系統腫瘤或存在腹瀉、便秘、腹脹、消化不良等癥狀。（3）胃腸手術、其他系統性疾病。（4）遺傳病家族史。

3 治療方法

3.1 對照組治療：對照組行美沙拉嗪+柳氮磺吡啶治療。柳氮磺吡啶腸溶片（生產廠家：上海中西三維藥業有限公司；批準文號：國藥準字H31020450），每天3～4 g，分次口服，治療8周；美沙拉嗪緩釋片（生產廠家：輝凌制藥有限公司；批準文號：進口藥品注冊證號 H20181183），成人每天4次，每次0.5～1 g，或遵醫囑。

3.2 觀察組治療：觀察組在美沙拉嗪+柳氮磺吡啶治療8周結束后，停用1周抗菌藥物、調節腸道菌群藥物、糖皮質激素、免疫抑制劑等對腸道菌群有較大影響的藥物，進行糞微生態移植。患者術前完成血液常規檢查及有關傳染病檢查，記錄患者實驗室檢查結果及臨床癥狀，計算UC患者的Mayo評分。

3.3 糞微生態移植物的制備：為保證安全性，檢查合格的供體在捐贈當日需進一步確認近期的危險因素和疾病史[6]，篩選后合格的供體在移植當日將糞便排入無菌醫療袋內，快速送至實驗室，稱重后使用0.9%氯化鈉稀釋攪拌，采用孔徑2.0、1.0、0.5及0.25 mm的濾網順次過濾，將濾過液保存送至內鏡室備用。

3.4 消化內鏡下FMT：患者移植前1天清淡飲食，移植前1晚禁食，行胃腸道準備，常規行結腸鏡檢查，進境位置到回腸末端，抽取移植液灌注導管，邊灌注邊退鏡，總注入量200～300 mL。移植結束后保持1 h不排便。對照組患者以0.9%氯化鈉注射液代替移植液，操作同前。

3.5 術后觀察：FMT術后4～6 h可恢復飲食，住院觀察1周，記錄患者術后的臨床表現、排便情況以及不良反應等。

4 觀察指標 兩組治療后觀察終點是以觀察組FMT結束1周后的時間為節點。評估臨床療效、Mayo評分及炎癥因子，具體標準如下。

4.1 臨床療效：①顯效：癥狀、體征消失，大便常規檢查陰性，行腸鏡檢查糜爛消失，潰瘍愈合，黏膜基本恢復；②有效：癥狀、體征基本消失，大便常規檢查陰性，行腸鏡檢查黏膜輕度充血糜爛或形成假息肉；③無效：癥狀、體征無明顯好轉，行腸鏡檢查未見好轉。其中總有效率為顯效率與有效率之和。

4.2 Mayo評分及炎癥因子：分別于治療前、治療8周、治療11周抽取空腹血2～3 mL，使用離心機（3 000 r/min）離心，留取血清，根據試劑盒說明書采用免疫比濁法檢測C-反應蛋白（CRP），使用酶聯免疫法檢測白介素-6（IL-6）及腫瘤壞死因子（TNF-α）等炎性因子水平。Mayo疾病活動評分標準見表2。

表2 Mayo疾病活動評分標準

4.3 外周血T 淋巴細胞測定：分別于治療前、治療8周、治療11周抽取空腹血2～3 mL，采用EDTA管抗凝，應用美國BD公司的流式細胞儀及配套試劑，測定外周血T 淋巴細胞亞群比例。

4.4 安全性分析：記錄患者治療期間發生的不良反應。

5 統計學處理 采用SPSS 20.0統計軟件進行分析，計數資料以例數（百分數）表示，采用χ2檢驗；計量資料采用均數±標準差（）表示，采用t檢驗；檢驗水準α=0.05。

結 果

1 臨床療效 觀察組的有效率為95.5%，對照組的有效率為77.8%，觀察組有效率明顯高于對照組，見表3。

表3 兩組臨床療效的比較[（n）%]

2 血清炎癥因子和Mayo評分 兩組治療前CRP、TNF-α、IL-6及Mayo評分等無明顯差異（P＞0.05），兩組治療后CRP、TNF-α、IL-6等血清炎癥因子及Mayo評分較治療前明顯下降，而且觀察組較對照組下降更為明顯（P＜0.05），見表4。

表4 兩組血清炎癥因子和Mayo評分比較（ ）

表4 兩組血清炎癥因子和Mayo評分比較（ ）

注：CRP：血清C-反應蛋白，TNF-α：腫瘤壞死因子-α，IL-6：白介素-6

3 T淋巴細胞亞群比較 兩組治療前CD3+、CD4+、CD8+T細胞計數及CD4+/CD8+比值等無明顯差異（P＞0.05），治療后兩組CD4+T細胞比例升高，CD4+/CD8+比值升高（P＜0.05），觀察組顯著高于對照組（P＜0.05），見表5。

表5 兩組T淋巴細胞亞群比較（ ）

表5 兩組T淋巴細胞亞群比較（ ）

4 安全性分析 部分FMT患者術后出現一過性腹脹和輕度腹瀉，未經特殊處理后自行緩解。其中2例出現發熱，最高體溫39.5℃，右下腹部疼痛，影像學提示中等量腹腔積液，癥狀于禁食水、抗感染、補液等對癥治療后緩解。

討 論

UC是臨床表現為腹瀉、腹痛、黏液膿血便的炎癥性腸病，近年來我國的患病率顯著增加[7]。UC的發病機制主要是環境因素作用于遺傳易感者，在腸道微生物的作用下，腸道黏膜屏障損傷致使腸黏膜產生持續性炎癥反應[1，8，9]。氨基水楊酸制劑柳氮磺吡啶作為臨床治療UC的首選藥物，可以在腸道內分解為抑制炎癥介質釋放的5-氨基水楊酸，達到治療炎癥性腸病的目的[10，11]。

本研究在柳氮磺吡啶治療的基礎上，聯合糞微生態移植，改善UC患者腸道微生態[12]，結果發現：觀察組有效率為95.5%，觀察組有效率明顯優于對照組，且Mayo評分較治療前明顯下降（P＜0.05），證明了FMT聯合柳氮磺吡啶在腸道微生態方面可以起到治療UC的作用，為臨床治療提供了依據。莫睿等人采用Meta分析方法納入23項研究，經分析研究得出FMT治療UC的安全性及有效性，與本研究結果一致[13]。

血清CRP在炎癥急性期、自身免疫性疾病、良惡性腫瘤等病理情況下明顯增高。TNF-α是由巨噬細胞、單核細胞、T細胞等分泌的細胞因子，可以加速腸道粘膜細胞的炎癥反應。IL-6是上皮細胞、淋巴細胞、巨噬細胞產生的炎癥介質，通過增加腸道上皮與炎癥細胞的相互作用，增強局部炎癥的進展[14]。既往的研究提示CRP、TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達水平可以作為UC患者病情嚴重程度以及治療效果的判斷依據[15]。本研究發現：經過FMT治療后的UC患者CRP、TNF-α、IL-6等炎癥因子明顯下降（P＜0.05），可能是由于FMT聯合柳氮磺吡啶重建了腸道微生態平衡，減少病原菌，減輕腸道炎癥反應，進而達到治療目的[16]。

T細胞亞群對機體免疫平衡至關重要，主要包括CD3+CD4+和CD3+CD8+T細胞，其中CD3為外周血成熟T細胞的標志，CD4+T細胞的主要作用為輔助B淋巴細胞產生抗體，分泌細胞因子調節免疫系統，CD8+T細胞的作用為細胞毒性的殺傷作用，CD4+/CD8+比值與T細胞免疫功能密切相關，正常值在1.4～2.0之間[17，18]。既往有研究發現UC患者CD4+T細胞計數下降，CD8+T細胞計數升高，而CD4+/CD8+比值下降，提示我們UC患者T細胞免疫功能失調，且與UC的嚴重程度相關[19]。本研究發現：經FMT治療后CD4+計數升高，CD4+/CD8+比值升高，觀察組顯著高于對照組（P＜0.05）。這可能是由于FMT聯合柳氮磺吡啶治療可以增加腸道益生菌，改善腸道微生態而減輕腸道炎癥，進一步對T細胞亞群的比例造成影響，從而改善機體的免疫狀態。

綜上，FMT聯合柳氮磺吡啶通過重建腸道正常菌群改善T細胞亞群比例，調節機體免疫狀態，降低炎癥反應，進而達到治療UC的效果，且具有一定的安全性。但是本研究也存在局限性，參與本研究的患者均來自我院住院患者，病情相對較重，可能會導致研究結果存在誤差，還需要長期、多中心大規模的臨床試驗觀察FMT治療的有效性與安全性。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突