1周歲內嬰幼兒月齡與ABO血型抗體凝集強度消長的多中心前瞻性研究*

李志強 呂先萍 劉鐵梅 劉冰 張冬霞 宮濟武 馬曙軒 劉瑩 陳劍 黃吉娥 呂孟興 羅冰 文軍柳美秀 李興龍 李麗瑋 于建

ABO血型鑒定實施正反定型是為了驗證檢測結果的正確性。由于1周歲內嬰幼兒機體免疫系統發育不夠健全，易導致ABO血型鑒定反定型結果出現異常。國內諸多醫院對1周歲尤其是6個月內嬰幼兒進行ABO血型鑒定時往往只做正定型，何時應同時進行反定型檢測在我國臨床輸血界沒有明確規定。為了確保1周歲內嬰幼患兒的輸血安全性，著者在全國范圍內進行1周歲內嬰幼兒紅細胞ABO血型抗體凝集強度與月齡消長相關性多中心前瞻性研究，其宗旨是為了明確國內1周歲內嬰幼兒紅細胞ABO血型反定型檢測時間與結果強度判斷界定值，為制定我國嬰幼兒臨床輸血血型血清學檢測規范提供實驗數據。

對象與方法

1 研究對象 收集2019年5～10月來自于全國范圍內1周歲內嬰幼兒1 564例血標本，其中男922名、女642名，血型分布：A型516名、B型515例、O型533例。民族分布：漢族、回族、朝鮮族、壯族、彝族、藏族、白族、布依族、土家族、傣族、滿族、侗族、苗族、維吾爾族、蒙古族等；漢族與少數民族例數比為13.6∶1。入組嬰幼兒標準：無輸血史，無血液系統疾病、無良惡性腫瘤、無免疫系統疾病與嚴重感染性疾病史，未使用抗生素、免疫抑制劑和抗腫瘤藥物等藥物史。按月齡分成12組。

2 研究試劑與儀器 人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（上海血液生物醫藥有限責任公司，批號20195320），ABO、Rh血型定型檢測卡（長春博迅生物技術有限責任公司，批號20190504）等。細胞洗滌離心機（KA-2200日本久保田株式會社）、醫用離心機（TD-A 長春博研科學儀器有限責任公司）。

3 檢測方法 留取靜脈血標本分別應用三種方法進行ABO血型反定型檢測：常溫試管法、4℃試管法、微柱凝集法檢測。4℃試管法ABO血型反定型：在試管加樣后置入4℃冰箱內放置30 min后離心，其他檢測步驟與常溫試管法ABO血型反定型一致。常溫試管法與微柱凝集法檢測步驟嚴格按照《輸血技術操作規程（輸血科部分）》人民衛生出版社，2016年第1版實施。實驗結果以凝集強度評分記錄，判定原則見表1、2。

表1 試管法實驗結果判讀原則

4 統計學處理 應用SPSS20.0軟件對數據做統計分析，計量資料以采用中位數（四分位間距）的方式進行表示，即M（P25，P75）。各血型間采用方差分析，每血型不同方法學采用配對樣本秩和檢驗；性別、民族和地域采用方差分析；P＜0.05表示差異具有統計學意義。

表2 微柱凝集法實驗結果判讀原則

結 果

1 各血型反定型細胞凝集強度變化

1.1 A型嬰幼兒：A型嬰幼兒1～12月各月齡段反定型與B細胞反應，微柱凝集法與常溫試管法比較，各月齡凝集強度分值均有統計學意義（P＜0.05）；與4℃試管法比較，除10～12月齡段外，其余各月齡段間兩兩比較均無統計學意義（P＞0.05）。4℃試管法與常溫試管法比較，各月齡段的凝集強度分值均有統計學意義（P＜0.01），見表3。

隨著A型嬰幼兒月齡的增加，微柱凝集法和4℃試管法的凝集強度分值≥4分（凝集≥1+W）和≥7分（凝集≥2+W）的月齡分別出現在第6個月、第8～9個月；而常溫試管法則分別出現在第8個月、第10個月，見表4。

1.2 B型嬰幼兒：B型嬰幼兒1～12月各月齡段反定型與A細胞反應，微柱凝集法與常溫試管法比較，各月齡凝集強度分值均有統計學意義（P＜0.05）；與4℃試管法比較，除10～12月齡段外，其余各月齡段間兩兩比較均無統計學意義（P＞0.05）。4℃試管法與常溫試管法比較，各月齡段的凝集強度分值均有統計學意義（P＜0.05），見表3。

隨著B型嬰幼兒月齡的增加，微柱凝集法和4℃試管法的凝集強度分值≥4分（凝集≥1+W）和≥7分（凝集≥2+W）的月齡分別出現在第1個月、第3-4個月；而常溫試管法則分別出現在第1個月、第7個月，見表4。

1.3 O型嬰幼兒：O型嬰幼兒1～12月各月齡段反定型與A細胞和B細胞反應，微柱凝集法與常溫試管法比較，各月齡凝集強度分值均有統計學意義（P＜0.01）；與4℃試管法比較，除11～12月齡外，其余各月齡段間兩兩比較均無統計學意義（P＞0.05）。4℃試管法與常溫試管法比較，除B細胞9外，其余各月齡段的凝集強度分值均有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 各血型嬰幼兒月齡與反定型細胞凝集強度 分值：[M（P25，P75）]

O型嬰幼兒月齡第1個月時，微柱凝集法、4℃試管法反定型A、B細胞凝集強度分值均≥7分（凝集≥2+W）；常溫試管法反定型分值均≥4分（凝集≥1+W），分值≥7分（凝集≥2+W）分別出現在第1、2～9個月，見表4。值得一提的是，O型嬰幼兒出生時反定型A、B細胞凝集強度分值相對與其他血型均偏高（均≥7分），但隨著月齡逐漸增加，其凝集強度分值均出現下降趨勢，平均降低1～3分不等，隨后凝集強度分值重新逐漸恢復至原水平甚至更高值。

表4 各血型嬰幼兒月齡與反定型細胞凝集強度評分（單位：月齡）

2 各血型反定型細胞凝集強度比較 微柱凝集法、4℃試管法和常溫試管法1～3月齡時O型嬰幼兒反定型凝集強度分值分別比A型和B型反定型凝集強度分值高，兩兩比較有統計學意義（P＜0.05）。隨著月齡至4～6月齡時O型反定型凝集強度分值降到最低，7～12月齡又逐漸增高，與A型和B型反定型凝集強度分值兩兩比較無統計學意義（P＞0.05）。

另外，微柱凝集法、4℃試管法和常溫試管法1～8月齡A型嬰幼兒反定型凝集強度分值均比B型和O型反定型凝集強度分值低，兩兩比較有統計學意義（P＜0.05）；隨著月齡增加至12月齡，分值差異明顯減少，兩兩比較無統計學意義（P＞0.05），表4。

3 各血型反定型細胞凝集強度與性別、民族和地域相關性 微柱凝集法、常溫試管法和4℃試管法A、B、O型嬰幼兒反定型細胞凝集強度在男女性別間、漢族與少數民族間分別相互比較無統計學意義（P＞0.05）；而在南方與北方區域分布（以秦嶺-淮河為界）分別相互比較有統計學意義（P＜0.05），見表5。

表5 各血型反定型細胞凝集強度與性別、民族和地域相關性 分值：[M（P25，P75）]

討 論

由于1周歲內嬰幼兒造血器官和免疫系統發育均不夠完善，極易出現各種疾病，在疾病的治療過程中常依賴輸血治療；又由于機體免疫系統發育不健全也可影響ABO血型抗體產生，極易引起ABO血型鑒定反定型結果出現異常，從而導致ABO血型鑒定正反定型不符。因此，通常1周歲內嬰幼兒輸血前紅細胞ABO血型鑒定僅依賴正定型結果，因而存在一定輸血風險。對于1周歲內嬰幼兒來說，何時進行紅細胞ABO血型正反定型同時檢測國外文獻報道結果不一，美國血庫學會規定＞6個月嬰幼兒應進行ABO血型正反定型檢測；英國血液學標準委員會則規定＞4個月內嬰幼兒應進行ABO血型正反定型檢測。而國內對其沒有統一明確規定，由各醫院自行決定。為了確保1周歲內嬰幼患兒的輸血安全性，必須明確國內1周歲內嬰幼兒紅細胞ABO血型反定型檢測時間與結果強度判斷界定值。另外，由于我國仍處于發展中國家之列，地域遼闊，醫療資源的分配還不夠平衡，宜有適合我國各地進行ABO血型反定型檢測的方法學和其相適應的判讀規則。

本文研究表明應用微柱凝集法和4℃試管法進行ABO血型反定型檢測時，其凝集強度評分≥4分（凝集≥1+W），月齡不小于6個月；其凝集強度評分≥7分（凝集≥2+W），月齡不小于9個月。應用常溫試管法進行ABO血型反定型檢測時，其凝集強度評分≥4分（凝集≥1+W），月齡不小于8個月；其凝集強度評分≥7分（凝集≥2+W），月齡不小于10個月。著者認為醫療條件較差與民眾生活欠富裕地區，可應用試劑成本較低的4℃試管法進行ABO血型反定型檢測，其結果判讀效果與微柱凝集法基本一致。

本文研究表明嬰幼兒隨著月齡增加，各型反定型細胞凝集強度變化曲線均呈“湯勺式圖形”。另外，1月齡時O型嬰幼兒反定型凝集強度分值分別比B型和A型分值高，隨著月齡增加至4～6月齡時分值降到最低，至后逐漸增高。著者認為可能是1月齡O型嬰幼兒機體產生的血型相關抗A和抗B抗體受母親的影響比A型、B型嬰幼兒要強。值得一提的是A、B、O型嬰幼兒反定型細胞凝集強度在南方與北方區域分布（以秦嶺-淮河為界）存在一定差異，其原因有待于進一步研究。

總之，明確國內1周歲內嬰幼兒紅細胞ABO血型反定型檢測時間與結果強度判斷界定值，可確保1周歲內嬰幼兒的輸血安全性；也可為制定我國嬰幼兒臨床輸血血型血清學檢測規范提供實驗數據。

致謝：長春博迅生物技術有限責任公司馮立崗、馮俊奎，上海血液生物醫藥有限責任公司顧桂玲、王玲玲，奧森多醫療器械貿易（中國）有限公司陳凱、韓莎莎等支持。

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