改良Schiff試劑熱配法的應用和體會

臧志偉 吳佗

摘要：目的：探討用改良Schiff試劑在科研和臨床病理檢驗技術中得到的應用價值。方法：采用跟傳統經典方法對比，跟蹤之后再驗證的方法。結果：以改良后染色效果明顯，糖原染色陽性物質為紫紅色等實際操作染色片例為佐證染色后效果明顯優于傳統的方法。結論：改良后Schiff試劑熱配法配制簡單簡潔，方便，值得推廣。

關鍵詞：改良;Schiff試劑;偏重亞硫酸鈉;36%～38%的濃鹽酸

高碘酸能使細胞內多糖含有的1，2-乙二醇氧化，產生二醛，此二醛基進而與Schiff液作用形成紅色化合物。定位于胞漿中其強度與糖原含量成正比，但傳統方法配制Schiff試劑步驟繁瑣，不易掌握且配制后保存時間短，不易推廣。實驗者經多年實踐總結改良熱法快速配制schiff試劑不僅方法簡便、成功率高，而且染色效果比改進前更加艷麗，染色色彩更加銳利鮮明。

1材料與方法

1.1 實驗材料

①研磨成粉狀的堿性品紅;②偏重亞硫酸鈉;③36%～38%的濃鹽酸;④蒸餾水;⑤活性碳粉。

1.2 傳統Schiff試劑配制

將1 g堿性品紅加入煮沸的200 ml蒸餾水中，再煮1 min，使堿性品紅完全溶解。冷卻至50℃時過濾，加入1 mol/L濃鹽酸20 ml，再冷卻至35℃時，加入偏重亞硫酸鈉2 g，蓋緊并輕輕搖動使其溶解，于暗處靜置24 h，溶液變成稻草色或淡紅色，加入活性炭1 g，塞瓶口輕搖1～2 min，靜置1～2 h后過濾，置于4℃冰箱內保存。

1.3 改進后的Schiff試劑配制方法

用500 ml的三角燒瓶加入260 ml蒸餾水在電爐加熱至沸騰，取1.5 g堿性品紅置于260 ml沸水中，先用玻璃棒攪拌混勻再繼續搖動燒瓶5 min使之溶解，移入量筒。冷卻至25℃時，加29.5 g偏重亞硫酸鈉，用玻璃棒攪拌混勻，使之完全溶解，滴加36%～38%的濃鹽酸3 ml添加蒸餾水至300 ml充分混勻振蕩10 min。使該溶液顏色褪至淡黃色，若呈紅色則不能使用，加活性碳粉5 g顛倒混勻。取濾紙放入漏斗過濾至棕色瓶，此時溶液呈無色透明狀，置4℃冰箱備用（可保存1.5年以上）。

1.4 染色方法

①干燥的新鮮血膜片或病理組織切片[脫水脫蠟（略）]于95%乙醇中固定10 min，流水沖洗;②0.5%高碘酸水溶液氧化5～10 min;③蒸餾水充分水洗;④放入無色品紅溶液玻璃染缸中反應30 min，流動自來水沖洗10 min;⑤HE染色用蘇木素染核（血膜片可用1%甲基綠染核3 min）水洗、返藍、鏡檢，如核顏色深用鹽酸乙醇分化，再水洗顯藍;⑥無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2染色結果

Schiff試劑（PAS法）陽性物質呈紫紅色或紅色。見圖1。

3討論

作者將反應物（偏重亞硫酸鈉29.5 g）濃度增加以避免無色品紅的氧化，也避免了背景及非糖類物質的物理著色，清晰地顯示含醛基的糖類物質。以濃度36%～38%的濃鹽酸（3 ml）滴入法取代1 mol/L鹽酸，加速了對染色劑色素的破壞速度，縮短了配制時間，提高了工作效率。增加鹽酸和偏重亞硫酸鈉濃度，提高了配制Schiff試劑生成速度加速了對色素的破壞。但為了能使Schiff液染色力保證發揮最佳效果，最好采用浸泡染色。Schiff染色反應成功與否、染色附著力好與否、反應快慢則取決于染色時間，氧化時間長短與（高碘酸濃度）氧化劑的優劣和氧化液（避免污染）新鮮等因素有關。

Schiff液制配法有很多，有冷配法及熱配法。都以1：200堿性品紅溶液為最基本配方，都是熱配法（將堿性品紅加熱煮沸是通過熱效應來加速分子運動，使染料溶解與脫色）。冷配法的報導也不少，但無定性推廣。我們通過多年教學實驗應用實踐觀察，取得了改進Schiff液與傳統熱配法一致的滿意效果。改良后schiff試劑優點是Schiff液可以長期保存使用而不影響試劑質量和染色結果。改進后的Schiff液配液時間大大縮短（原為24 h，現為50 min），配液步驟簡化，易于掌握，高效實用。而傳統方法配Schiff試劑步驟繁瑣，配制過程稍有不慎極易失敗，不易掌握，且Schiff試劑貯存時間較短。改良法制備Schiff試劑中增加濃鹽酸和偏重亞硫酸鈉的濃度，加快Schiff試劑生成速度，可大量配制（筆者有時配制多達1 000 ml，放置冰箱1年以上效果仍良好），具有高成功率、效果理想、便于儲存等特點。改良后schiff試劑能使師生與科研工作者較快達到實驗目的，提高實驗積極性，極大提高了實驗的效率，滿足教學科研的需要而且試劑新鮮還可在冰箱可保存多年。染色結果與改進前相比更加鮮艷，染色色彩更加銳利鮮明。

參考文獻

[1]丁偉，王德田.簡明病理檢驗技術[M].杭州：浙江科學技術出版社，2014：70.