多裂烏頭生藥學探究

丁 榮趙明明汪中江 黃旭峰 王毓杰 古 銳* 天喜格勒奪吉澤讓

（1.成都中醫藥大學藥學院，四川 成都611137； 2.成都中醫藥大學民族醫藥學院，四川 成都611137；3.四川金瑞和集團有限公司，四川 金川624100； 4.四川省阿壩州食品藥品檢驗所，四川 馬爾康624000）

鐵棒錘是多民族習用大宗藥材，具有祛風除濕、止痛、消腫散瘀的功效［1?3］，為云南白藥等成藥的原料藥材。多裂烏頭Aconitum polyschistumHand.?Mazz.為毛茛科烏頭屬植物，是四川省阿壩、甘孜兩州習用鐵棒錘的原植物［4］，該品種目前被馴化為栽培品種，在阿壩州高半山農區廣泛栽培，是本地精準扶貧的重要品種，其藥材大量供給省外藥廠。但是，由于缺乏基礎研究，該品種在產地被誤認為鐵棒錘Aconitum pendulumBusch 和伏毛鐵棒錘Aconitum flavumHand.?Mazz.，缺乏質量評價研究，缺乏栽培馴化前后藥材品質比較，影響了本品的合理使用。鑒于此，本實驗開展多裂烏頭生藥學與質量標準研究，以期為本品的深入開發提供科學依據，并為建立本品的質量標準提供研究基礎。

1 材料

美國AgiLent 1260 高效液相色譜儀（檢測器1260 DAD VL，美國AgiLent 公司）；SB?5200D 超聲波清洗機（寧波新藝超聲設備有限公司）；OLYMPUS（CX41）光學顯微鏡（日本OLYMPUS 公司）；FA1004型分析電子天平（萬分之一，上海良平儀器儀表有限公司）。

樣品為自采，共9 批，1 批為野生品，8 批為栽培品，2號樣品采樣地金川縣勒烏鄉前鋒村是3～9號栽培品種源地。經成都中醫藥大學民族醫藥學院古銳教授鑒定為多裂烏頭Aconitum polyschistumHand.?Mazz.的干燥子根。烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿對照品購于上海遠慕生物科技有限公司（純度≥98%）。見表1。

表1 樣品信息

2 方法與結果

2.1 原植物形態鑒別 本品野生品子根近紡錘形，長約3～10 cm，栽培品子根多，子根呈長圓柱形，長約為5～20 cm。莖稍粗，疏被反曲而緊貼的短柔毛，等距離著生葉，常有分枝。莖下部葉有稍長柄，莖中部葉有短柄；葉片寬卵形，分裂極細，長6～8 cm，寬5～8 cm，中央全裂片卵形，近羽狀細裂，末回裂片極狹條形，兩面無毛；下部葉柄長約2 cm，中上部葉柄長約0.5 cm。頂生總狀花序狹長，長15～28 cm，有多數密集的花，有時在花序軸下部有側生花序；軸和花梗密被反曲的短柔毛；下部苞片葉狀，其他的線形；頂生花序花梗較短，長約1 cm，通常側生花序的花梗較長，長2～3 cm；小苞片生花梗中部之上，線形；萼片藍紫色，外面密被短柔毛，上萼片盔狀船形，高0.8～1.2 cm，自基部至喙長1.5～1.7 cm，下緣向上斜伸，凹；花瓣無毛，距短，稍向后彎；花絲被短柔毛，全緣；心皮3，子房密被緊貼的短柔毛。種子倒卵狀三棱形，沿棱具狹翅。花期8～10 月。

2.2.1 栽培品 子根呈不規則的長圓柱形，長5～20 cm，直徑0.5～1.5 cm；表面灰棕色，有縱皺紋及側根痕。質脆，易折斷，斷面白色，粉性，有黑棕色環。氣微，味苦、麻。

2.2.2 野生品 子根呈短圓柱形、圓錐形，表面呈黃棕色，有淺縱皺紋，長3～10 cm，直徑0.5～1 cm。

由此可見，兩者的區別主要是栽培品子根較野生品數量增多，變長，變細，部分彎曲，且顏色有一定差異。

2.3 顯微鑒別

2.3.1 子根橫切面 后生皮層為2～3 層，壁栓化稍增厚；皮層緊密排列，類長方形，方形或長圓形；內生皮層明顯且不見石細胞；韌皮部寬廣，隨處可見篩管群；形成層呈不規則的多角形或類圓形；木質部內導管1～4個相聚或者成列，位于形成層內側；髓部較大。見圖1。

圖1 多裂烏頭根橫切面構造圖（×100）

2.3.2 粉末 本品粉末呈白色。后生皮層細胞較大，細胞成類方形、長方形，壁增厚，內含棕色物質，易破碎。淀粉粒多成類圓形，水滴狀，單粒多，復粒由2～3 粒組成，層紋不明顯，臍點人字狀，一字狀，點狀，縫隙狀，直徑2.5 ～48 μm。纖維單個散在，長梭形，多破碎，壁不甚厚，胞腔小，紋孔明顯，直徑10～24 μm。導管多為網紋導管，還有環紋導管，直徑為18～32 μm。見圖2。野生品與家種品粉末特征無差異。

圖2 多裂烏頭粉末特征（×400）

2.4 薄層鑒別 稱取批號1～4號的干燥的多裂烏頭粉末（過2號篩）約2 g，置250 mL 具塞錐形瓶中，加入40 mL甲醇溶液，超聲處理30 min（250 W，40 kHz），濾過，用5 mL 甲醇溶液洗滌濾渣2 次，合并濾液，低溫蒸干，加入3 mL 甲醇溶液溶解，得供試品溶液，備用。取烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿對照品，加甲醇溶液制成每1 mL 含有1 mg的對照品溶液。照薄層色譜法（2015年版《中國藥典》 附錄ⅥB）試驗，分別吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上。以正己烷?乙酸乙酯?甲醇（6.4∶5∶1）為展開劑［5］，展開，取出晾干后噴以稀碘化鉍鉀試液。結果各樣品與對照品在相同位置顯相同顏色斑點，見圖3。

門窗在建筑中的作用是采光、通風和圍護，是最容易造成熱損失的構件，為增大采光通風面積，建筑物的門窗面積逐步增大，這就給建筑節能方面提出了更高的挑戰。對門窗構件的節能處理是通過改善保溫隔熱性能和提高門窗的密閉性能實現。目前推廣使用的新型環保節能窗戶有鋁合金斷熱型材、鋁木復合型材、鋼塑整體擠出型材、塑木復合型材以及UPVC塑料型材等一些技術含量較高的節能產品。

圖3 多裂烏頭薄層色譜圖

2.5 檢查總灰分、酸不溶性灰分 按照2015年版《中國藥典》 四部方法（通則2302）測定［6］。不同產地的多裂烏頭總灰分含量為2.65%～5.09%；酸不溶性灰分含量為0.08%～1.25%。

2.6 含量測定

2.6.1 對照品溶液制備 精密稱取烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿對照品適量，分別置于10 mL 量瓶中，加入甲醇制備成質量濃度0.417 2 mg／mL 烏頭堿、0.108 8 mg／mL 苯甲酰烏頭原堿的溶液，搖勻，作為對照品貯備液。

2.6.2 供試品溶液制備 稱取干燥的多裂烏頭粉末（過2號篩）約2 g，置250 mL 具塞錐形瓶中，加入40 mL 甲醇溶液，超聲處理30 min（250 W，40 kHz），濾過，用5 mL甲醇溶液洗滌濾渣2 次，合并濾液，低溫蒸干，加入5 mL甲醇溶液溶解，即得［7?8］。

2.6.3 色譜條件 Welchrom C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相0.1 moL／L 醋酸銨（A）?乙腈?四氫呋喃（5∶3）（B），梯度洗脫，洗脫程序見表2；檢測波長235 nm［9?12］。色譜圖見圖4。

表2 梯度洗脫條件

圖4 各成分HPLC 色譜圖

2.6.4 線性關系考察 依次精密量取烏頭堿（0.417 2 mg／mL）、苯甲酰烏頭原堿（0.108 8 mg／mL）的對照品貯備溶液。在“2.6.3”項色譜條件 下，分 別進樣1、2、6、10、12、14 μL，測定峰面積。以進樣量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行回歸，得方程為烏頭堿Y＝1 199.1X（r＝0.999 9）和苯甲酰烏頭原堿Y＝1 073.9X（r＝0.999 9）。表明烏頭堿和苯甲酰烏頭分別在0.417 2～5.840 8、0.108 8～1.523 2 μg 范圍內線性關系良好。

2.6.5 精密度試驗 精密量取混合對照品溶液10 μL，在“2.6.3”項色譜條件下，重復進樣6 次，結果烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿峰面積RSD分別為0.52%、0.40%，表明儀器精密度良好。

2.6.6 重復性試驗 精密稱取同一批干燥的多裂烏頭樣品6 份，按“2.6.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.6.3”項色譜條件下分別進樣，測定烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿的峰面積，結果烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿含量RSD分別為1.99%、1.91%，表明該方法重復性良好。

2.6.7 穩定性試驗 取同一多裂烏頭供試品溶液，在“2.6.3”項色譜條件下，分別于制備后0、2、4、8、12、24 h 進樣10 μL，測定烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿的峰面積，結果烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿RSD分別為0.45%、1.98%，表明供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

2.6.8 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品共6 份，每份約0.5 g，分別加入適量的混合對照品溶液，按“2.6.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.6.3”項色譜條件下進樣，結果見表3。

表3 各成分加樣回收率試驗結果（n＝6）

2.6.9 樣品含量測定 取9 批不同產地不同時間采集的多裂烏頭樣品，每批樣品平行制樣2 份，按“2.6.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.6.3”項色譜條件下進樣，結果見表4。

表4 樣品灰分與含量測定結果（n＝2）

3 討論

本研究參考《中國植物志》［13］與羅艷等［14］對烏頭屬的形態描述進行鑒定，多裂烏頭A.polyschistum與伏毛鐵棒錘A.flavum形態特征極為相似。本研究主要以心皮數為3 作為鑒定本品為多裂烏頭A.polyschistum的主要依據，但本品葉并不符合文獻中多裂烏頭葉片似茴香葉描述［7］，而更符合《中國植物志》 對多裂烏頭葉形態的描述。

本研究通過對多裂烏頭A.polyschistum系統的生藥學研究，找出了藥材性狀的主要鑒別特征為野生品子根呈短圓柱形、圓錐形，表面呈黃棕色，有淺縱皺紋，長3～10 cm，直徑0.5～1 cm，栽培品子根呈不規則的長圓柱形，長5～20 cm，直徑0.5～1.5 cm；表面灰棕色，有縱皺紋及側根痕。質脆，易折斷，斷面白色，粉性，有黑棕色環。氣微，味苦、麻。

子根橫切面后生皮層為2～3 層，壁栓化稍增厚；皮層緊密排列，內生皮層明顯且不見石細胞；韌皮部寬廣，隨處可見篩管群，木質部內導管1～4個相聚或者成列；粉末上后生皮層細胞較大，壁增厚，內含棕色物質；纖維單個散在，長梭形，壁不甚厚，胞腔小；導管多為網紋導管、環紋導管。

本研究采用正己烷?乙酸乙酯?甲醇（6.4∶5.0∶1）與樣品提取方法建立的薄層色譜鑒別方法斑點清晰，可以采用此方法鑒別出多裂烏頭藥材；采用HPLC，同時測定了烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿2種成分的含量，考察了供試品超聲提取與回流提取方法；考察了提取溶劑，包括甲醇、乙醇、75%甲醇、50%甲醇；考察了提取溶劑用量；考察了提取時間；溶解溶劑考察，最終確定40 mL 甲醇超聲處理30 min 后過濾，低溫蒸干，5 mL 甲醇溶解為最佳提取條件［15?17］。

前期對烏頭屬類植物的苯甲酰烏頭原堿開展的研究較少，而且多裂烏頭Aconitum polyschistum植物成分差異較大，因此在本實驗中所測藥材中均含有烏頭堿和苯甲酰烏頭原堿，可以作為多裂烏頭含量測定的指標，其中苯甲酰烏頭原堿具有抗炎鎮痛、治療類風濕性關節炎等多種生物活性［18?19］。

本研究表明多裂烏頭家種藥材形態與野生品區別較大，從根的特點上能夠直觀區分野生與家種。在含量測定中，家種品種的烏頭堿與苯甲酰烏頭原堿總量都大于野生品，能夠替代野生品。