HPLC 法同時測定杏蘇止咳糖漿中5種成分

李 運 白賀明 邱國玉 石曉峰 戴 忠

（1.蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院／甘肅省種植中藥材外源性污染物監測工程研究中心，甘肅 蘭州730000； 2.甘肅省醫學科學研究院，甘肅 蘭州730050； 3.中國食品藥品檢定研究院，北京100050）

杏蘇止咳糖漿具有宣肺散寒、止咳祛痰之功效，用于治療風寒感冒咳嗽、氣逆等［1］。方中苦杏仁潤肺化痰，降氣止咳，紫蘇葉疏風散寒，解表宣肺，一升一降，以恢復肺的宣發肅降功能，共為君藥；前胡降氣止咳、疏散肺熱，桔梗宣肺化痰，共為臣藥；陳皮理氣化痰，為佐藥；甘草調和諸藥，為使藥，全方共奏宣肺化痰、降氣止咳之效。

中藥復方制劑在質量控制方面大多采用中藥整體控制模式［2?3］，常遴選處方中一種或幾種藥材中的主成分作為指標建立其定性定量檢測方法［4?9］，但2020年版《中國藥典》 一部僅針對杏蘇止咳糖漿中的橙皮苷含量進行控制，另外張世勇等［10］建立HPLC 法測定其中苦杏仁苷含量；蔣亞南等［11］對其中甘草苷、橙皮苷、甘草酸的含量進行分析。近年來，前胡受生長環境、田間管理等因素的影響，存在品質下降問題，因此，本實驗采用HPLC法同時測定杏蘇止咳糖漿中苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量測定方法，以期為更好地控制該制劑質量提供參考。

1 材料

1.1 儀器 Waters e2695 高效液相色譜儀，配置四元泵、2998 PDA 檢測器、自動進樣器、Empower 工作站（美國Waters 公司）；SBL?10DT超聲波恒溫清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；5424型高速離心機（德國艾本德公司）；GM?1.0A型隔膜真空泵（天津市津騰實驗設備有限公司）；Milli?Q IQ7000型超純水機（美國默克密理博公司）；XSE205DU型電子天平（瑞士梅特勒?托利多公司）。

1.2 試劑與藥物 苦杏仁苷（批號110820?201506，純 度93.4%）、甘草苷（批號111610?201106，純度93.7%）、甘草酸銨（批號110731?201619，純度93.0%）、白花前胡甲素（批號111711?200602，純度100%）、白花前胡乙素（批號111904?201804，純度98.9%）對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供。杏蘇止咳糖漿共10 批（其中Y1 廠家3 批，編號為Y1?1、Y1?2、Y1?3；Y2～Y8 廠家產品各1 批，分別編號為Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8）。乙腈、甲醇均為色譜純；其他試劑均為分析純；水自制超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 CAPCELL PAK C18MG 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相水（含0.05%磷酸）（A）?乙腈（B），梯度洗脫（0～15 min，92%～90% A；15～20 min，90%～85% A；20～35 min，85%～80% A；35～44 min，80%～70% A；44～53 min，70%～25%A；53～66 min，25%～8%A；66～67 min，8%～92% A；67～70 min，92%A）；體積流量1.0 mL／min；檢測波長210 nm（0～21 min，苦杏仁苷）、237 nm（21～53 min，甘草苷、甘草酸）、321 nm（53～70 min，白花前胡甲素）；柱溫30 ℃；進樣量10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸銨、白花前胡甲素對照品適量，置于10 mL量瓶中，甲醇溶解并定容，即得（苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸銨、白花前胡甲素、白花前胡乙素質量濃度分別為1.493、1.383、1.576、1.492、1.152 mg／mL），4 ℃下保存備用。

2.2.2 供試品溶液 精密量取糖漿2.00 mL，置于10 mL 量瓶中，精密加入80%甲醇4 mL，超聲（40 kHz、300 W）提取5 min，取出，放冷至室溫，80%甲醇定容至刻度，搖勻，5 000 r／min 離心10 min，取上清液，經0.22 μm 微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 按照處方工藝，分別制得缺苦杏仁、缺甘草、缺前胡的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗 取“2.2”項下對照品、供試品、陰性樣品溶液各10 μL，在“2.1”項色譜條件下進樣測定，結果見圖1。由此可知，各成分分離度理想，陰性無干擾，表明該方法專屬性良好。

圖1 各成分HPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.3.2 線性關系考察 精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液適量，置于10 mL 棕色量瓶中，甲醇稀釋定容，搖勻，制備成系列質量濃度，在“2.1”項色譜條件下進樣10 μL 測定。以對照品質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行回歸，結果見表1，可知各成分在各自范圍內線性關系良好。

表1 各成分線性關系Tab.1 Linear relationships of various constituents

2.3.3 精密度試驗 取“2.3.2”項下對照品溶液（苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素質量濃度分別為149.3、34.99、39.22、19.99、14.75 μg／mL），按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣測定6 次，測得苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素峰面積RSD分別為2.3%、2.3%、2.2%、2.3%、2.2%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復性試驗 取同一批糖漿（編號Y1?1），按“2.2.2”項下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣測定，測得苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素含量RSD分別為0.36%、1.20%、1.51%、0.75%、1.96%，表明該方法重復性良好。

2.3.5 穩定性試驗 取同一批糖漿（編號Y1?1），按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，于0、4、8、12 h 在“2.1”項色譜條件下進樣測定，測得苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素峰面積RSD分別為0.31%、0.44%、0.43%、1.83%、2.05%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密量取各成分含量已知（苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡 乙素分別為0.980、0.580、0.735、0.120、0.007 mg／mL）的同一批糖漿（編號Y1?1）1.00 mL，共6 份，按“2.2.2”項下方法平行制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣測定，計算回收率，結果見表2。

表2 各成分加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab.2 Results of recovery tests for various constituents（n＝6）

2.4 樣品含量測定 取10 批糖漿，每批2 份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣測定，外標法計算含量，結果見表3。

表3 各成分含量測定結果（mg／mL， n＝2）Tab.3 Results of content determination of various constituents（mg／mL， n＝2）

3 討論

3.1 色譜條件優化

3.1.1 流動相 本實驗考察了不同比例甲醇?水［12?13］、甲醇?水（含磷 酸）［14］、乙腈?水（含磷酸）［15］對各成分的分離效果，發現以乙腈?水（含0.05%磷酸）為流動相時基線平穩，相鄰峰達到基線分離，峰形較好。

3.1.2 檢測波長 本實驗采用二極管陣列檢測器對各成分進行全波長掃描，發現苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素最佳檢測波長分別為207、237、321 nm，故采用波長分段切換法，進行含量測定，此時靈敏度較好，干擾較弱。

3.2 含量分析 同一廠家不同批杏蘇止咳糖漿中各成分含量較接近，但不同廠家差異較大，僅Y1中同時檢測出白花前胡甲素、白花前胡乙素，Y7中均未檢測到兩者，其余廠家僅檢出白花前胡甲素，間接反映了方中前胡投料情況。因此，對杏蘇止咳糖漿質量的整體控制方法亟待進一步完善，從而為臨床用藥安全提供保證。

4 結論

本實驗建立HPLC 法同時測定杏蘇止咳糖漿中苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量，該方法簡便準確，重復性、穩定性良好，可用于該制劑的質量控制。