實驗中丙烯酰胺控制損失關鍵點及方法優化

李金莉 周冰谷

廣東省廣州市精益和泰質量檢測股份有限公司 廣東廣州 510000

隨著生活的豐富與多元化使得人們開始重視食品的營養與質量安全，食品的熱加工過程中產生的一系列物化反應與改變食品組分的結構和功能的同時也會產生一些不可忽視的有害物質（如雜酰胺、丙烯酰胺）[1]。因此，在這里對丙烯酰胺的實驗過程進行了優化及改進實驗方案。

1 實驗過程的損失排查過程

1.1 樣品液上機液相色譜-串聯質譜

GB5009.204-2014方法，由于做過程曲線的丙烯酰胺上機后內標及目標物幾乎無響應，所以需要排查原因，從人、物資、材料、方法、環境中分析，其它因素都相對穩定，因此考慮優先從實驗方法著手分析無響應的原因[2]。

1.2 實驗損失排查（逐步排查法）

為了避免塑料制品中途帶入污染物，我們試驗過程全程選用玻璃制品。

1.2.1 樣品制備（從第一步驟起考察目標物流失）

根據GB5009.204-2014方法步驟，（玻璃器皿使用三角瓶或玻璃離心管）稱取1.00g樣及空白加標，j加入超純水10ml，均質后加入1mg/L13C3-丙烯酰胺400μL（最終20ppb內標，相當于每克樣加入內標20ng）→振蕩混勻30min，離心（10min,4000rpm），用一次性槍頭吸取上清液200μL上機。→k凈化：（固相萃取柱凈化）向上清液加入5ml正己烷，振蕩萃取10min，離心，除去有機相，取200μL水相上機→l取5ml濾液過HLB小柱，收集流出液→m過BondElut-Accucat小柱，取200μL上機→n氮吹、0.1%甲酸溶液復溶、上機。

上機分析，步驟j樣品、空白加標內標響應均很低，因此考慮步驟j提取失敗，考慮更換提取試劑。

1.2.2 樣品制備方案改進（從第一步驟起考察目標物流失）

j改加10ml5mol/LNaCl溶液提取液上機后分析內標響應更高，因此5mol/LNaCl溶液更適合做提取試劑。l過HLB小柱后的內標響應基本丟失，因此HLB小柱是除雜效果；mn內標響應回升，但仍然比過小柱前響應弱很多。因此，盡管這個方法優化提取試劑外，固相萃取凈化依然損失較大，為了得到更加理想的目標響應，減少過程損失，決定繼續優化為棄除小柱，直接提取上機。

1.3 實驗再優化提升響應值

盡管過柱改良，但依然損失大，考慮使用不過柱方法，直接去除過柱的損失。稱取樣品0.5g，加內標100μL（1mg/L內標），渦旋30秒→加0.3ml0.02mol/L的醋酸銨（確保樣品完全溶解），渦旋30秒→再加4.7ml乙腈，渦旋60秒、10000r離心10分鐘→取2ml上清液，氮吹，復溶1ml（內標20ppb）→跑樣采用雙柱超高效液相色譜柱。

1.4 標準溶液的配置

（1）丙烯酰胺標準儲備溶液（10mg/L）：準確移取濃度液體標準品丙烯酰胺（100mg/L）1mL，加甲醇稀釋至10mL，置-20℃冰箱中保存。

（2）13C3-丙烯酰胺內標標準儲備溶液（10mg/L）：準確移取濃度100mg/L液體標準品13C3-丙烯酰胺內標1mL，加甲醇稀釋至10mL，置-20℃冰箱中保存。

（3）標準曲線工作溶液。丙烯酰胺標準工作溶液II（1.0mg/L）：確移取濃度1.0ml丙烯酰胺工作液（10mg/L）與內標工作溶液（10mg/L）0.02mL，用0.1%甲酸水稀釋至刻度10mL，內標濃度為100μg/L,臨用時配置。

13C3-丙烯酰胺內標標準工作溶液II（0.1mg/L）：確移取13C3-丙烯酰胺內標（10mg/L）0.02mL，用0.1%甲酸水稀釋至刻度10mL,臨用時配置。

分別移取0，1,5,10,20,50,100μL丙烯酰胺工作液II（1.0mg/L）,并用13C3-丙烯酰胺內標工作溶液II（0.02mg/L）定容1.0mL。

1.5 儀器參考條件

（1）色譜條件：

色譜柱：2根串聯×watersC18（100×2.1mmI.D.1.7μm)。

預柱：C18保護柱（5μm、2.1mmI.D.×30mm）或等效柱。

流動相：0.1%甲酸5mM乙酸銨溶液/甲醇/乙腈（95:3:2，體積分數）。

流速：0.2ml/min。

進樣體積：10μL。

柱溫：35℃。

（2）質譜參數（三重四極串聯質譜儀）參數見下表1。

表1 質譜參數

2 結語

本文經過試驗檢驗GB5009.204-2014方法測定油炸、烘烤食品中的丙烯酰胺，首先，對丙烯酰胺的提取條件進行單因素的逐步優化，包括提取試劑、小柱除雜、小柱吸收等，而關鍵步驟在于提取溶劑的挑選，最后把水更換為加10ml5mol/LNaCl溶液提取效果更佳，實驗效果更好[3]。而最后優化實驗，把提取溶劑換成0.02mol/L的醋酸銨提取轉換溶劑后直接上機，色譜響應高，最低濃度能做到1ng/ml,比標準方法的濃度還低，信噪比高，對雜質多的樣品分離效果特別好，從而獲得更優的實驗結果。