不同強度流體剪切應(yīng)力作用下成骨細胞的形態(tài)學(xué)改變

岳二麗 李夏寧 趙紅宇

流體剪切應(yīng)力(fluid shear stress，F(xiàn)SS)通過細胞表面不同信號通道將力學(xué)信號傳導(dǎo)到細胞內(nèi)部，引起細胞發(fā)生一系列適應(yīng)性改變，這是骨骼功能適應(yīng)性的基本細胞學(xué)原理[1-2]。至今為止，生物應(yīng)力作用下細胞形態(tài)學(xué)改變的研究尚較少，本研究擬采用精密的定常流加載系統(tǒng)對成骨細胞MG-63分別給予強度為7 dynes/cm2和12 dynes/cm2的FSS作用，通過觀察不同時間成骨細胞MG-63形態(tài)學(xué)的改變，從細胞動力學(xué)角度對種植體周圍骨重建的發(fā)生機理進行探討。

1 材料與方法

1.1 主要設(shè)備和儀器

清潔超凈臺(SW-CJ-IFD，蘇州凈化設(shè)備公司)；二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(BB15，Heraeus，德國)；倒置相差顯微鏡(CKX41，Olympus，日本)；臺式低速離心機(BS400，DENLEY)；純水制備系統(tǒng)(Rios 150，Millipore，美國)；定常流加載系統(tǒng)(MASTERFLEX蠕動泵系統(tǒng)，F(xiàn)isher Scientific International Inc公司，美國)。

1.2 主要試劑

胎牛血清(FBS)、雙抗(青霉素100 U/L，鏈霉素100 μg/L)(Gibco公司,美國)；DMEM低糖培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶&0.02%EDTA(Hyclone公司，美國)；PBS平衡鹽緩沖液(武漢博士德公司)；DMSO(Sigma公司，美國)。

1.3 主要試劑的配制

細胞完全培養(yǎng)液：DMEM培養(yǎng)基加體積分數(shù)為10%的FBS及1%～5%雙抗。

1.4 細胞培養(yǎng)

成骨細胞MG-63(四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院)培養(yǎng)于完全低糖DMEM培養(yǎng)液[內(nèi)含10%胎牛血清，1%～5%雙抗(青霉素100 U/L，鏈霉素100 μg/L)，pH 7.2]，置于CO2孵箱(37 ℃，5%CO2，95%空氣)，每隔2 d換1 次液。

1.5 細胞爬片制作

取對數(shù)生長期的MG-63細胞進行消化，制成單細胞懸液，細胞計數(shù)并調(diào)整細胞密度，以5×104/mL接種于已處理好的載玻片，加液，孵箱孵育2～4 h，備用。

1.6 成骨細胞性能鑒定

堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)測定采用改良鈣鈷法(Gomori Ca-co法)；骨鈣素(bone glaproyein，BGP)測定采用免疫細胞化學(xué)SABC顯色法，操作步驟按試劑盒說明書進行。礦化結(jié)節(jié)染色采用茜素紅染色和鈣染色(Von Kossa染色)2 種方法。……