HIF-1α RNAi對口腔鱗癌生長以及血管生成影響的研究

岑興 廖楚航 費偉 周昊

實體腫瘤生長的微環境通常是乏氧環境，這有利于細胞因子的釋放促進血管生成從而導致腫瘤的進程加快[1]。乏氧誘導因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是乏氧環境中重要的信號傳導分子,它可以調控基因的表達產生一系列生物學效應促進腫瘤發展，包括血管生成、細胞增殖、凋亡、糖酵解和pH調節[2]。之前的研究發現，在多種腫瘤的生長和轉移中發現HIF-1α的異常表達，包括口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)[3-4]。

在本研究中，通過實時定量PCR(RT-PCR)、Western blot檢測了OSCC臨床標本中HIF-1α的mRNA和蛋白表達情況，使用RNA干擾(RNA interference,RNAi)下調HIF-1α在OSCC動物模型中的表達，觀察腫瘤生長情況，檢測HIF-1α和VEGF的表達水平，同時檢測了腫瘤細胞的凋亡情況和微血管密度(microvascular density,MVD)。初步探尋HIF-1α在OSCC發生和發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 腫瘤標本的檢測

實驗組標本來自四川省人民醫院頜面外科2019 年01 月～2019 年06 月手術切除的新鮮腫瘤組織(12 例)，年齡60～82 歲，所有患者病理證實均為OSCC；對照組為術中冰凍病理結果證實無腫瘤細胞浸潤的正常組織。所有患者均簽署知情同意書,本研究獲得四川省人民醫院倫理委員會的批準。

1.2 RT-PCR 檢測

取保存的腫瘤組織樣本12 例，分別磨碎后加入Trizol(50 mg 組織加入1 ml)抽提RNA，并用RevertAidTM試劑盒(Thermo，USA)逆轉錄成cDNA;取逆轉錄產物進行實時熒光定量RT-PCR(ABI Prism 7700，USA)。

1.3 Western blot檢測

使用蛋白提取試劑盒(北京索萊寶)提取腫瘤組織蛋白，BCA蛋白檢測試劑盒(Pierce，USA)測定蛋白濃度。蛋白變性后，冷卻上樣，凝膠電泳半干法轉入PVDF膜后置于封閉緩沖液(搖床振蕩1 h)，分別加入目標基因一抗(1∶10 000，cell signaling technology，USA) ，4 ℃過夜，TBS/T洗滌后孵育二抗，ECL顯影條帶并進行灰度分析(Bio-Rad，USA) 。……