LncRNA H19通過上調HIF-1α的表達促進人口腔鱗癌細胞增殖侵襲能力及細胞周期

姑麗米日·依馬木 王巧云 林成

長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，LncRNA)H19作為最早發現的印記基因，參與多種腫瘤的發生發展[1-2]，然而，其在口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)組織中的表達及其對OSCC生長和轉移的影響尚不清楚。缺氧誘導因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是調控腫瘤細胞Warburg作用的核心分子，與OSCC發生發展密切相關[3-4]。本研究探討了H19和HIF-1α在人OSCC組織中的表達及其相互關系，并檢測了H19對OSCC細胞增殖、侵襲和細胞周期進程的影響以及HIF-1α表達的調控。

1 材料與方法

1.1 組織樣本來源

納入2017 年1月～2018 年1 月解放軍474醫院口腔科收治的45 例OSCC患者(6 例女性，39 例男性)；34～75 歲，中位年齡54 歲；TNM I-II期：18 例，TNM III-IV期：27 例；病理分化低/中：21 例，病理分化高：24 例。手術切取腫瘤組織及癌旁組織(距離原發灶>5 cm)，所有患者均初次被診斷為OSCC，術前未接受任何抗腫瘤治療， 研究前簽署知情同意書。

1.2 細胞系、細胞培養及慢病毒轉染

RPMI-1640+10%FBS(Gibco，美國)培養人OSCC細胞系SCC-4、SCC-9、SCC-25、Cal-27、TCA8113及KB(上海中國科學院)，在293T細胞系中進行慢病毒包裝，過表達及干擾病毒(上海漢恒生物)分別感染Cal-27及SCC-9細胞3 d， 1/1000 Polybrene促進感染效率，嘌呤霉素篩選細胞直至穩定生長狀態。

1.3 逆轉錄定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)

Trizol(Takara，日本)提取OSCC組織及細胞系中總RNA，逆轉錄得到cDNA產物，設計合成引物：H19、HIF-1α及內參基因GAPDH，10 μL Sybrgreen(ThemoFisher, 美國)中加入0.5 μmol/L引物和5 μL cDNA,置RT-qPCR(7500, ThemoFisher,美國)中進行熒光定量PCR反應，反應條件：95 ℃, 5 min; 95 ℃, 5 s for 40 cycles; 60 ℃, 30 s. 2-ΔΔCt法計算H19及HIF-1α的相對表達水平。

1.4 MTT實驗

待檢測細胞以1×104個細胞/孔接種到96孔板中，培養過夜，直到細胞在37 ℃、5%CO2條件下貼壁生長。將MTT與RPMI-1640+10%FBS培養基1∶5混合，加入10%FBS，在37 ℃、5%CO2條件下培養4 h，同時避光。用酶標儀檢測490 nm處0、24、48、72 h時的吸光度。用24、48、72 h的吸光度與0 h的吸光度之比表示細胞的相對增殖能力。