LINC00705通過(guò)調(diào)控miR-143-3p影響口腔鱗癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移能力的探究

馬稔秋 崔麗娟 杜煒

2018 年口腔癌新發(fā)病例約35.5 萬(wàn)，引起相關(guān)死亡約17.7萬(wàn)[1]，其中口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)占全部口腔癌的90%以上。手術(shù)聯(lián)合化療的治療方案在臨床收獲了較好的療效，但中晚期及復(fù)發(fā)OSCC的患者預(yù)后不佳，明確OSCC進(jìn)展的機(jī)制對(duì)于相關(guān)診斷標(biāo)志物及藥物靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)具有重要價(jià)值。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，LncRNA)是表觀遺傳及轉(zhuǎn)錄調(diào)控的關(guān)鍵參與者，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，包括OSCC[2-3]，但以目前的發(fā)現(xiàn)仍不足以完全闡明影響OSCC進(jìn)展的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。本研究通過(guò)生物信息學(xué)檢索發(fā)現(xiàn)與OSCC患者預(yù)后密切相關(guān)的LncRNA LINC00705，并通過(guò)分子生物技術(shù)明確了LINC00705的體外生物學(xué)效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制，揭示了該分子在OSCC診斷及治療應(yīng)用中的潛在價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料及儀器

人胚腎細(xì)胞293T、人口腔上皮細(xì)胞系HOEC及人OSCC細(xì)胞系CAL-27、SCC-4、SCC-9、SCC-25及Tca8113(上海生命科學(xué)研究院)；DMEM、DMEM/F12培養(yǎng)基及胎牛血清(FBS)(Hyclone，美國(guó))；RNAiso Plus(Trizol)、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript RT reagent Kit、核酸熒光染料SYBR Green I(Takara，日本)；慢病毒包裝載體、plvx-LINC00705及plvx-Vector載體、miR-143-3p mimic及NC mimic(上海漢恒生物)；轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體Lipofectamine MessengerMAX(Thermo，美國(guó))；CCK-8試劑(上海翊圣生物)；Tranwell小室及Matrigal基質(zhì)膠(BD，美國(guó))；Passive Lysis Buffer(PLB)裂解液、Luciferase Assay Reagent II及psiCHECK2載體(Promega，美國(guó))。

1.2 臨床樣本資料

收集內(nèi)蒙古赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科2018 年09 月 01日～2019 年12 月20 日收治的46 例OSCC患者，所有患者均首次診斷為惡性腫瘤，術(shù)前未行任何形式的抗腫瘤治療，所有提供腫瘤及癌旁組織的患者均對(duì)本研究知情同意，并簽字。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及處理

293T、CAL-27、SCC-4、SCC-9、SCC-25細(xì)胞采用DMEM+10%FBS培養(yǎng)，Tca8113細(xì)胞采用DMEM/F12+10%FBS培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境：37 ℃+5%CO2。利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)在Tca8113細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00705過(guò)表達(dá)及相應(yīng)的空白對(duì)照載體作為過(guò)表達(dá)組及空白組，在過(guò)表達(dá)組細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-143--3p mimic作為回復(fù)組；……