下調LINC00667靶向調控miR-34a抑制口腔鱗癌CAL-27細胞增殖并誘導細胞凋亡的體外研究

彭國棟 裴磊

口腔癌是頭頸部惡性腫瘤中的一大類，口腔癌中有約90%為口腔鱗癌，其發生涉及煙草、酒精刺激、病毒感染、免疫異常等多個因素[1]。口腔鱗癌的發生是一個多步驟、多基因共同作用的結果，其具體的發生機制還不明確[2]。積極尋找有效的分子標記物對于口腔鱗癌的治療意義重大[3]。LncRNA是長度大于200 bp的非編碼RNA，其可以在轉錄后、翻譯水平調控基因的表達，參與多個細胞生理和病理過程[4]。很多研究表明，LncRNA與人類多種疾病有關，如動脈粥樣硬化、哮喘、腦出血等，LncRNA可能是疾病治療的分子靶點[5-7]。LINC00667是近些年來發現的具有調控腫瘤進展作用的調節因子，其在膠質瘤中發揮促進作用[8]。LINC00667在結直腸癌中表達上調，下調LINC00667抑制結直腸癌細胞增殖并誘導細胞凋亡[9]。LncRNA作用機制與miRNA有關，其可以通過調控miRNA的表達參與多個生理過程[10]。前期的預實驗發現LINC00667和miR-34a存在互補結合位點。miR-34a在口腔鱗癌中發揮抑制作用，其能夠下調腫瘤細胞的增殖能力，誘導細胞凋亡[11]。本實驗探討下調LINC00667靶向調控miR-34a對口腔鱗癌細胞增殖、凋亡的影響，為靶向分子治療口腔鱗癌提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要材料和儀器

cyclin D1抗體、p27抗體(碧云天生物技術有限公司)；口腔鱗癌細胞CAL-27(廣州賽庫生物技術有限公司)；C-Caspase-3抗體(北京百奧萊博科技有限公司)；mimics control、miR-34a mimics、miR-34a inhibitor、inhibitor control(上海吉瑪制藥技術有限公司)；口腔鱗癌細胞SCC15(南京科佰生物科技有限公司)；口腔鱗癌細胞OSC-4(上海弘順生物科技有限公司)；shRNA control、LINC00667 shRNA(上海基爾頓生物有限公司)；正常口腔上皮細胞HOK(上海榕柏生物技術有限公司); Light Cycler 480熒光定量PCR儀(Roche公司，美國)；……