乳牙與恒牙牙髓干細胞成血管能力的比較

黃小亞 鄭雷蕾 李彩玉 劉東蓉 趙梓藝 胡赟

近年來利用牙源性干細胞再生牙髓進行了大量的研究，牙髓干細胞來源于牙髓，作為種子細胞運用于牙髓再生，具有天然的優勢。根據發育時間不同，牙髓干細胞可分為乳牙牙髓干細胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth cells,SHED)[1]和恒牙牙髓干細胞(dental pulp stem cells,DPSCs)[2],盡管有大量關于牙髓干細胞的研究，但目前大多數的研究聚焦于牙髓干細胞一般生物學特性及礦化能力的研究[3-5]，對乳牙和恒牙牙髓干細胞成血管能力的研究報道相對較少[6]，兩者成血管能力的差異未見報道。故本實驗擬探究乳牙和恒牙牙髓干細胞成血管能力的差異，進而為牙髓再生的治療方法提供實驗依據及新思路。

1 材料與方法

1.1 主要材料和儀器

納入2019 年4 月～2019 年12 月重慶醫科大學附屬口腔醫院10 例5～10 歲健康兒童因乳牙滯留拔除的乳牙樣本以及10 例15 歲以下健康青少年正畸治療拔除的前磨牙樣本。樣本收集征得患者及家屬知情同意并獲得倫理委員會批準。

L-DMEM培養基(Hyclone，美國)；血管內皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維生長因子(bFGF)(Pretech，美國)；胎牛血清(FBS)(Natocor，阿根廷)；CCK8試劑盒(同仁，日本)；Matrigel膠(BD，美國)；Trizol Reagent(Invitrogen，美國)；RT-PCR試劑盒(Promega，美國)；兔抗人CD31抗體(Abcam，英國)；兔抗人GAPDH抗體(CST，美國)；羊抗兔IgG抗體(上海碧云天)；超凈工作臺、細胞培養孵箱(Thermo，美國)；倒置相差顯微鏡(Nikon，日本)。

1.2 SHED、DPSCs的分離培養

無菌條件下分別取出各個牙齒的牙髓組織，用酶消化法(4 mg/ml中性蛋白酶和3 mg/mlI型膠原酶按1∶1比例混合)獲取細胞常規原代培養，培養3 d半量換液，之后2～3 d換液1 次，當細胞生長達到70%～80%融合時，消化后傳代培養至P3用于后續實驗。……