SXZG藥物對去卵巢大鼠顳下頜關節髁突結構的影響

從 叢，魏霞臻

(1.長安大學醫院，西安 710064；2.西安交通大學陜西天奎生物醫藥科技有限公司，西安 710061)

0 引言

顳下頜關節紊亂綜合征(temporomandibulardisorders,TMD)是口腔常見病之一，研究發現，老年婦女顳下頜關節髁突破壞及TMD的發病率高于老年男子，女性TMD的患病率是男性的2～5倍。機體內雌激素水平的異常易導致下頜髁突軟骨細胞的增殖和分化改變，繼而可能誘發顳下頜關節疾病[1-2]。有學者認為，髁突軟骨是雌激素的靶器官，雌激素通過與其受體結合，調節髁突軟骨細胞的增殖、分化及基質代謝，從而影響髁突的生長及改建[3]。本實驗中的試驗藥品SXZG藥物是以沙棘脂肪酸等不飽和脂肪酸的中藥組方制備成的中藥軟膠囊劑，前期研究已經證實，SXZG藥物可以降低絕經后骨質疏松癥的發病，但是其對顳下頜關節髁突有何影響目前還沒有研究。本實驗通過建立SD大鼠骨質疏松模型，制作大鼠顳下頜關節髁突部組織病理切片來觀察SXZG藥物對髁突部組織結構的影響，初步研究SXZG藥物對去卵巢骨質疏松大鼠顳下頜關節髁突的作用。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物

實驗動物選用60只8月齡SD雌性大鼠及10只3月齡SD雌性大鼠，平均體重為(290+20)g，均為SPF(無特殊病原體)級，動物合格證號：SCXK(京)2009-0004，由北京醫科院實驗動物研究所提供。實驗動物分籠，標準飼料喂養，溫度保持在21℃+2℃，濕度維持在65%+5%，可自由攝食、攝水，記錄進食量、攝水量。

1.2 主要試劑與儀器

SXZG藥物由西安交通大學天奎生物醫藥科技有限公提供，戊巴比妥鈉購自江蘇恩華藥業股份有限公司，己烯雌酚購自合肥久連制藥有限公司，仙靈骨葆膠囊購自貴州同濟堂制藥有限公司，蘇木精-伊紅染色試劑盒購自北京化學試劑公司，兔抗鼠OPG多克隆抗體及兔抗鼠OPGL多克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司。儀器：雙光子骨密度測定儀(美國HOLOGIC)、平推式切片機 (美國MICROTOME)、光學顯微鏡及半自動圖像數字化分析儀(日本Olympus)、激光掃描共聚焦顯微鏡(德國Leica TCS SP2型)。

1.3 實驗方法

1.3.1 建立骨質疏松模型

在60只8月齡SD大鼠中隨機選取50只，將大鼠全麻后摘除雙側卵巢作為去勢組，術后分層縫合肌肉及皮膚。剩余10只8月齡SD大鼠作為假手術組，將大鼠全麻后只打開腹腔，并不切除卵巢，再分層縫合。手術3個月后，隨機抽取去勢組大鼠10只，與假手術組的10只大鼠比較。用雙光子骨密度測定儀(美國HOLOGIC)檢測大鼠脛骨、腰椎、股骨三個部位的骨密度，結果顯示，去勢組大鼠脛骨、腰椎、股骨的骨密度均較假手術組顯著下降(P<0.05)，說明骨質疏松模型建模成功。

1.3.2 分組及給藥

將50只去勢大鼠隨機分為5組，每組10只。SXZG劑量1組(A組)、SXZG劑量2組(B組)、己烯雌酚片組(C組)、仙靈骨葆膠囊組(D組)，剩下一組去勢組(E組)與假手術組(F組)喂服空白乳劑。另設一組青年對照組G組，為10只3月齡SD雌性大鼠，喂服空白乳劑，最終共計7組。

1.3.3 制作組織病理學標本

各組大鼠灌服藥物3個月后，按組別處死，解剖分離出下頜骨，置于4%甲醛中固定一周。固定后，將頜骨放入EDTΑ脫鈣液(0.5 mol/L，pH=7.0)中充分脫鈣8周。脫鈣后，截取下頜骨髁突區域的軟骨與軟骨下組織，將組織塊石蠟包埋，用切片機制作髁突區4～5 μm厚的連續切片。將切片放在48℃烘箱中融蠟30 min，二甲苯脫蠟，梯度酒精至水，蘇木精-伊紅(HE)染色，二甲苯Ⅰ、Ⅱ中透明5 min，中性樹膠封片。

1.3.4 觀察指標

光學顯微鏡下觀察所有切片，使用圖像分析系統測量各組髁突軟骨的厚度以及軟骨下骨組織骨密度百分比，并計算平均值。

1.4 統計方法

2 結果

2.1 顳下頜關節髁突組織病理學觀察

鏡下可見髁突軟骨由表層到深層可分為4個層，即表面纖維層、增殖層、肥大層(該層含有較多的軟骨細胞，一般4～5列，隨年齡增長變得越來越薄)及鈣化軟骨層，各組軟骨下骨組織骨形態不一，見圖1及圖2。

圖1 各組大鼠顳下頜關節髁突軟骨HE染色(×200)Fig.1 HE staining of condyle cartilage of temporomandibular joint in each group(×200)

圖2 各組大鼠髁突軟骨下骨組織HE染色觀察(×40)SFig.2 Observation of HE staining of the subchondral bone tissue of the condyle in each group (×40)S

2.2 分析各組髁突軟骨厚度及軟骨下骨小梁面積百分比

本實驗中，去勢組E組與假手術組F組相比，髁突軟骨厚度明顯增加(P<0.05)，髁突軟骨下骨組織的骨小梁面積百分比明顯降低(P<0.05)；與E組相比，A組、B組髁突軟骨厚度均較E組減少(P<0.05)，梁面積百分比均較E組增高(P<0.05)；A組、B組與F組相比，髁突軟骨厚度的差異均沒有統計學意義(P>0.05)，軟骨下骨組織骨小梁面積百分比差異沒有統計學意義(P>0.05)；兩個陽性對照組C組與D組分別與E組比較，軟骨厚度均有所降低(P<0.05)，髁突軟骨下骨組織骨小梁面積百分比有所升高(P<0.05)，見表1。

表1 各組髁突軟骨厚度及軟骨下骨小梁面積百分比Tab.1 Condyle cartilage thickness and percentage of subchondral trabecular bone area in each group

3 討論

顳下頜關節紊亂綜合征是一類病因尚不完全明確而又有共同發病因素和臨床主要癥狀疾病的統稱，涉及咀嚼肌、顳下頜關節髁突、關節窩、關節盤、韌帶、咬合關系等，與心理、免疫、激素及關節負荷過重有一定關系。現代社會隨著人口老齡化的加劇，絕經后婦女罹患骨質疏松性骨關節炎的風險呈高發趨勢[4]。女性絕經后，由于雌激素快速缺乏發生的軟骨下骨質疏松是引發軟骨退變的重要啟動因素[5]。顳下頜關節是頜面部唯一的骨關節，研究顯示，女性人群中，顳下頜關節紊亂綜合征發生率與年齡有關[6]。骨質疏松患者，顳下頜關節髁突軟骨下骨的代謝能力會明顯降低[7]，動物實驗與循證醫學證實，骨質疏松癥對顳下頜關節存在不良影響，促使顳下頜關節出現一定程度的退行性變[8]。摘除大鼠雙側卵巢是建立絕經后骨質疏松模型的常用方法，且目前對于大鼠骨質疏松模型的研究更為透徹[9],因此本實驗選擇去勢大鼠作為研究對象。

髁突軟骨是繼發性軟骨，是下頜骨的一個重要生長區，能夠對機體激素水平、髁突位置、關節功能及機械刺激做出適應性改建，在面部的生長發育、顳下頜關節的生理改建過程中起到重要作用[10]。研究發現，將SD雌性大鼠雙側卵巢切除后，下頜骨髁突軟骨明顯增厚，且軟骨內成骨受到一定的影響[11]。另有實驗對8周齡大鼠髁突進行體外培養發現，雌激素能降低關節軟骨的厚度[12]。本實驗中，E組較F組顳下頜關節髁突軟骨厚度增加，且軟骨層次排列紊亂，厚薄不一，肥大軟骨細胞層變薄，軟骨下骨小梁疏松，出現骨小梁斷裂，網狀結構缺失，骨髓腔增大，軟骨下骨小梁面積百分比降低，發生了一定程度的退行性變，與上述結論一致。許鵬等研究證實，雌激素水平降低可導致體內骨轉換過程加速，使骨吸收大于骨形成，從而使下頜骨髁突發生退行性變，且外源性雌激素對因雌激素缺乏導致的髁突退行性變有一定的抑制和緩解作用[13]。本實驗中，陽性對照組C組大鼠髁突軟骨厚度較E組減少，軟骨下骨組織骨小梁面積百分比有所提高，證實了替代激素對于因雌激素下降導致的髁突退行性變有抑制作用。SXZG藥物是以沙棘油脂肪酸的中藥組方制備成的中藥軟膠囊劑，其主要成分含十六碳酸、十六碳烯酸、十八碳一烯酸、十八碳二烯酸、十八烷酸等不飽和脂肪酸。動物實驗證明，沙棘脂肪酸可直接或間接通過細胞因子的旁分泌及自分泌途徑改善絕經后骨質代謝[14]。本實驗中，經SXZG治療后，去卵巢骨質疏松大鼠髁突軟骨厚度較去勢組減少，髁突軟骨下骨組織骨小梁面積百分比有所提高，說明SXZG可預防大鼠因雌激素下降導致的髁突軟骨異常增厚，增加去卵巢大鼠下頜骨髁突部的骨形成，起到防治去卵巢大鼠因雌激素水平下降所致的髁突部骨量丟失的作用。

綜上所述，SXZG可預防去卵巢大鼠因雌激素下降導致的顳下頜關節髁突結構異常，緩解顳下頜關節的退行性變，其具體機制有待進一步研究。