車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備與質(zhì)控探究

王東升

【關(guān)鍵詞】麥角新堿;縮宮素;產(chǎn)后出血;治療效果

車(chē)前草是中醫(yī)臨床工作中的常用藥材，具有祛痰涼血、清熱解毒和利尿等作用，對(duì)水腫尿少、痰熱咳嗽或臃腫瘡毒的患者，可以起到顯著的治療效果[1]。本文詳細(xì)探討了車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備與質(zhì)控方法，以此為車(chē)前草在臨床治療工作中更好的應(yīng)用提供信息參考，具體研究?jī)?nèi)容如下。

1準(zhǔn)備階段

在制備車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑前，應(yīng)先準(zhǔn)備相關(guān)的儀器設(shè)備、試劑試藥和樣品，確保制備工作的順利開(kāi)展。儀器主要包括液相色譜儀、分析天平、超聲波清洗器和電子天平，試劑試藥為大車(chē)前對(duì)照品和分析純，樣品由四川川村中藥材有限公司、北京華邈藥業(yè)有限公司、亳州市譙城區(qū)萬(wàn)事祥中藥飲片有限公司、安徽省萬(wàn)生中藥飲片有限公司和浙江英特中藥飲片有限公司分別提供。樣品共計(jì)5個(gè)批次，產(chǎn)地分別為重慶、河北、江蘇、江西和浙江。

2方法與結(jié)果

2.1制備流程

首先選用車(chē)前草飲片100g，向其中加入1.2L的水，進(jìn)行浸泡、回流和過(guò)濾處理。其中，浸泡和回流的時(shí)間均為30min，過(guò)濾時(shí)應(yīng)趁熱。

然后向藥渣中加入1L的水，再進(jìn)行回流和過(guò)濾處理，本次回流時(shí)間控制在20min。最后將兩次濾液合并，通過(guò)減壓濃縮的方式，將濾液縮減為500ml即可。

2.2含量測(cè)定

2.2.1色譜分析

利用色譜分析的方式對(duì)車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑含量進(jìn)行測(cè)定，首先將濃度為0.1%的甲酸水溶液和乙腈，作為大車(chē)前苷對(duì)照品和車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的流動(dòng)相。并將柱溫和流速分別調(diào)整為40℃和1ml/min，可檢測(cè)出波長(zhǎng)和進(jìn)樣量為330nm和20μl，確保測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定可靠。經(jīng)測(cè)定可得，在該種條件下，供試品溶液中的大車(chē)前苷分離效果較好[1]。

2.2.2制備對(duì)照品溶液及供試品溶液

選取適量的大車(chē)前苷對(duì)照品，對(duì)其進(jìn)行稱(chēng)定處理，同時(shí)向?qū)φ掌分屑尤爰状?，使其成為濃度?.146μg/ml的對(duì)照品溶液。緊接著取1ml的車(chē)前草標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行搖勻、加25%甲醇、稀釋、超聲10min、冷卻、定容、搖勻和取續(xù)濾液的處理，完成供試品溶液的制備工作[2]。

2.2.3線(xiàn)性關(guān)系考察

將2ml、4ml、6ml、8ml和10ml的大車(chē)前苷對(duì)照品溶液，分別放置于10ml的量瓶中，并加入60%的甲醇至刻度，進(jìn)行適當(dāng)力度的搖勻處理。然后按照上述的色譜分析方法，測(cè)定大車(chē)前苷的峰面積，可得進(jìn)樣量為10μl。緊接著將進(jìn)樣量和封面量設(shè)為橫縱坐標(biāo)，完成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制工作。經(jīng)計(jì)算可得出回歸方程、R2值和線(xiàn)性范圍，分別為：Y=1321707.1X+61.6、0.9998、0.043-0.2146μg。

2.2.4試驗(yàn)

車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的試驗(yàn)，主要包括精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)。精密度試驗(yàn)需要選取同一車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液，采用上述的色譜分析方法反復(fù)進(jìn)樣6次即可。通過(guò)分析可得，供試品溶液中大車(chē)前苷的峰面積的RSD為0.61%，此數(shù)據(jù)代表儀器設(shè)備精密度較為良好。

重復(fù)性試驗(yàn)需要通過(guò)平行制備的方式，將6份車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液按照上述的色譜分析方法進(jìn)樣處理。由此可得，車(chē)前草標(biāo)準(zhǔn)湯劑中的大車(chē)前苷平均含量和峰面積的RSD，分別為0.27g/L和1.23%，此數(shù)據(jù)代表該方法重復(fù)性較好[3]。

穩(wěn)定性試驗(yàn)需要選取車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液，在其制備的0h、4h、8h、12h和24h，按照上述的色譜分析方法，分別計(jì)算出大車(chē)前苷的峰面積的RSD。經(jīng)測(cè)算可得，RSD為2.32%，此數(shù)據(jù)代表車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液在制備后24小時(shí)內(nèi)效果穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)需要先取已知含量的車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，增加同樣容量的大車(chē)前苷對(duì)照品，并平行制備6份試品，利用上述的色譜分析方法，計(jì)算大車(chē)前苷的峰面積的RSD和平均加樣回收率。經(jīng)測(cè)算可得，這兩種數(shù)據(jù)分別為1.52%和98.55%，表明該方法的準(zhǔn)確度較高。

除此之外，再分別選取20μl的對(duì)照品溶液和試品溶液，按照上述的色譜分析方法，完成5個(gè)批次的樣品測(cè)定工作，統(tǒng)計(jì)每批次樣品中大車(chē)前苷的含量。

2.3轉(zhuǎn)移率、出膏率及PH

通過(guò)公式：湯劑中指標(biāo)成分含量÷飲片中指標(biāo)成分含量×100%=轉(zhuǎn)移率，可以得出5批車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的大車(chē)前苷轉(zhuǎn)移率在9.11%-30.42%之間。在計(jì)算出膏率時(shí)，應(yīng)先取適量的車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，依次完成搖勻、水浴蒸干、105℃烘3h和冷卻30min處理，對(duì)膏體進(jìn)行稱(chēng)定質(zhì)量。而PH值則利用PH計(jì)測(cè)定即可，經(jīng)計(jì)算可得，出膏率在17.35%-25.21%之間，PH值在4.9-5.6之間。

2.4建立指紋圖譜

2.4.1色譜條件

色譜條件與上述色譜分析時(shí)的各項(xiàng)參數(shù)設(shè)置一致。

2.4.2制備供試品溶液

供試品溶液的制備方法與上述的制備方法保持一致。

2.4.3試驗(yàn)

該精密度試驗(yàn)的溶液選取、進(jìn)樣次數(shù)和操作流程，均與上述的精密度試驗(yàn)保持一致，但以6號(hào)峰為參照峰，分別計(jì)算出各峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD和相對(duì)峰面積的RSD。經(jīng)測(cè)算可得，相對(duì)保留時(shí)間RSD<0.41%，相對(duì)峰面積RSD<25.43%，這兩項(xiàng)數(shù)據(jù)表示儀器精密度較好。

該重復(fù)性試驗(yàn)的溶液選取、進(jìn)樣次數(shù)和操作流程，均與上述重復(fù)性試驗(yàn)保持一致，也是將6號(hào)峰作為參考峰，計(jì)算出各峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD 和相對(duì)峰面積的RSD。經(jīng)測(cè)算可得，相對(duì)保留時(shí)間RSD < 0.31%，相對(duì)峰面積RSD < 35.73%，這兩項(xiàng)數(shù)據(jù)表示制備方法重復(fù)性較好。

該穩(wěn)定性試驗(yàn)的溶液選取、進(jìn)樣次數(shù)、操作流程和色譜條件，均與上述的穩(wěn)定性試驗(yàn)保持一致，計(jì)算出各峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD和相對(duì)峰面積的RSD。經(jīng)測(cè)算可得，相對(duì)保留時(shí)間RSD<0.49%，相對(duì)峰面積RSD<35.69%，此數(shù)據(jù)代表車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液在制備后24小時(shí)內(nèi)效果穩(wěn)定。

除此之外，分別取5個(gè)批次的車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，按照上述的供試品溶液制備方法和色譜分析流程，完成HPLC的記錄工作。利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件，將時(shí)間窗設(shè)置為0.1，采取中位數(shù)法，可以計(jì)算出5批車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)與對(duì)照指紋圖譜相似度均>0.74。

3討論

3.1供試品處理及濃縮前后的考察

供試品處理的考察重點(diǎn)為溶劑濃度和稀釋倍數(shù)，本次考察的甲醇濃度為25%、50%、75%和100%四種。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，采用不同濃度和不同稀釋倍數(shù)的甲醇定容，對(duì)大車(chē)前苷含量的影響，均無(wú)明顯差異[2]。但甲醇為有毒物質(zhì)，故選取25%的甲醇溶液作為供試品的定容濃度，其稀釋倍數(shù)設(shè)定為25倍。通過(guò)供試品的制備方法和上述的色譜分析流程，觀(guān)察濃縮和非濃縮標(biāo)準(zhǔn)湯劑，對(duì)大車(chē)前苷的具體影響。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，濃縮處理對(duì)大車(chē)前苷無(wú)任何影響。

3.2切制處理對(duì)全草類(lèi)有效成分的溶出的影響

在5批次車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中，有2批次樣品為未切制狀態(tài)，將其與剩余3批已切制樣品對(duì)比，可以發(fā)現(xiàn)大車(chē)前苷含量和出膏率均明顯低于后者。由此可得，切制處理對(duì)全草類(lèi)有效成分的溶出，具有著有利的影響[3]。

3.3相似度低的原因

5組車(chē)前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度低的原因，主要由于生產(chǎn)環(huán)境、采收時(shí)間、加工方式和儲(chǔ)藏方式等方面的不同所致。

3.4質(zhì)量控制

根據(jù)《中國(guó)藥典》篩選車(chē)前，選取符合制備標(biāo)準(zhǔn)的5批次車(chē)前作為主要材料，通過(guò)研究車(chē)前的標(biāo)準(zhǔn)湯劑治療控制方法，可以將大車(chē)前苷轉(zhuǎn)移率范圍控制在9.11%-30.42%之間，出膏率的范圍控制在17.35%-25.21%之間，PH值控制在4.9-5.6之間，使各樣品圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度>0.74。