獻(xiàn)血者ELISA單試劑檢測(cè)呈反應(yīng)性標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果分析

黃愛(ài)瓊 肖韶英 黃伯泉 謝君謀 黃志健

臨床用血主要利用無(wú)償獻(xiàn)血者血液，為實(shí)現(xiàn)有效治療，需保證血液標(biāo)本安全。目前，國(guó)內(nèi)血站已經(jīng)大部分開(kāi)展核酸檢測(cè)（nucleic acid test，NAT）的方法，核酸檢測(cè)被公認(rèn)為是降低血清學(xué)窗口期漏檢風(fēng)險(xiǎn)及低病毒載量檢出的最佳解決方法[1]。酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）是血站普遍使用的方法。但是受到很多因素的影響，會(huì)使得ELISA單試劑呈反應(yīng)性。有文獻(xiàn)報(bào)道，因ELISA單試劑呈反應(yīng)性而淘汰的標(biāo)本量為0.66%[2]，血站將對(duì)不合格的血液進(jìn)行報(bào)廢處理。由于ELISA方法的局限性，難免出現(xiàn)假陽(yáng)性。這樣既浪費(fèi)了血液，也打擊了獻(xiàn)血者的熱情，造成獻(xiàn)血者的流失。現(xiàn)在回顧性分析本站2017年的獻(xiàn)血標(biāo)本ELISA單試劑呈反應(yīng)性的情況以及核酸檢測(cè)（NAT）結(jié)果的情況，以實(shí)施質(zhì)量控制，降低血液不合格率和淘汰率，節(jié)省血液資源，提升無(wú)償獻(xiàn)血者的積極性，現(xiàn)將分析結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

廣州血液中心2017年1月1日—2017年12月31日無(wú)償獻(xiàn)血標(biāo)本共345 164例，獻(xiàn)血者均符合國(guó)家《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467－2011）[3]。每位獻(xiàn)血者留取2管標(biāo)本，一管為5 mL EDTA-K2真空采血管（用于ELISA檢測(cè)），一管為5 mL EDTA-K2帶分離膠核酸專用采血管（用于NAT檢測(cè)）。ELISA管保存于2~8℃冰箱且于24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，NAT管采集后4 h內(nèi)離心，在標(biāo)本采集后24 h內(nèi)完成各項(xiàng)檢測(cè)。

1.2 主要儀器和試劑

自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)分析儀（瑞士HAMILTON，F(xiàn)AME24/30），自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)加樣儀（瑞士HAMILTON，MICROLAS STAR 8CH），酶標(biāo)儀，蓋立福Procleix TIGRIS核酸系統(tǒng)以及配套檢測(cè)試劑。HBsAg試劑（試劑1：北京萬(wàn)泰；試劑2：上?？迫A）; 抗-HCV試劑（試劑1：珠海麗珠;試劑2：上?？迫A）; 抗-HIV試劑（試劑1：美國(guó)伯樂(lè):試劑2：北京萬(wàn)泰）,篩查試劑均批檢合格并在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法與判定標(biāo)準(zhǔn)

用兩種ELISA和一種NAT試劑對(duì)所有標(biāo)本并行檢測(cè)，ELISA結(jié)果小于Cut off值為陰性，結(jié)果大于等于Cut off值為陽(yáng)性。兩種試劑均呈陰性則判為合格，兩種試劑均陽(yáng)性立即判為不合格，如果單試劑陽(yáng)性結(jié)果（稱為可疑），則該項(xiàng)目用雙試劑雙孔復(fù)檢，均為陰性者則判為合格，其中任何一種試劑呈陽(yáng)性都判為不合格。NAT可同時(shí)檢測(cè)HBV、HCV和HIV三種病毒核酸，陽(yáng)性結(jié)果表明其中有1～3種病毒核酸為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用（±s）表示、行t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的兩兩比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)兩兩比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA雙試劑陽(yáng)性結(jié)果數(shù)

2017年1月1日—2017年12月31日無(wú)償獻(xiàn)血標(biāo)本共345 164例，經(jīng)過(guò)ELISA雙試劑檢測(cè)后HBV、HCV、HIV可疑標(biāo)本數(shù)為2 956，占樣本數(shù)0.86%；HBV、HCV、HIV不合格標(biāo)本（包括雙試劑陽(yáng)性和復(fù)檢后陽(yáng)性）數(shù)為3 581，占總樣本數(shù)1.04%。詳見(jiàn)表1。

表1 2017年獻(xiàn)血者標(biāo)本ELISA可疑與不合格比例

2.2 ELISA可疑標(biāo)本的復(fù)檢后結(jié)果

2 956例HBV、HCV、HIV可疑標(biāo)本復(fù)檢后結(jié)果劃分為合格與單試劑呈反應(yīng)性不合格的標(biāo)本，HBV復(fù)檢后合格數(shù)為1 068，占HBV總可疑數(shù)的67.5%。HCV復(fù)檢后合格數(shù)為343，占HCV總可疑數(shù)的49.8%。HIV復(fù)檢后合格數(shù)為347，占HIV總可疑數(shù)的50.7%，詳圖1。ELISA復(fù)檢后不合格的標(biāo)本分為試劑1不合格和試劑2不合格，HBV和HIV試劑1和2陽(yáng)性率有顯著差異（P＜0.01），HCV試劑1和2的陽(yáng)性率沒(méi)有差異，詳見(jiàn)表2。

表2 ELISA可疑標(biāo)本復(fù)檢后不合格的分布情況

圖1 ELISA可疑標(biāo)本復(fù)檢結(jié)果

2.3 ELISA單試劑反應(yīng)性且核酸陽(yáng)性的結(jié)果

HBV試劑2單試劑反應(yīng)性不合格且核酸陽(yáng)性標(biāo)本占了HBV單試劑反應(yīng)性標(biāo)本的11.61%，其余試劑均少于1%，詳見(jiàn)表3。

表3 ELISA單試劑反應(yīng)性不合格標(biāo)本且核酸陽(yáng)性的結(jié)果

3 討論

近年來(lái)，血液的檢測(cè)模式一直在發(fā)展，2010年國(guó)內(nèi)逐漸開(kāi)展血液核酸檢測(cè)，此后檢測(cè)HBV、HCV、HIV都是采用兩種酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）的試劑和一種核酸（Nucleic Acid Test）的試劑。雖然核酸檢測(cè)已經(jīng)于2015年覆蓋全國(guó)[4]，但是ELISA作為重要的檢測(cè)方法之一，仍然需要不斷提高檢測(cè)靈敏度和特異性。對(duì)2017年本站血液的ELISA實(shí)驗(yàn)分析，可疑標(biāo)本數(shù)為2 956，占了總標(biāo)本量的0.86%，表明ELISA初檢需要加強(qiáng)預(yù)防假陽(yáng)性的各種措施，導(dǎo)致假陽(yáng)性的原因可能會(huì)有標(biāo)本、試劑污染，人為操作等。

目前HBV試劑和HIV試劑盒檢測(cè)可疑標(biāo)本的陽(yáng)性率是有顯著差異的，HCV兩種試劑并沒(méi)有差異。在2012年公布的新版《血站技術(shù)操作規(guī)程》[5]規(guī)定，明確血液HIV、HBV、HCV的篩查可以采用一種ELISA試劑和一種Nucleic Acid Test試劑的檢測(cè)模式。目前對(duì)于選擇哪種試劑盒也是一個(gè)難題。只采用1種ELISA檢測(cè)試劑進(jìn)行初篩，可能存在漏檢的風(fēng)險(xiǎn)[6]，為了血液的安全，大部分血站還是采用原來(lái)的模式進(jìn)行檢測(cè)。血清學(xué)ELISA單試劑檢測(cè)呈反應(yīng)性獻(xiàn)血者大部分核酸是陰性的，已經(jīng)有證實(shí)[7]有一部分是潛在合格的獻(xiàn)血者，對(duì)于目前召回獻(xiàn)血者的策略是合理的，防止打擊獻(xiàn)血者的信心，預(yù)防獻(xiàn)血者的流失。但是對(duì)于召回后的復(fù)查仍然是單試劑呈反應(yīng)性值得繼續(xù)探討。

在現(xiàn)有臨床研究中發(fā)現(xiàn)，血液篩查檢驗(yàn)要求越來(lái)越高。臨床管理中，只有做好血液篩查評(píng)估管理方案，這樣才能滿足患者血液檢驗(yàn)篩查需求。通過(guò)相關(guān)研究分析發(fā)現(xiàn)，血液篩查分析過(guò)程中，實(shí)施ELISA單試劑檢驗(yàn)?zāi)軌蛟u(píng)估血液樣本檢查的質(zhì)量，對(duì)血液自身情況能夠做出分析[8]。尤其是在血液篩查過(guò)程中，能夠從疾病篩查視角做好疾病的篩查和評(píng)估處置，對(duì)存有疑似的樣本進(jìn)行重點(diǎn)篩查和分析，從而剔除有問(wèn)題樣本。同時(shí)在獻(xiàn)血者血液篩查過(guò)程中，實(shí)施上述檢驗(yàn)分析，能夠了解到獻(xiàn)血者供血情況，對(duì)血液的篩查和評(píng)估有重要指導(dǎo)意義，因而為了能夠更為有效的提高血液篩查管理質(zhì)量，應(yīng)該重點(diǎn)完善上述檢查分析內(nèi)容，進(jìn)而保障在患者檢查過(guò)程中可以改善其臨床癥狀[9-10]。

胡文佳等指出，無(wú)償獻(xiàn)血者在供血結(jié)束后，需要對(duì)其血液樣本進(jìn)行篩查和分析，該過(guò)程中，實(shí)施ELISA單試劑檢驗(yàn)?zāi)軌蛄私鈽颖镜淖陨砬闆r，對(duì)樣本核酸的檢驗(yàn)安全性控制有一定指導(dǎo)意義，所以可在臨床檢驗(yàn)中將ELISA單試劑檢驗(yàn)技術(shù)推廣，以此提高臨床檢驗(yàn)指導(dǎo)水平[11]。孫婧等表示，獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血結(jié)束后，應(yīng)該及時(shí)為患者進(jìn)行血液篩查分析，這個(gè)過(guò)程中，可以通過(guò)ELISA單試劑檢驗(yàn)分析，篩查血液樣本中存有的缺陷，提升樣本篩查檢驗(yàn)質(zhì)量[12]。同時(shí)能夠在血液樣本篩查分析過(guò)程中，做好篩查評(píng)價(jià)，尤其是對(duì)于疑似樣本的篩查和處置更是需要及時(shí)作出評(píng)價(jià)。盧青松等指出，ELISA單試劑檢能夠?qū)ρ簶颖局械囊伤茦颖具M(jìn)行篩查，從HCV陽(yáng)性篩查分析著手，做好血液樣本的檢驗(yàn)和評(píng)估，提高血液樣本篩查指導(dǎo)能力，以此為血液疾病篩查提供幫助，提高無(wú)償獻(xiàn)血者血液安全檢查能力[13]。馮濤等人通過(guò)研究指出，在給予血液篩查分析過(guò)程中，以ELISA單試劑檢驗(yàn)?zāi)軌驗(yàn)榛颊吆Y查提供幫助，對(duì)改進(jìn)患者臨床病癥有一定幫助，所以可將該篩查方式完善，以此為患者診斷篩查質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)[14-16]。本研究結(jié)果與上述學(xué)者研究成果相符，表明ELISA單試劑檢對(duì)血液疾病篩查和分析具有重要指導(dǎo)意義，所以可滿足血液檢查診斷需求。

總結(jié)上述，ELISA仍是目前重要血液檢測(cè)手段之一，但需要不斷提高靈敏度和特異性，縮短窗口期，預(yù)防假陽(yáng)性。既要小心風(fēng)險(xiǎn)，又要杜絕浪費(fèi)現(xiàn)象。