化學(xué)發(fā)光法檢測梅毒特異性抗體的效果評(píng)價(jià)

張玉祥

（內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

0 引言

梅毒是一種由螺旋體感染引起的惡性傳染病，主要的傳播途徑為性傳播、血液傳播、體液傳播、母嬰傳播等，傳染性較高，會(huì)對(duì)患者的正常生活造成非常嚴(yán)重的影響。近些年來，為了控制梅毒的傳播，大多數(shù)醫(yī)院都采取創(chuàng)傷性檢查的方式來進(jìn)行血液篩查，以提高梅毒螺旋體特異性抗體檢測的準(zhǔn)確性。但是，很多檢測方法都無法兼顧敏感性、特異性和實(shí)驗(yàn)的簡單程度要求，因此本文針對(duì)CLIA 方法結(jié)合我院開展的ELISA、TPPA 以及WB 對(duì)梅毒特異性抗體進(jìn)行臨床分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2015 年4 月至2019 年4 月收集的120例血清標(biāo)本，作為研究對(duì)象，采用回顧式分析方法，按照檢測方式不同，將其分為觀察組與對(duì)照組。樣本年齡15～59 歲，平均（33.54±3.42）歲，其中潛伏期梅毒病例占比20%，一期梅毒占比50%，二期梅毒占比15%，三期梅毒占比15%。通過腦脊液檢查、血清梅毒螺旋抗體陽性試驗(yàn)，對(duì)潛伏期梅毒病例患者進(jìn)行檢查，未發(fā)現(xiàn)異常。患者皮膚黏膜損害顯微鏡檢查可看出明顯缺陷，腦脊液熒光螺旋體抗體實(shí)驗(yàn)吸收呈陽性患者占比12%。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)ws273-2007；簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝腎功能障礙；血液疾病。

1.2 方法

（1）儀器與方法：CLIA 試劑盒購自北京科美生物工程制藥有限公司，TPPA 試劑盒購至日本富士株式會(huì)社。WB 檢測試劑盒購自德國歐蒙德醫(yī)學(xué)診斷科技有限公司。采用北京科美東雅生物科技有限公司生產(chǎn)的Chaplin CLIA 分析儀，對(duì)血清樣本進(jìn)行檢測。

（2）檢測方法：嚴(yán)格按照試劑盒與儀器操作的說明書，應(yīng)用TPPA 方法以及CLIA 方法對(duì)樣本血清進(jìn)行抗體檢測。對(duì)于檢測結(jié)果不一致的情況下，按照WB 進(jìn)行分析。如果出現(xiàn)一條以上相對(duì)分子量在47000、45000、17000 或15000 的特異分子條帶時(shí)，即可判斷該血清檢測結(jié)果為陽性；如果印記模式出現(xiàn)分子量為上述一條特征的性狀條帶時(shí)，即可判斷結(jié)果為臨界陽性；如上述檢測結(jié)果均未出現(xiàn)或無顯色帶，則可判斷檢測結(jié)果為陰性。

（3）觀察組與對(duì)照組的檢測均由工作經(jīng)驗(yàn)在五年以上的同一組檢測工作人員來進(jìn)行，工作人員人數(shù)在3 人以上，各自獨(dú)立進(jìn)行判斷，相互并不干擾。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組檢測正確率，陽性符合率、陰性符合率、檢測時(shí)間、重復(fù)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件為SPSS 21.0，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，計(jì)數(shù)資料以χ2檢驗(yàn)，以率（%）表示，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組檢測時(shí)間顯著短于對(duì)照組患者，重復(fù)率顯著高于對(duì)照組，兩組之間具有顯著差異（P＜0.05），詳見表1。

表1 兩組患者治療恢復(fù)情況對(duì)比（,%）

表1 兩組患者治療恢復(fù)情況對(duì)比（,%）

觀察組總符合率顯著好于對(duì)照組患者，兩組之間具有顯著差異（P＜0.05），詳見表2。

表2 兩組檢測符合率對(duì)比（%）

觀察組血清檢測準(zhǔn)確率顯著好于對(duì)照組，兩組之間具有顯著差異（P＜0.05），詳見表3。

表3 兩組血清檢測情況對(duì)比（n）

3 討論

3.1 早期梅毒檢查的必要性

梅毒屬于乙類性傳播感染性疾病，在近年來的臨床分析當(dāng)中發(fā)病率不斷上升，梅毒蒼白密螺旋體對(duì)人體進(jìn)行侵蝕之后，可對(duì)患者的機(jī)體反應(yīng)帶來比較大的影響，梅毒的血清免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)主要是針對(duì)特異性抗梅毒螺旋體抗體和非特異性抗體，來進(jìn)行針對(duì)性檢測。隨著人們生活習(xí)慣的改變，梅毒的發(fā)病率出現(xiàn)了上升的趨勢，在世界范圍內(nèi)，自1994 年起，梅毒病例數(shù)增長幅度超過30%。對(duì)無償獻(xiàn)血人員的血液樣本進(jìn)行檢測，可發(fā)現(xiàn)其感染率介于0.15%～0.35%。2001 年經(jīng)過流行病相關(guān)研究調(diào)查分析，梅毒發(fā)病率在6.11%左右，而2017 年流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果顯示這一發(fā)病率已上升12%。從本研究獲得的相關(guān)回顧性分析報(bào)告，對(duì)住院患者進(jìn)行免疫檢測，以及對(duì)手術(shù)患者進(jìn)行術(shù)前的血液檢查，可以看出梅毒感染率約為3%。從這一疾病發(fā)展趨勢可以看出，只有對(duì)患者進(jìn)行早期診斷、早期治療才能夠避免疾病影響其他人造成大面積感染，并對(duì)患者進(jìn)行有效的病毒感染控制，避免其進(jìn)一步發(fā)展影響患者的身體健康，促進(jìn)患者預(yù)后[1]。

但是由于其診斷具有復(fù)雜性、不典型性，這就給臨床試驗(yàn)分析帶來了非常大的難度，如果采用敏感性較差的辦法，可能會(huì)延誤患者的治療時(shí)機(jī)，如果采用特異性較差的辦法，可能造成患者被誤診，影響患者的日常生活，給患者帶來不必要的負(fù)擔(dān)，造成醫(yī)療糾紛等。只有進(jìn)行高敏感性、高特異性的檢查，才能夠有效識(shí)別病毒，并避免漏診、誤診對(duì)患者的日常生活帶來影響，給患者的后續(xù)治療提供有效的指導(dǎo)[2]。

3.2 CLIA 檢查的臨床比較優(yōu)勢

目前臨床當(dāng)中對(duì)梅毒螺旋體進(jìn)行檢驗(yàn)的主要方法：聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、梅毒螺旋明膠凝集及以及化學(xué)發(fā)光法、免疫驗(yàn)證法等，這些方法各有優(yōu)勢。但化學(xué)發(fā)光法方便快捷、重復(fù)性好，因而在臨床當(dāng)中被廣泛的應(yīng)用[3]。除此之外，自2013 年起，美國醫(yī)學(xué)研究會(huì)還應(yīng)用特異性抗體檢測試驗(yàn)，酶聯(lián)合免疫吸收試驗(yàn)方法、膠體金膠和非特異性抗體試驗(yàn)甲苯胺紅不加熱血清實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行聯(lián)合對(duì)比分析，也取得了較好效果。但是相對(duì)來講這些檢驗(yàn)方法，操作比較復(fù)雜，受到工作人員的主觀判斷影響較為嚴(yán)重，在一期梅毒檢測的敏感性方面存在一定的不足[4]。

①TPPA：血清試驗(yàn)檢測是最早的一種實(shí)驗(yàn)室檢查方法之一，可以對(duì)梅毒螺旋體血清和梅毒特異性抗體進(jìn)行有效的識(shí)別[5]。這種方式已經(jīng)作為醫(yī)學(xué)臨床檢查例中主要診斷方式之一，進(jìn)入到患者的診斷當(dāng)中，以TPPA 方法為例，主要檢測原理是：運(yùn)用化學(xué)處理方式，對(duì)梅毒螺旋體重組蛋白、特異性抗原進(jìn)行相應(yīng)的分析，并通過梅毒血清和辣根過氧化酶的標(biāo)記情況，來對(duì)梅毒螺旋體抗體進(jìn)行數(shù)值檢測。該種方法可以對(duì)患者血液當(dāng)中的單克隆梅毒螺旋體基因情況，進(jìn)行有效地表達(dá)分析。同時(shí)，TPPA 可應(yīng)用明膠顆粒對(duì)于凝集反應(yīng)現(xiàn)象進(jìn)行比較有效的肉眼觀察，具有更好的敏感性[6]。TPPA 對(duì)于一期梅毒的檢測敏感性較低，對(duì)其余各期梅毒的敏感性和準(zhǔn)確性檢測較高，但從流行病學(xué)角度來看，一期梅毒患者具有高致病性和高傳染性，是梅毒迅速傳播的最主要病原，如果無法對(duì)一期梅毒患者進(jìn)行有效的檢測，那么將延誤患者的治療時(shí)機(jī)，并可能造成患者傳染更多的人。TPPA 對(duì)于一期梅毒檢測的敏感性僅在60%～70%[7]。在一些特殊情況下，其敏感性可低至50%。如本研究結(jié)果顯示，對(duì)120 例血清應(yīng)用TPPA 特異性抗體檢測，假陰性率概率為0.56%。且TPPA 需要采用試劑盒來進(jìn)行二次血清分離，檢測時(shí)間較長，步驟較為繁瑣，在結(jié)果的判斷上，受到人為因素的影響比較大，因而重復(fù)率較低，在使用的過程當(dāng)中受到多種因素的限制，影響臨床判斷的準(zhǔn)確性[8]。

②CLIA 是近些年來一項(xiàng)新的技術(shù)，目前已經(jīng)被各個(gè)醫(yī)院廣泛應(yīng)用在梅毒螺旋體抗體檢測的過程當(dāng)中，對(duì)于各期梅毒患者的抗體敏感性均較高，尤其是應(yīng)用在一期梅毒抗體當(dāng)中，敏感性可達(dá)到98.7%～100%，特異性較高，約為99%[9]。有學(xué)者在對(duì)7852 例梅毒抗體進(jìn)行跟蹤檢測，進(jìn)行大量樣本篩查的過程當(dāng)中就發(fā)現(xiàn)，CLIA 對(duì)梅毒螺旋體抗體檢測的陽性符合率和陰性符合率可分別達(dá)到99.92%和99.95%[10-11]。有研究在這個(gè)過程當(dāng)中，對(duì)樣本進(jìn)行加熱分析，例如加入甲苯安紅、快速血漿反應(yīng)素、進(jìn)行環(huán)狀卡片對(duì)比實(shí)驗(yàn)等聯(lián)合檢查當(dāng)中可以看出，對(duì)于檢測不一致的結(jié)果仍然要進(jìn)行明膠凝集試驗(yàn)方法檢測的復(fù)查，才能夠進(jìn)一步提高抗體檢測的準(zhǔn)確性與敏感性[12]。

3.3 綜合TPPA 與CLIA 檢驗(yàn)

梅毒的病程非常復(fù)雜，單純應(yīng)用一種檢測方法仍然存在一定的局限，尤其是人眼觀察與機(jī)器判斷，也存在一定的互補(bǔ)性。進(jìn)行臨床研究分析還要綜合考慮患者的意愿，避免主觀性的影響，提高結(jié)果的易保存性以及易重復(fù)性，充分降低試劑試驗(yàn)的費(fèi)用，避免場地的限制。由于本研究進(jìn)行的時(shí)間比較短，對(duì)患者進(jìn)行檢測的樣本數(shù)量比較小，因而在數(shù)據(jù)分析方面，仍然存在一定的不完善之處，在未來還需要不斷擴(kuò)大樣本容量進(jìn)行深化探討。

有研究指出，相對(duì)于TPPA，CLIA 的準(zhǔn)確率可提高2%～5%。敏感性可提高1%～6%。這與本研究成果基本一致[13]。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光檢測方法對(duì)于不同時(shí)期的梅毒病例具有良好的檢測性，符合非特異性抗體檢測的相關(guān)要求，可對(duì)患者的臨床病癥進(jìn)行合理表達(dá)，但是仍然存在一定的假陽性概率，需要聯(lián)合不同的檢測方式，來進(jìn)行綜合分析。