PPD 皮試聯合結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測對肺結核的診斷價值

謝友新，鐘麗萍，鐘雨融

（廣東省佛山市三水區疾病防治所，廣東 佛山 528100）

0 引言

目前，肺泡灌洗找抗酸桿菌、支氣管鏡活檢病理、支氣管鏡刷檢找抗酸桿菌、痰涂片找結核桿菌、痰結核菌培養均為臨床對肺結核的主要診斷手段，但由于我國痰培養陰性肺結核患者占比居多，導致上述診斷敏感度較差，現為探究更有效的診斷方式[1-2]，特選取2019 年1 月至2020 年8 月期間在我院接受治療的100 例肺結核患者以及100 例同期在我院接受治療的非肺結核性肺部疾病患者作為研究對象，對其分析后現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019 年1 月至2020 年8 月期間在我院接受治療的100 例肺結核患者作為臨床研究對象為觀察組，并選取100 例同期在我院接受治療的非肺結核性肺部疾病患者做對比對象為對照組。觀察組中男51例，女49例。年齡16～62歲，平均（44.39±2.21）歲。對照組中男50 例，女50 例。年齡16～61 歲，平均（44.41±2.23）歲。經過統計學處理，所有參與研究的患者的一般資料（年齡以及性別）等均無顯著差異，無統計學意義(P＞0.05)。醫院倫理委員會已對本研究的實施予以批準，且患者及家屬也已對研究基礎了解，并簽署同意書。

納入標準[3]：（1）符合肺結核診斷標準：胸部CT 掃描或胸片攝片所獲病灶特點與該疾病影像學特征相符，有活動性肺結核臨床表現，痰結核分枝桿菌培養陰性，臨床抗結核治療有效；（2）非肺結核組：實驗室檢查不支持肺結核診斷，影像學檢查與肺結核影像學特征不相符，無肺結核臨床表現。

排除標準[4]：（1）合并HIV 等免疫缺陷病者；（2）接受放化療治療者。

1.2 方法

所有患者均接受PPD 皮試以及結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測，其中PPD 試驗是將5U PPD 注入患者的前臂皮內，在兩至三天后，測量硬結直徑，對測量結果進行記錄，根據測量到的縱向直徑以及橫向直徑計算硬結平均直徑，即（縱向直徑+橫向直徑）/2=硬結平均直徑（mm）。所得值在10mm 以上則屬于試驗結果陽性。

SP0T-TB 測定是在患者入院后的三天內對患者的靜脈血進行采集，血液采集量為8mL，將其置入含肝素抗凝劑的血樣管中，將白細胞進行分離。再在其中加入細胞培養液，待細胞重懸后，再對其進行洗滌。在已包被抗IFN-y 抗體微量板的四個孔中加入細胞培養液，以此為陰性對照。再將植物血凝素（PHA）加至孔中作為陽性對照。將MTB 特異混合多肽CFP-10 與ESAT-6(上海復星)加至孔中為實驗孔。再于每個孔中加入培養好的懸液，每孔懸液內含細胞25 萬。在37℃環境中，對微量板進行培養，約16～20h。再通過PBS 進行洗滌，共洗滌四次。再加入抗人IFN-y 單克隆抗體，更換至2℃～8℃環境中進行培育，培育一個小時，再通過PBS 進行洗滌，共洗滌四次。再在每個孔內加入顯色底物液，放置于室溫環境中，七分鐘后開始觀察結果。并通過計算機輔助成像分析系統對斑點進行閱讀、統計。陽性評定標準為：空白對照孔有6～10 個斑點數，與此同時，抗原A 孔/B 孔內的斑點數高于或等于空白對照孔版點數的兩倍或空白對照孔有0～5 個斑點數，抗原A 孔/B 孔內的斑點數比空白對照孔斑點數多六個以上（包括六個）。陰性評定標準：不滿足陽性評定標準，但陽性對照孔具備良好的結果。通過T-SPOT-TB 的T 細胞斑點數計算空白對照孔與抗原A孔/B 孔內的斑點數之間的差值，以最大值為最終結果。抗原A 孔斑點數與空白對照孔的斑點數差值即抗原B 孔T 細胞斑點數，抗原B 孔斑點數與空白對照孔的斑點數差值即抗原B 孔T 細胞斑點數。

1.3 觀察指標

對比兩組患者的PPD 皮試以及結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測陽性結果。

對比觀察組患者PPD 皮試、結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測以及聯合檢測的準確率情況。

1.4 統計學方法

通過SPSS 22.0 統計學軟件計算研究內需對比的數據，樣本率的比較通過χ2檢驗計算，正態計量數據用“”表示，并通過t檢驗計算；以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組PPD 皮試以及結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測結果比較

檢測發現，觀察組患者的PPD 皮試陽性率以及結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測結果陽性率顯著高于對照組患者的，差異具有統計學意義（P＜0.05），詳細情況見表1。

表1 兩組PPD 皮試以及結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測結果比較 [n（%）]

2.2 觀察組PPD 皮試、結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測以及聯合檢測的準確率情況

檢測發現，觀察組患者中，聯合檢測準確率顯著高于單獨診斷準確率，差異具有統計學意義（P＜0.05），詳細情況見表2。

表2 觀察組PPD 皮試、結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測以及聯合檢測的準確率情況[n（%）]

3 討論

經流行病學調查研究發現，結核病屬于單一致病菌中致死率最高的病種，隨著免疫缺陷疾病種類增多、耐藥結核桿菌株增多以及人口流動性增大，該疾病在全球患病率均呈逐年遞增趨勢[5-6]。且該疾病患病初期無典型臨床特征，起病隱匿，故造成誤診率高等情況，導致患者的最佳治療時機被錯過。故探求該疾病的特異性診斷指標尤為重要[7-8]。

本研究經檢測發現，觀察組患者的PPD 皮試陽性率以及結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測結果陽性率顯著高于對照組患者的，差異具有統計學意義（P＜0.05）；觀察組患者中，聯合檢測準確率顯著高于單獨診斷準確率，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這提示了，PPD 皮試以及結核感染T淋巴細胞斑點試驗在結核病以及非結核性肺病的鑒別中具有較高價值，且聯合診斷能夠顯著提高診斷準確率[9-10]。究其原因，PPD 屬于皮膚試驗，屬于純蛋白衍化物，也屬于混合物，包含了諸多種類的抗原，卡介苗菌株、環境分枝桿菌、致病性分枝桿菌都有其所擁有的抗原，故單獨應用該試驗檢測并不能有效進行疾病鑒別[11]。而T 淋巴細胞斑點試驗是以結核分枝桿菌特異性抗原分泌物，對活化T 細胞進行刺激，使其生成IFN-γ 原理建立的,具有較高的特異性，抗原并不會與其他致病菌發生較叉，故敏感性較高[12]。故兩者聯合應用可顯著提高診斷準確率。

綜上所述，在肺結核的診斷中PPD 皮試聯合結核感染T 淋巴細胞斑點試驗檢測效果顯著。