磺胺嘧啶銀乳膏含量測定方法的優化和極端環境下的穩定性考察

李 玲，宋洪杰，丁德英，舒麗芯 （海軍軍醫大學：. 藥學院, . 長海醫院藥材科，上海 200433）

近年來，我國海軍大力加強實戰化軍事訓練，不斷提高軍事應對能力和應急突擊能力，高新技術條件下的未來海上作戰對藥材保障的要求越來越高，藥材保障是影響救治的主要因素之一[1]。海上高溫、高濕、高鹽環境對藥品的運輸、儲存和使用提出了新的考驗。磺胺嘧啶銀乳膏為磺胺類抗菌藥，臨床常用于預防和治療輕度燒傷繼發創面感染等，是一種療效好、應用廣泛的外用抗菌藥物。藥物制劑的含量符合規定標準是保障藥物療效的重要指標之一。目前，磺胺嘧啶銀乳膏含量測定的方法多種多樣，《中國藥典（二部）》2015 年版采用的是永停滴定法[2]，《中國醫院制劑規范》（第二版）則采用硫氰酸銨滴定法[3]，而《美國藥典》采用HPLC法測定磺胺嘧啶銀的含量[4]。用滴定法測定含量時容易受到基質的干擾，影響終點的判斷，《美國藥典》方法的供試品前處理煩瑣。根據已報道的文獻資料[5-6]，本研究對磺胺嘧啶銀乳膏含量測定方法進行優化，建立了反相HPLC 測定磺胺嘧啶銀乳膏中該成分含量的方法，并首次采用復合式鹽霧試驗箱模擬海洋高溫、高濕、高鹽環境，考察了磺胺嘧啶銀乳膏在極端環境下的穩定性，為特殊環境下的藥品質量研究提供方法借鑒，并為優化遠海作戰藥材保障提供數據支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20A 高效液相色譜儀，包括LC-20AT 紫外檢測器和Labsolution 工作站（日本島津公司）METTLER AE240 型電子天平（瑞士梅特勒公司），ZH-AYSH-90 復合式鹽霧試驗箱 (香港正航儀器設備有限公司)。

1.2 試藥

對照品：磺胺嘧啶銀(USP，批號：RO3500，純度99.9%)，磺胺嘧啶銀乳膏(海軍軍醫大學附屬長海醫院，規格：1%，批號：20191207、20191208、20191209)，乙腈為色譜純，氨水為分析純，磷酸為優級純(國藥集團化學試劑有限公司)，實驗用水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸 (8∶92，V/V)，流速1.0 ml/min，進樣量10 μl，柱溫30℃，檢測波長254 nm。

2.2 對照品溶液的制備

取磺胺嘧啶銀對照品10 mg，精密稱定，置50 ml 棕色量瓶中，加入10%氨水溶液溶解稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液(0.2 mg/ml)，精密量取對照品儲備液0.5 ml 置10 ml 量瓶中，加10%氨水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得磺胺嘧啶銀對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將磺胺嘧啶銀乳膏置于復合式鹽霧試驗箱中，溫度50℃，濕度90%，鹽度5%氯化鈉[7-8]，分別放置0、2、4、6、8、10、12 周取樣測定。

精密稱定磺胺嘧啶銀乳膏1 g，置于50 ml 棕色量瓶中，加入10%氨水溶液適量，超聲20 min，使乳膏充分溶解并稀釋至刻度，過濾，取續濾液0.5 ml，置于10 ml 量瓶，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

根據磺胺嘧啶銀乳膏處方制備不含磺胺嘧啶銀的空白乳膏劑，按照“2.3”項下制備方法制成陰性樣品溶液。

2.5 專屬性試驗

分別取陰性樣品溶液、對照品溶液及供試品溶液各10 μl，按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，結果如圖1 所示，供試品溶液在與對照品溶液對應位置出現相對應的色譜峰，陰性樣品溶液無干擾，方法專屬性良好。

圖1 專屬性考察典型色譜圖

2.6 線性及范圍

精密量取對照品儲備液適量置于10 ml 棕色量瓶中，用10%氨水稀釋，依次配制成濃度分別為4.00、8.00、10.00、12.00、16.00、20.00 μg/ml 的對照品溶液，作為線性工作溶液。按“2.1”項下色譜條件，進樣10 μl，以磺胺嘧啶銀的濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，得到回歸方程：Y=22 808X?1 858，r=0.999 9，結果表明，磺胺嘧啶銀在4.00～20.00 μg/ml 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.7 精密度試驗

取對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件在1 d 內進樣6次，以及連續3d 分別進樣，測定磺胺嘧啶銀峰面積，結果顯示，日內精密度RSD 為0.33%，日間精密度RSD 為0.97%，表明儀器的精密度良好。

2.8 重復性試驗

取同一批號(20191208)樣品1 g，共6 份，精密稱定，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別測定，結果顯示，磺胺嘧啶銀平均含量為95.27%，RSD 為1.07% (n=6)，表明方法的重復性良好。

2.9 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，室溫下分別放置0、2、4、8、12、24 h 后分別按“2.1”項下色譜條件進樣分析，考察溶液的穩定性，測定結果的RSD 為0.97%，表明供試品溶液至少在24 h 內穩定性良好。

2.10 回收率試驗

精密稱取磺胺嘧啶銀乳膏空白基質6 份，各1 g，置于50 ml 量瓶中，分別加入磺胺嘧啶銀對照品10 mg，再加入10%氨水溶液適量，超聲后按“2.3”項下方法進行制備并測定，計算回收率，結果平均回收率為101.47%，RSD 為2.33% (n=6)。

2.11 耐用性考察

考察包括色譜柱（Agilent ZORBAX SB-C18：4.6 mm×150 mm，5 μm，Agilent EXTEND-C18：4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫（28、30、32℃），流速（0.9、1.0、1.1ml／min）3 個因素對試驗結果的影響，結果顯示，磺胺嘧啶銀峰面積的 RSD 均<10%，其中，微調流速對保留時間和峰面積的影響較大，但主成分與降解后出現的新雜質分離度良好，不影響含量測定結果，如圖2 所示，表明該方法具有良好的耐用性。

圖2 耐用性考察流速對分離的影響

2.12 含量測定

分別取3 個批次的樣品，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，用“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，按外標法分別計算磺胺嘧啶銀的含量，結果如表1 所示。

表1 不同存儲時間樣品中磺胺嘧啶銀的含量變化測定結果(按標示量計算/%)

3 討論

磺胺嘧啶銀是難溶的兩性藥物，只能在硝酸、氨水等少數溶劑中溶解[9]。本研究采用10%氨水溶解磺胺嘧啶銀，并用50℃超聲處理，使基質分散，冷卻至室溫后，定容，靜置20 min，過濾，再用流動相稀釋，HPLC 測定磺胺嘧啶銀的含量，并進行了完整的方法學考察，符合藥典規定的各項要求。與《美國藥典》的樣品前處理方法相比，該方法操作簡單、容易過濾、重復性良好。

乳膏劑常規應保存在陰涼干燥處，然而，遠海作戰環境特殊，高溫、高濕、高鹽是其主要特征，例如，擔負海上救護任務的醫院船，船艙多為密閉空間，艙內溫度高，不利于藥品的長期保存[10]。在如此特殊的環境下，藥品是否能在其擬定的保質期內保持質量的穩定性，如何確定或延長藥品在極端環境下的保質期是值得深入研究的課題。本研究首次采用復合式鹽霧試驗箱模擬高溫、高濕、高鹽環境，考察磺胺嘧啶銀乳膏的穩定性，結果顯示，在此極端環境下，磺胺嘧啶銀乳膏在1 個月內，其性狀、pH 值、粒度和含量沒有發生顯著變化，2 個月以后，乳膏由白色轉為褐色，明顯呈水樣狀，有較大的塊狀凝結，含量下降超過30%，結果表明磺胺嘧啶銀乳膏在溫高、濕高、鹽環境下不穩定，在其運輸、儲存和使用過程中應充分考慮環境的影響，對于長遠航任務應考慮對該制劑的外包裝加以防護措施，或更換同類型的其他品種。本研究可為極端環境下的藥品穩定性研究方法的開發和運用提供參考。