肝癌患者中IL-17表達與HBV基因型的相關性研究

楊 娜 謝會娟 梁文龍

原發性肝癌是臨床最為常見的惡性腫瘤疾病之一，患者發病后表現為明顯的肝區疼痛，出現腹痛腹脹等癥狀，并隨著患者病情的進展，會出現肝臟組織的壞死、破裂，可引起腹腔內出血，出現腹膜刺激征，進而嚴重影患者的生命健康和生活質量，并最終危及患者的生命[1-2]。隨著社會工作壓力的增加和生活習慣的改變，原發性肝癌的發病率逐年升高，已成為威脅人類生命安全的最重要的癌癥腫瘤疾病。在對于原發性肝癌的發病機制研究中，乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是肝癌發生的1個重要誘因，在大部分肝癌患者中均能檢出HBV，隨著乙型肝炎病毒攜帶者的增多及乙型肝炎發病率的升高，使得原發性肝癌的發病率逐年升高[3-4]。隨著研究的深入，人們發現在肝癌發病過程中伴隨著免疫反應、炎性反應等過程的參與。白細胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)是1種重要的促炎性因子，在機體多種炎癥反應及自身免疫過程中發揮作用，具有促進多種腫瘤生長的作用，也有相關報道表明IL-17可能是潛在的評估肝癌患者病情、預后的敏感指標[5-6]。而目前臨床對于肝癌患者的IL-17水平與HBV感染過程及HBV基因型之間是否存在某種聯系尚未有明確的研究證實[7]。為此，本研究中選取肝癌患者為研究對象，通過檢測其IL-17的表達，進一步探討IL-17與HBV基因型的相關性，現將主要研究內容報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年04月至2020年04月期間我院收治的92例原發性肝癌患者為研究對象納入肝癌組，納入標準：① 患者經CT、MRI、病理學檢查確診為原發性肝癌，符合中華醫學會腫瘤學會制定的相關診斷標準；② 患者均為首次確診；③ 患者均伴有HBV感染；④ 患者自愿參與本項研究，配合完成研究過程；⑤ 研究方案經醫院倫理學委員會審查通過。排除標準：① 患者并發其他腫瘤疾病；② 入組前已接受治療藥物干預的患者；③ 癌癥終末期患者；④ 患者基礎資料、臨床檢測資料缺失或不完善。92例患者中男性47例、女性45例，年齡42～78歲，平均年齡(56.92±10.83)歲，體質指數(Body mass index，BMI)18～26 kg/m2，平均BMI(22.38±2.83)kg/m2，腫瘤分期：Ⅱa期21例、Ⅱb期39例、Ⅲ期32例。選取同期在我院進行治療的乙型肝炎患者80例為肝炎組，患者均確診為乙型肝炎，男性39例、女性41例，年齡41～76歲，平均年齡(54.82±11.76)歲，BMI19～27 kg/m2，平均BMI(23.13±2.98)kg/m2，另選同期在我院進行健康檢查的健康受試者50例為對照組，其中男性28例、女性22例，年齡41～74歲，平均年齡(55.23±11.36)歲，BMI19～26kg/m2，平均BMI(22.43±2.89)kg/m2，受試者各項生命體征指標正常，無肝部疾病史。

1.2 實驗方法

肝癌組、肝炎組患者和健康對照組受試者入院后采集晨起空腹肘靜脈血約3 ml，加入到含有乙二胺四乙酸二鈉抗凝管中，在DT-5B型臺式高速離心機(德國艾本德離心設備公司)中離心分離，轉速5000 rpm、離心10 min后分離得到血清上清液標本，以酶聯免疫吸附試驗法檢測患者的IL-17水平，檢測儀器為Emax 2100型全波段多功能酶標儀(美國美度公司)，檢測試劑盒購置于安徽深藍科技有限公司，操作按儀器試劑盒說明書要求進行。對肝癌組、肝炎組患者采用PCR擴增技術提取HBV DNA，采用 PCR 結合熒光探針的體外DNA擴增和檢測技術，定量檢測血清標本中的 HBV DNA含量，檢測儀器為RR901 PCR梯度擴增儀(德國Whatman Biometra公司)，乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒購置于達安基因生物科技公司，將測序結果輸入NCBI在線病毒基因分型工具，經序列對比確定HBV基因型。

1.3 評價指標

對肝癌組、肝炎組患者和健康對照組受試者的IL-17水平進行統計對比，并將肝癌組患者按腫瘤分期分為Ⅱa期組(21例)、Ⅱb期組(39例)、Ⅲ期組(32例)，對三組患者間的IL-17水平進行統計對比。根據HBV基因型檢測結果，對肝癌組、肝炎組患者的HBV基因型分布進行統計對比，并對肝癌組患者不同HBV基因型間IL-17水平進行統計對比，探討IL-17與HBV基因型分布的關系。

1.4 數據分析

2 結果

2.1 各組患者IL-17水平對比

肝癌組患者的IL-17水平高于肝炎組且高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 各組患者IL-17水平對比

2.2 肝癌組不同分期患者IL-17水平對比

肝癌組患者中隨著患者分期的增加，IL-17水平呈現逐漸上升的趨勢(P<0.05)，見表2。

表2 肝癌組不同分期患者IL-17水平對比

2.3 肝癌組、肝炎組HBV基因型分布對比

肝癌組患者HBV基因型分布與肝炎組患者HBV基因型分布有顯著性差異，肝癌組患者以C基因型為主，肝炎組患者以B基因型為主(P<0.05)，見表3。

表3 肝癌組、肝炎組HBV基因型分布對比(例，%)

2.4 肝癌組HBV不同基因型患者IL-17水平對比

肝癌組患者中，HBV C基因型患者IL-17高于B基因型且高于A基因型、D基因型患者(P<0.05)，見表4。

表4 肝癌組HBV不同基因型患者IL-17水平對比

3 討論

肝癌是臨床最為常見的惡性腫瘤疾病，是起源于肝臟上皮細胞惡變的腫瘤疾病。我國作為人口大國，有龐大的原發性肝癌的發病人群。目前，對于原發性肝癌的發病原因和發病機制尚未完全闡明[8]。其中HBV感染、免疫反應、炎性因子反應等是肝癌發生的重要誘因，相關的報道顯示在肝癌患者中多伴有HBV病毒的陽性表達和一些細胞因子成分水平的上升。其中IL-17作為1種經典的促炎性因子，是由機體的Th17細胞分泌的特征性的細胞因子， 通過刺激靶細胞釋放前炎性介質，誘導機體的中性粒細胞活化聚集，進而可加重機體的炎癥反應，在多種癌癥腫瘤疾病的發生發展過程中有水平的異常改變，多呈現高表達[9-10]。而機體的抗病毒免疫清除過程可造成肝細胞的損傷，誘發原發性肝癌的發生。因此，IL-17在肝癌患者中的表達過程與HBV的表達及基因型的分布是否存在關聯，對于原發性肝癌發病機制的深入探討有著重要意義，本研究基于此開展相關研究，旨在進一步探討肝癌患者IL-17與HBV基因型的相關性[11]。

在本研究中，對各組患者受試者的IL-17水平進行檢測對比，結果顯示肝癌組患者的IL-17水平高于肝炎組且高于對照組，且肝癌組中隨著患者的腫瘤分期的升高，患者IL-17水平呈現依次升高的趨勢，表明IL-17的高表達可能參與肝癌的發生、發展過程中。這是因為IL-17主要是由Th17細胞和中性粒細胞分泌產生的細胞因子，通過促進T細胞激活并介導纖維細胞、中性粒細胞、巨噬細胞等分泌多種致炎因子，進而促進炎癥反應的發生[6，12]。進而導致的肝臟細胞的炎性損傷，進而參與肝臟腫瘤細胞的形成和發展過程。在IL-17表達水平與HBV感染相關性分析中，乙型肝炎、肝癌患者的IL-17均處于較高水平，表明IL-17可能參與了HBV相關肝臟疾的發生、發展并且可能與肝臟嚴重程度相關，IL-17水平變化與HBV感染程度可能有一定的關聯[13]。在基因型對比中，肝癌組患者HBV基因型分布與肝炎組患者HBV基因型分布有顯著性差異，肝癌組患者以C基因型為主，肝炎組患者以B基因型為主，這與既往的臨床報道結果基本吻合。HBV有多種基因型，其中亞洲地區主要以A、B、C、D四種基因型為主，B基因型的病變程度相對較輕，主要出現在乙型肝炎患者及HBV無癥狀攜帶者人群中，而C基因型則是發展成為嚴重肝病的機率較高，進而易出現在肝癌患者人群中，在肝炎、肝癌患者人群中表現出了HBV基因型的差異。因此，通過對患者的HBV基因型的檢測也有助于原發性肝癌的診斷，較早對HBV C基因型感染者采取積極有效的抗病毒治療可能會減少原發性肝癌的發生和進展[14]。在IL-17表達水平與HBV基因型的相關性研究中，肝癌組患者中，HBV C基因型患者IL-17高于B基因型且高于A基因型、D基因型患者，初步表明IL-17與HBV基因型存在一定的相關性，表明HBV感染者不同基因型間免疫應答有所差異，肝癌患者HBV C基因型由于病毒的影響激活機體的免疫應答反應，進而表現出IL-17的高表達。

綜上所述，肝癌患者中IL-17呈現高表達，隨肝癌的發生、發展過程呈現規律性升高。并且IL-17的表達與HBV基因型有密切的關聯，在C基因型中IL-17呈現高表達。因此，通過對患者IL-17水平的檢測對于肝癌的發病診斷、病情評估、治療靶點選擇及預后效果評估有重要的參考意義。