血清中PKM2和TSGF水平與宮頸癌患者病情進展的相關性

孫紅娜 王月榮 黃勇華 陶偉華 劉曉明

相關報道顯示：全世界范圍內，宮頸癌新增病例數高達50萬例，發病率僅次于乳腺癌[1-2]。通常宮頸癌在早期缺乏明顯癥狀，且宮頸癌患者預后差[3]，近年來宮頸癌發病出現了年輕化趨勢且育齡女性患病率逐年增加，因此在已婚或適婚的育齡女性中加大排查力度，早發現、早治療，對提高宮頸癌臨床療效具有重要意義[4]。目前血清標志物，如：鱗狀細胞癌抗原(squamous cell carcinoma，SCC)、糖蛋白抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)、丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase M2 type，PKM2)和惡性腫瘤特異生長因子(tumor specific growth factor，TSGF)等為宮頸癌的診斷和治療提供了重要依據[5-6]。鑒于此，本研究選擇宮頸癌及宮頸上皮瘤樣病變患者為研究對象，檢測其血清中PKM2和TSGF的水平，并分析二者與患者病情的相關性，以期為宮頸癌的診治提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性選擇2017年1月至2020年1月本院收治的宮頸癌及宮頸上皮瘤樣病變患者為研究對象，以手術病理學確診為宮頸癌的60例患者作為宮頸癌組，經陰道鏡下活檢、病理學確診為宮頸上皮瘤樣病變的50例患者作為病變組，另選取同期于本研究體檢中心進行健康體檢的健康女性50例為正常對照組。3組研究對象中，病變組：年齡25～65歲，平均(42.19±6.43)歲，體重指數(23.17±3.16)kg/m2；宮頸癌組：年齡25～65歲，平均(41.70±5.53)歲，體重指數(23.09±3.40)kg/m2；正常對照組：年齡25～65歲，平均(42.19±6.43)歲，體重指數(23.17±3.16)kg/m2。

1.2 入選標準

納入標準：①均經臨床病理確診為宮頸癌或宮頸上皮瘤樣病變；②年齡25～65歲；③無放化療及手術治療史。排除標準：①合并其他惡性腫瘤患者；②臨床資料不完整者；③合并其他主要器官功能不全者；④合并其他可能影響檢驗結果的疾病患者。本院倫理學研究委員會已批準并通過本研究內容，入選患者均知情同意本研究內容并簽署同意書。

1.3 血清中PKM2和TSGF含量檢測

于入院后1天，在患者正式治療前采集患者及健康體檢者空腹靜脈血2 ml，收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 h或4 ℃過夜，然后1 000×g離心20 min，取上清，-80 ℃保存。采用人PKM2和TSGF ELISA試劑盒，檢測血清中PKM2和TSGF含量：從室溫平衡20 min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4 ℃。設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50 μl，然后將樣本孔中加入待測樣本50 μl；空白孔不加，除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100 μl，用封板膜封住反應孔，37 ℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。然后，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350 μl)，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。每孔加入底物A、B各50 μl，37 ℃避光孵育15 min后加入終止液50 μl，15 min內，采用美國Thermo Fisher公司MK-3型全自動酶標儀在450 nm波長處測定各孔的OD值。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 3組血清中PKM2和TSGF含量比較

與正常對照組相比，病變組和宮頸癌組患者血清中PKM2和TSGF含量均顯著增加；與病變組相比，宮頸癌組患者血清中PKM2、TSGF含量也顯著增加，差異均具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清中PKM2和TSGF含量比較

2.2 PKM2和TSGF含量與患者臨床病理特征的相關性

不同年齡段宮頸癌患者血清中PKM2和TSGF含量相比，差異無統計學意義(P>0.05)；不同腫瘤直徑、TMN分期、分化程度、組織學類型以及淋巴結轉移情況的宮頸癌患者血清中PKM2和TSGF含量差異均具有統計學意義(P<0.05)，即與腫瘤直徑≤4 cm、Ⅰ～Ⅱ期、高分化程度、腺癌以及未發生淋巴結轉移的患者相比，腫瘤直徑>4 cm、Ⅲ～Ⅳ期、中低分化程度、鱗癌以及發生淋巴結轉移的患者血清中PKM2和TSGF含量均顯著升高，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 PKM2和TSGF含量與患者臨床病理特征的相關性

2.3 血清PKM2和TSGF含量與患者病情進展的相關性

宮頸癌血清PKM2和TSGF含量與患者病情進展具有顯著正相關性(γ均>0，P均<0.05)，即隨著宮頸癌發病及病情進展，患者血清中PKM2、TSGF水平逐漸升高。見表3。

表3 血清PKM2和TSGF含量與患者病情進展的相關性

3 討論

宮頸癌的發生一般需經歷高危型HPV感染正常宮頸組織、宮頸上皮內病變以及宮頸癌等過程，雖然該腫瘤發病過程目前已較為明確，但發病的具體分子機制目前仍未見報道，研究表明：HPV感染是宮頸癌發生的主要誘因[1,7]。近年來，隨著生活習慣及飲食習慣的變化，宮頸癌發病人群平均年齡呈現年輕化趨勢，因此該腫瘤的臨床診斷和篩查是降低臨床死亡率并改善患者預后的重要手段[8]。相關研究顯示：PKM2是糖酵解途徑中的限速酶，參與腫瘤的發生和進展，其在腫瘤中呈高表達，被認為極有可能是腫瘤研究的重要靶點[9]。TSGF是一種在惡性腫瘤血管增生中起重要作用的指標，是惡性腫瘤及其周圍毛細血管擴增的結果，并隨腫瘤進展釋放到外周血中，在腫瘤初期即可達到較高水平，因此在腫瘤惡性腫瘤早期診斷中具有重要意義[10-12]。

本研究通過檢測宮頸癌患者血清中PKM2和TSGF水平，分析其與宮頸癌病情進展的相關性，結果顯示：與正常對照組相比，病變組和宮頸癌組患者血清中PKM2和TSGF含量均顯著增加；與病變組相比，宮頸癌組患者血清中以上指標含量也顯著增加，差異均具有統計學意義(P<0.05)，表明：隨著女性宮頸組織病變及癌變狀況的發生，其血清中PKM2和TSGF水平均顯著升高，顯示出該兩個指標與宮頸癌發生及進展的相關性，與蔡尚霞[13]和張建玲[14]。另外，本研究中不同年齡段宮頸癌患者血清中PKM2和TSGF含量相比差異無統計學意義(P>0.05)，不同腫瘤直徑、TMN分期、分化程度、組織學類型以及淋巴結轉移情況的宮頸癌患者血清中PKM2和TSGF含量差異均具有統計學意義(P<0.05)，表明：宮頸癌患者血清中PKM2和TSGF水平與宮頸癌腫瘤直徑、TMN分期、分化程度、組織學類型以及淋巴結轉移情況密切相關。因此這兩個指標的水平變化可作為宮頸癌的生物學標志用于輔助診斷[15-16]。

本研究中相關性分析結果顯示：宮頸癌血清PKM2和TSGF含量與患者病情進展具有顯著正相關性(γ均>0，P均<0.05)，表明該兩個指標的表達隨著育齡女性宮頸病變及癌變程度加深而顯著增加，宮頸病變或癌變患者血清中該兩個指標的水平變化可作為女性宮頸病變或癌變篩查及診斷的評判依據。另外，本研究不足之處在于納入樣本量較少，且雖然提出宮頸癌血清PKM2和TSGF含量可作為育齡女性宮頸癌篩查的依據，但并未對該標準的具體數值范圍進行深入探討，這些將在后續研究中延長樣本納入年限、擴大樣本量以進一步展開分析。

綜上所述，宮頸癌患者血清中PKM2和TSGF水平與宮頸癌患者臨床特征以及病情進展密切相關，可考慮將PKM2、TSGF表達水平變化作為女性宮頸癌篩查及診斷的評判指標。