復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠血清抗氧化功能的影響

張?jiān)坡叮x凱桓，宋澤和，張海涵，劉自逵*，賀 喜*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128；3.湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南長(zhǎng)沙 410128；4.湖南加農(nóng)正和生物技術(shù)有限公司，湖南長(zhǎng)沙 410128）

在生物機(jī)體中自由基的產(chǎn)生來(lái)自于正常細(xì)胞的有氧代謝以及一些疾病過(guò)程和外來(lái)生物刺激的異常反應(yīng)[1-2]。丙二醛（MDA）是反映過(guò)氧化物積累的指標(biāo)，正常情況下生物體內(nèi)含有總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等可有效清除動(dòng)物機(jī)體自由基，減輕其氧化狀態(tài)[3-4]。在畜禽生產(chǎn)過(guò)程中，隨著年齡的增長(zhǎng)及疾病的發(fā)生，畜禽機(jī)體清除自由基的能力開(kāi)始下降。中草藥具有抗氧化、增強(qiáng)免疫和抑菌殺菌等功效，是綠色環(huán)保的抗生素替代物。復(fù)方刺五加散由刺五加、女貞子及越橘3 種粉末按一定比例組成，3 種中藥均被證實(shí)具有顯著的抗氧化功能[5-7]。研究表明，刺五加水溶性多糖具有較強(qiáng)的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）清除活性[8]。女貞子預(yù)處理可顯著降低過(guò)氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的Caco-2 細(xì)胞毒性，降低Caco-2細(xì)胞中MDA 含量，并增加超氧化物歧化酶（SOD）、CAT、GSH-Px 含量[9]。越橘富含花青素，對(duì)DPPH、超氧化物自由基和H2O2具有清除作用[10]。本試驗(yàn)旨在研究復(fù)方刺五加散對(duì)昆明小鼠4 個(gè)時(shí)間段血清抗氧化指標(biāo)的影響，為復(fù)方刺五加散在動(dòng)物生產(chǎn)過(guò)程中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 復(fù)方刺五加散為刺五加、女貞子和越橘3種粉末按一定比例組成，由湖南加農(nóng)正和公司提供；健康成熟雌性6周齡昆明小鼠200只，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取體重接近、健康的6 周齡雌性昆明小鼠200 只，按體重隨機(jī)分為4 組，分別為空白對(duì)照組、低劑量（0.20%）復(fù)方刺五加散組、中劑量（0.35%）復(fù)方刺五加散組、高劑量（0.50%）復(fù)方刺五加散組，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只小鼠。試驗(yàn)0～21 d 按照添加處理進(jìn)行飼喂，從第22 天起全部飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)期28 d，分別在試驗(yàn)開(kāi)始第0、7、14、21、28 天每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取2 只小鼠處死采樣。

1.3 飼養(yǎng)管理 動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院試驗(yàn)鼠房進(jìn)行。試驗(yàn)期間，小鼠自由采食和飲水，每日10:00 進(jìn)行小鼠飼喂，每日1 次。記錄每天的采食量，并觀察試驗(yàn)小鼠的健康狀況。

1.4 樣品采集與指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 血樣 小鼠禁食12 h 后，于試驗(yàn)第0、7、14、21、28 天08:00 進(jìn)行稱(chēng)重，并在稱(chēng)重后用乙醚迷暈進(jìn)行眼球采血，使用1.5 mL 的EP 管收集血樣1.0 mL 左右，室溫靜置15 min 后，3 000 r/min 離心10 min，分離血清，-80℃保存待測(cè)。

1.4.2 血清抗氧化功能的測(cè)定 采用可見(jiàn)光法檢測(cè)小鼠血清中T-AOC、T-SOD、CAT、GSH-PX 和MDA 含量，具體操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2016 軟件進(jìn)行初步處理后，采用SPSS 26.0 軟件的Two-Way AΝOVA 程序進(jìn)行系統(tǒng)方差分析，若組間差異顯著，則采用Duncan's法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能的影響 由表1 可知，與對(duì)照組相比，添加不同劑量復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠各個(gè)時(shí)間段的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。

表1 復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能的影響

2.2 復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠血清部分抗氧化指標(biāo)的影響由表2 可知，與對(duì)照組相比，在第7 天時(shí)，低、中和高劑量組小鼠血清T-AOC 顯著提高；第14 天時(shí)，低和高劑量組小鼠血清T-AOC 顯著提高；第21 天時(shí)，中和高劑量組小鼠血清T-AOC 顯著提高；第28 天時(shí)，低劑量組小鼠血清T-AOC 顯著提高，說(shuō)明復(fù)方刺五加散在試驗(yàn)第7、14、21、28 天均可顯著提高小鼠血清中T-AOC含量，在21 d 停止飼喂復(fù)方刺五加散后低劑量仍有一定的延續(xù)效應(yīng)，但中和高劑量組與空白組相比無(wú)顯著差異。與對(duì)照組相比，添加復(fù)方刺五加散對(duì)各個(gè)時(shí)間段及不同劑量組小鼠血清中T-SOD 無(wú)顯著影響。與對(duì)照組相比，第7 天時(shí)，中和高劑量組小鼠血清CAT 顯著提高；第28 天時(shí)，低和高劑量組小鼠血清CAT 顯著提高。與對(duì)照組相比，第21 天時(shí)，低劑量組小鼠血清GSH-Px顯著提高。與對(duì)照組相比，第21 天時(shí)低、中和高劑量組小鼠血清中MDA 顯著下降。

表2 復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠血清中部分抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

動(dòng)物體內(nèi)堆積過(guò)量的氧化自由基可導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷、核酸損傷、蛋白變性及酶失活等，進(jìn)而引發(fā)衰老、癌癥、炎癥等多種疾病的發(fā)生與惡化[11-12]。合成抗氧化劑無(wú)法完全預(yù)防活性氧（ROS）引起的體內(nèi)損傷，當(dāng)以高濃度存在時(shí)甚至可引起機(jī)體損害[13-14]。中草藥富含多種生物活性成分，是天然抗氧化劑的重要來(lái)源，可有效清除動(dòng)物體內(nèi)自由基，因此，開(kāi)發(fā)具有抗氧化功效、低毒和無(wú)殘留的植物，成為新的研究熱點(diǎn)[15-16]。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。楊海峰等[17]試驗(yàn)證明，與對(duì)照組相比，斷奶仔豬日糧中添加刺五加提取物對(duì)其平均日采食量無(wú)顯著影響。張耀文等[18]研究發(fā)現(xiàn)，女貞子粉對(duì)蛋雞的平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋重與破蛋率無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果與以往研究報(bào)道基本一致，其具體原因仍需進(jìn)一步探討。

氧化應(yīng)激是影響哺乳動(dòng)物正常生產(chǎn)的重要因素。小鼠是哺乳類(lèi)模式動(dòng)物的代表，具有體積小、飼養(yǎng)管理方便、生產(chǎn)繁殖快、研究深入、有明確的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)、擁有大量的近交系、突變系和封閉群等優(yōu)點(diǎn)[19]。動(dòng)物飼糧中添加一定植物可有效提高其抗氧化能力、抗病力和存活率等，小鼠血清中T-AOC、T-SOD、CAT、GSH-Px 和MDA 可間接反映出機(jī)體的抗氧化能力。Zhao 等[20]通過(guò)逐步乙醇沉淀法進(jìn)一步分離刺五加莖和果實(shí)的多糖，并對(duì)這些餾分的抗氧化活性進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)刺五加的所有部分均具有相當(dāng)大的抗氧化活性。Bian等[21]研究表明，刺五加苷預(yù)處理后小鼠肝臟CAT、谷胱甘肽（GSH）和SOD 活性升高，MDA 活性下降。女貞子含有較多的酚和類(lèi)黃酮，這些活性成分具有出色的抗氧化能力[22]。Lin 等[23]試驗(yàn)表明，女貞子乙醇提取物可顯著提高大鼠肝、肺中CAT、SOD 和GPX 水平。此外，飼糧中添加0.5%女貞子超微粉能顯著提高肉仔雞血清中T-AOC、GSH-Px 和SOD 活性，降低肉仔雞血清中MDA 含量[24]。越橘富含花青素，其提取物可顯著提高大鼠血清中T-AOC、T-SOD、SOD、CAT、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）和GSH-Px 活性。越橘可降低老年大鼠血清、肝臟和脾臟中的MDA 水平，且不存在劑量依賴(lài)性[7,25]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方刺五加散對(duì)小鼠的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，可有效提高小鼠血清抗氧化能力，飼喂早期即可達(dá)到提高小鼠血清抗氧化能力的目的，停止飼喂復(fù)方刺五加散后其提高小鼠血清抗氧化能力有一定的延續(xù)效應(yīng)。本試驗(yàn)條件下，小鼠最合適添加劑量為0.2%～0.35%，但其機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方刺五加散可顯著提高小鼠血清中T-AOC、CAT、GSH-Px 和MDA 含量，復(fù)方刺五加散有利于增強(qiáng)小鼠的抗氧化功能。復(fù)方刺五加散在早期飼喂即可發(fā)揮其功效，最益添加水平為0.2%～0.35%。