血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962對非小細胞肺癌的聯合診斷

韓慧芳，任麗坤

（邯鄲市第二醫院腫瘤科，邯鄲 056500）

【關鍵字】hsa_circ_0109320；hsa_circ_0134501；hsa_circ_0005962；非小細胞肺癌；診斷

肺癌是全球癌癥相關死亡的主要原因，其中約80%為非小細胞肺癌［1］。盡管在診斷和治療方面有所改善，但肺癌的5年生存率約為18%，這主要是因為大多數患者診斷為晚期［2］。因此，發現準確、靈敏的生物標志物對于肺腺癌的早期診斷具有重要意義。環狀RNA（Circular RNA，circRNAs）具有環狀共價閉合結構，是由真核生物數千個基因的前體mRNA反剪接而來，使環狀RNA具有更高的外切酶消化能力［3］。目前，越來越多的研究表明，環狀RNA與肺癌、胃癌、結直腸癌、肝癌、乳腺癌等多種癌癥密切相關［4-8］。Liu X X等人［9］通過基因表達Omnibus（Gene Expression Omnibus，GEO）數據集發現hsa_circ_0005962在非小細胞肺癌患者血清中表達較高。Liu YT等人［10］通過高通量RNASeq發現血清中hsa_circ_0109320和hsa_circ_0134501在非小細胞肺癌患者血清中的高表達與不良預后相關。基于此，本研究旨在回顧性探討hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962對非小細胞肺癌聯合診斷的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2016年1月～2018年12月我院收治的早期非小細胞肺癌120例為腫瘤組；其中，男78例，女42例；年齡25～76歲；平均年齡（56.21±23.19）歲；TNM分期Ⅰ期73例，Ⅱ期47例。納入2016年1月～2018年12月我院收治的肺部良性疾病患者120例，為良性病組；其中，男69例，女51例；年齡31～77歲；平均年齡（58.10±22.39）歲；在120例良性疾病中，慢性阻塞性肺疾病有36例，肺炎有73例，肺結核有11例。早期非小細胞肺癌患者120例和肺部良性疾病患者120例均經我院病理科證實。排除標準：①嚴重心、肝、腎功能損害者；②長期使用皮質類固醇激素及免疫抑制劑者；③患有精神疾病者；④患有其他癌癥者；⑤未經相關治療者。同時，納入2016年11月～2019年6月至我院體檢的健康體檢者120例為對照組；其中，男75例，女45例；年齡21～79歲；平均年齡（54.10±26.30）歲。各組一般資料比較差異均無統計學意義，可納入此次分析。受試者均在抽取血液樣本前簽署知情同意書。

1.2 RNA抽取與實時熒光定量PCR采取早期非小細胞肺癌患者120例、肺部良性疾病患者120例和健康體檢者120例的肘前靜脈血6mL。使用金克隆（北京）生物技術有限公司的總RNA提取試劑盒（貨號：EX1882-100T）進行患者血液的總RNA的提取。通過上海羽朵生物科技有限公司的逆轉錄RT試劑盒（貨號：YDJ2547）進行逆轉錄。使用上海樊克生物科技有限公司的一步法RT-qPCR試劑盒（貨號：RT-02111）進行實時熒光定量PCR試驗。3個指標為同一批樣本分批檢測，去除極大值和極小值保留其余數據。

1.3 統計學分析SPSS 22.0軟件進行統計分析，多組間比較采用one-way ANOVA檢驗，方差齊者采用t檢驗比較，方差不齊者采用Tamhane′T2法比較。應用受試者工作特征（ROC）曲線下面積（AUC）分析血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962檢測非小細胞肺癌的臨床診斷價值。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 3組受試者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相對表達量比較早期非小細胞肺癌患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相對表達量均高于良性病患者和健康體檢者（P<0.05）；良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相對表達量均高于健康體檢者（P<0.05），見表1。

表1 3組受試者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相對表達量比較

2.2 早期非小細胞肺癌患者與良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲線、AUC、靈敏度、特異度和約登指數為了評估血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在早期非小細胞肺癌患者與良性病患者中的診斷價值，繪制120例早期非小細胞肺癌患者與120例良性病患者的ROC曲線（圖2）。hsa_circ_0109320，的ROC曲線下面積為0.88±0.02（95%CI 0.8376～0.9257），以hsa_circ_0109320的陽性臨界值1.675，其診斷靈敏度為83%，特異度為91%；hsa_circ_0134501的ROC曲線下面積為0.80±0.03（95%CI 0.749～0.8601），以hsa_circ_0134501的陽性臨界值1.532，其診斷靈敏度為94%，特異度為63%；hsa_circ_0005962的ROC曲線下面積為0.82±0.03（95%CI 0.7726～0.8757），以hsa_circ_0005962的陽性臨界值1.308，其診斷靈敏度為85%，特異度為79%。見圖1和表2。

表2 早期非小細胞肺癌患者與良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的AUC、靈敏度、特異度和約登指數

圖1 早期非小細胞肺癌患者與良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲線

2.3 早期非小細胞肺癌患者與健康體檢者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲線、AUC、靈敏度、特異度和約登指數為了評估血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在早期非小細胞肺癌患者與健康體檢者中的診斷價值，繪制120例早期非小細胞肺癌患者與120例健康體檢者的ROC曲線（圖2）。hsa_circ_0109320，的ROC曲線下面積為0.92±0.02（95%CI 0.8919～0.9667），以hsa_circ_0109320的陽性臨界值1.028，其診斷靈敏度為93%，特異度為93%；hsa_circ_0134501的ROC曲線下面積為0.86±0.03（95%CI 0.8087～0.912），以hsa_circ_0134501的陽性臨界值1.054，其診斷靈敏度為87%，特異度為88%；hsa_circ_0005962的ROC曲線下面積為0.87±0.03（95%CI 0.8129～0.9186），以hsa_circ_0005962的陽性臨界值1.082，其診斷靈敏度為88%，特異度為83%。見圖2和表3。

表3 早期非小細胞肺癌患者與健康體檢者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的AUC、靈敏度、特異度和約登指數

圖2 早期非小細胞肺癌患者與健康體檢者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲線

2.4 血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962聯合診斷早期非小細胞肺癌患有早期非小細胞肺癌的為真陽性，未患有早期非小細胞肺癌的為真陰性。以以hsa_circ_0109320的陽性臨界值1.675、hsa_circ_0134501的陽性臨界值1.532、hsa_circ_0005962的陽性臨界值1.308為診斷標準，三者均滿足為聯合診斷陽性，反之則為聯合診斷陰性。血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962聯合對早期非小細胞肺癌的診斷的靈敏度為91.67%（110/120），特異度為87.91%（211/240），準確度為89.17%（321/360），見表4。

表4 血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962聯合診斷早期非小細胞肺癌

3 討論

肺癌是常見的，全世界癌癥相關死亡的主要原因之一［11］。在2012年，有超過180萬新病例，幾乎160萬人的死亡于肺癌。盡管其診斷和治療每年都有進展，但是肺癌的預后仍然是不樂觀的，其5年總體生存率只有18%［12］。此外，由于腫瘤的異質性，單個活檢的基因檢測并不能很好地描述腫瘤的整體遺傳變化。因此，為了實現對非小細胞肺癌廣泛的診斷，一個靈敏、方便、多基因的基于血液的診斷系統將具有很高的價值。在本研究中，發現血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962聯合對非小細胞肺癌診斷的靈敏度為91.67%，特異度為87.91%，準確度為89.17%。

circRNA是最近發現的一類非編碼RNA分子，它是由多個外顯子的反向剪接形成的［13］。CircRNAs在真核細胞豐富，表現出組織，時間，和疾病特異性。在本研究中，發現早期非小細胞肺癌患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相對表達量均高于良性病患者和健康體檢者。有研究指出［14］宮頸癌患者血漿中存在大量CircRNAs，這些CircRNAs在術前和術后均有差異表達，其中部分CircRNAs被認為是預后標志物。提示血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962可能與癌癥進展有關。血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在腫瘤組與良性組的靈敏度分別為83%、94%、85%，特異度分別為91%、63%、79%。血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在腫瘤組與對照組的靈敏度分別為93%、87%、88%，特異度分別為93%、88%、83%。顯示了其較好的診斷效能。因此，本研究提供了一個極好的機會來發現CircRNAs的生物標志物，可進一步將其用于非小細胞肺癌的診斷和相關藥物的開發。

一些CircRNAs海綿影響microRNA的釋放的抑制作用的microRNA在他們的目標基因，讓目標基因的表達，在多個生物過程發揮著至關重要的監管作用，甚至一些疾病［15-17］。CircRNAs發揮重要作用在許多疾病，如腫瘤通過調節基因轉錄和蛋白質翻譯。不像線性RNA，CircRNAs共價閉合連續循環沒有5 ' 3 '極性或腺苷反面，使他們不太容易被核酸外切酶降解和穩定比線性RNA。［18-19］近年來，CircRNAs因其豐富、穩定、保守和特異性等特點成為新的生物標志物。此外，CircRNAs不僅可以在癌組織中穩定存在，還可以在外泌體和血液中穩定存在。在分析腫瘤組織中的生物標志物時，液體活檢比傳統活檢更方便、侵入性更小。因此，血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962可能適合作為潛在的癌癥診斷生物標志物。

綜上所述，血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相對表達量檢測可作為非小細胞肺癌的潛在標志。