卡式微柱凝膠技術在血型鑒定、輸血前紅細胞不規則抗體 檢測中的應用效果分析

李應明，陳 華，伍 燕，詹文麗

（海口市人民醫院輸血科，海口 570208）

輸血治療作為改善循環、提高血漿蛋白、增強免疫力、凝血功能、增加攜氧能力的治療方法［1，2］，常用于急性出血、貧血、低蛋白血癥、重癥感染、凝血機制障礙等疾病的臨床治療中。準確的血型鑒定及交叉配血方法，不僅可有效減少ABO血型不符導致的不良后果，對保證輸血安全有著作用的意義［3］。雖血型鑒定及交叉配血在臨床已普遍應用，但由不規則抗體導致的溶血性輸血反應仍有發生［4，5］，給患者的生命安全造成不良影響。故輸血前不規則抗體篩選及血型鑒定對提高輸血安全性意義重大。基于此，本研究以我院2019年12月～2020年12月收治的600例接受檢驗的輸血患者為研究對象，比較卡式微柱凝膠技術與聚凝胺法在血型鑒定、輸血前紅細胞不規則抗體檢驗中的應用效果，總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料研究對象為我院收治的600例接受檢驗的輸血患者，其中男性325例，女275性例；年齡位于16～75歲之間，平均年齡為（40.82±5.76）歲。研究經醫院倫理委員會批準同意。納入標準：①無輸血治療禁忌證；②意識清晰，無精神疾病；③臨床資料完整，依從性良好，可配合完成研究；④自愿簽署知情同意書。

排除標準：①存在影響免疫功能的原發性疾病；②存在腎臟、肝臟、心臟等重要器官功能障礙；③存在嚴重血液系統疾病。

1.2 檢測試劑聚凝胺試劑盒購自珠海貝索生物技術有限公司。 抗A、抗B血清購自上海血液生物醫藥有限責任功能，抗D單克隆血清購自長春博德生物技術有限責任公司。ABO、RhD血型鑒定微柱凝膠卡購自荷蘭皇家血液基金會有限公司。

1.3 方法

1.3.1 聚凝胺法標記3支 相同試管，1支作為主測管，1支作為次測管，1支作為對照管。主測管于受血者血漿中滴入1滴獻血者3%～5%紅細胞。次測管于獻血者血漿中滴入1滴受血者3%～5%紅細胞。對照管于陽性對照血漿中滴入1滴獻血者3%～5%紅細胞。所有試管內置入0.65mL低離子溶液，充分混勻后，于室溫下孵育1min。再于試管內置入2滴聚凝胺溶液，充分混勻后，于室溫下孵育15s。3400rpm/min離心10s，留取0.1mL上清液。觀察紅細胞是否出現凝聚反應。最后，滴加2滴復懸液，充分混勻后，置于玻片上，顯微鏡下觀察是否出現凝聚反應。利用3個已知抗原表型的O型篩選RBC上存在的多種RBC抗原與被檢血清在凝聚胺介質中反應，出現凝集表示血清中存在不規則抗體。

1.3.2 卡式微柱凝膠法標記好凝膠卡后，以3中譜紅細胞配制成0.5%～0.8%的濃度，加入標記好的微管中，每管50L。分離血漿后，將50L血漿加入Ⅰ孔、Ⅱ孔、Ⅲ孔內，并相應加入50LⅠ、Ⅱ、Ⅲ號不規則抗體篩查譜細胞。置于37℃孵育15min。以微柱凝膠專用離心機900rpm/min離心2min，1500rpm/min離心3min。按照譜紅細胞反應格局，判斷結果。以3個已知抗原表型的O型篩選RBC上存在的多種RBC抗原與被檢血清在微柱凝膠中反應，有凝集出現提示存在不規則抗體。

1.4 觀察指標①兩種檢測方法對ABO、RhD血型鑒定的準確率比較。聚凝胺法結果判斷：陰性為不出現凝集反應；陽性為出現凝集反應［6］。卡式微柱凝膠法結果判斷：陰性為凝膠管底部處紅細胞完全降解；陽性為紅細胞凝集塊處于凝膠中端或表面［7］。②兩種檢測方法對不規則抗體檢出情況比較。觀察兩種方法對抗-c、抗-C、抗-e、抗-E、抗-D等不規則抗體的檢出率。

1.5 統計學分析所有數據均錄入SPSS 26.0統計軟件，計量資料以mean±SD表示，采用t檢驗。計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法血型鑒定準確率卡式微柱凝膠法ABO血型、RhD血型的一次性準確率均高于聚凝胺法（P<0.05），見表1。

表1 血型鑒定準確率比較

2.2 不規則抗體檢出情況比較卡式微柱凝膠法的不規則抗體總檢出率高于聚凝胺法（2.00% VS 0.33%，P<0.05），見表2。

表2 不規則抗體檢出情況［n（%）］

2.3 不規則抗體陽性科室分布14例不規則抗體陽性患者中，血液科5例，占35.71%；腎病科4例，占28.57%；感染科3例，占21.43%。其余科室2例，占14.29%。既往有輸血史12例，占85.71%。有妊娠史7例，占50.00%。

3 討論

輸血治療為目前臨床常用的挽救大量失血患者的重要方法［8］，在臨床應用中受到血液、血液制品抗原、抗體成分多樣性的影響，可有不同程度、不同類型的不良反應出現［9］。在輸血前進行血型鑒定、交叉配血可減少速發性溶血性輸血不良反應的發生［10］，但異體/自體輸血、血液制品靜脈滴注、免疫刺激等產生的不規則抗體，可導致血型正反定型不符等問題［11］，從而誘發嚴重輸血反應，危及患者生命。傳統的輸血前檢測方法包括：聚凝胺法、酶法、鹽水法等［12］。聚凝胺法檢測原理為：紅細胞表明電荷收到低價電離子破壞后，可發生凝集現象，在加入凝聚液后，紅細胞未分散則為特異性。但該方法具有自動化程度較低，受人為因素干擾過多，缺乏標準化操作流程，最低檢測限較高等缺點［13］。

卡式微柱凝膠技術為美國FDA批準的免疫學檢測技術，具有較高的特異性、靈敏度。其檢測原理為：通過調節葡聚糖凝膠濃度，控制分子篩孔徑大小，使分子篩僅允許單個紅細胞通過，從而達到分離凝集紅細胞與游離紅細胞的目的。將紅細胞與血清加入凝膠的上不反應離心后，凝集紅細胞受到凝膠的阻礙而停留在凝膠的上部/凝膠中，未凝集的紅細胞則停留在凝膠腔底部。該方法目前已采用標準化定量操作，可使操作人員的誤差降至最低水平，具有較高的重復性。且由于該方法采用了凝膠分子篩技術、免疫學檢測技術，可顯著提高血型鑒定的靈敏度、安全性。凝集的紅細胞與游離紅細胞分開，檢測結果一目了然，有效避免檢測人員經驗不足導致的誤差。且該檢測方法操作方便，去除了繁瑣的洗滌紅細胞過程，人球蛋白抗體不易被中和，從而降低假陰性率導致的血型鑒定錯誤的發生。 本研究結果表明，卡式微柱凝膠技術在ABO血型、RhD血型鑒定中的一次性準確率分別為99.67%、99.67%，均高于傳統聚凝胺法，這與牛天林等［14］的研究結論一致。說明卡式微柱凝膠技術在血型鑒定中的準確性高于凝聚胺法。鑒于不規則抗體導致的輸血反應較為常見，本次研究進一步比較了兩種方法在不規則抗體（抗-D、抗-E、抗-e、抗-C、抗-c）檢測中的應用效果，這些抗體均屬IgG抗體，由輸血/妊娠等免疫刺激產生，對相應的紅細胞有致敏作用，且輸血過程中的輸血反應程度與IgG的效價密切相關。兩種檢測方法檢出的總陽性率為2.00%、0.33%，與李蓮華等［15］的文獻報道結論一致。這可能與IgG抗體分子鏈短小，無法有效凝聚有關。

綜上所述，卡式微柱凝膠技術在ABO、RhD血型鑒定及輸血前紅細胞不規則抗體檢測中具有更好的檢測效果，操作方便易行，可有效保證臨床輸血的安全性。