ApoE基因多態性與腦梗死認知障礙及復發的相關性分析

孔詠梅，郭醫杰，王美蓉，劉亞林，張曉林

（邢臺市第三醫院神經內科，邢臺 054000）

腦梗死又被稱為缺血性腦卒中，是臨床較為常見的腦卒中類型，其發生主要是由于患者供應腦部血液的動脈出現粥樣硬化和血栓形成，造成管腔狹窄、閉塞，繼而引發局灶性急性腦供血不足，腦組織壞死［1］。該病病情進展迅速，若未及時采取有效治療，會對患者生命安全嚴重威脅［2］。臨床顯示［3-4］，由于腦梗死患者存在局灶性的血運減少，周圍的神經元細胞、神經膠質細胞均會受到損傷，因而易導致患者的神經功能的受到一定程度的損害，遺留認知障礙等后遺癥。據統計［5-6］，急性腦梗死后繼發認知障礙的比例在26.05%～63.04%。近年來有學者研究發現，載脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）對于調節機體的血脂代謝、膽同醇平衡方面起到了重要作用，在動脈粥樣硬化的發生、發展及神經功能損傷的修復中也扮演了關鍵角色［7］。既往研究顯示［8］，腦梗死及血管性認知障礙的發生與ApoE基因多態性關系密切。然而，目前有關腦梗死認知障礙及復發與ApoE基因多態性關系的研究尚不多見。因此，本研究探討了ApoE基因多態性與腦梗死認知障礙及復發的相關性，旨在明確其在腦梗死認知障礙及復發中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年1月～2019年12月本院收治的78例腦梗死后認知功能障礙患者為觀察組。其中男42例，女36例；年齡50～82歲，平均（65.48±7.92）歲；既往史：高血壓史50例，冠心病史28例，糖尿病史23例；文化程度：初中及以下48例，高中及以上30例。另選取同期本院收治的腦梗死后認知功能正常患者80例作為對照組，其中男45例，女35例；年齡49～79歲，平均（63.51±7.53）歲；既往史：高血壓史46例，冠心病史31例，糖尿病史20例；文化程度：初中及以下48例，高中及以上32例。兩組各方面比較未見明顯差異（P>0.05），均衡可比。醫院倫理委員會通過此項目，患者了解并同意參與。

1.2 診斷標準腦梗死診斷參考符合2017年《中國腦血管病防治指南》［9］中相關標準，均經顱腦CT、MRI檢查證實。

認知功能障礙診斷根據蒙特利爾認知評估量表（Montreal Cognitive Assessment，MoCA）評分［10］、簡易智力狀態檢查量表（Mini-mental State Examination，MMSE）評分［11］及臨床失智評分（Clinical Dementia Rating，CDR）評分進行判定：①MoCA評分＜26分；②MMSE評分＜26分（文盲組24分）且CDR評分=0或0.5分；③19分（文盲組17分）≤MMSE評分≤26分（文盲組24分），且CDR評分=1分。滿足①且滿足②、③兩者之一即診斷為認知功能障礙［12］。

1.3 納入與排除標準納入標準：①兩組均符合上述腦梗死診斷標準，觀察組患者同時符合認知功能障礙診斷標準；②首次發病，腦梗死后2周～3個月，病情穩定；③性別不限，年齡不低于16周歲；④視覺、聽覺正常，意識清醒，能配合完成檢查。

排除標準：①觀察組排除因腦梗死原因以外引發的認知功能障礙；②伴嚴重心、肝、腎等臟器疾病；③伴嚴重并發癥；④伴先天免疫缺陷性疾病；⑤伴惡性腫瘤；⑥伴精神疾病；⑦存在失語、意識障礙等無法配合研究者；⑧難以完成隨訪者。

1.4 方法及分組

1.4.1 資料收集收集所有研究對象性別、年齡、既往史（包括高血壓、冠心病、糖尿病）、文化程度等資料。

1.4.2 基因多態性檢測采用限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應（PCR-RELP）檢測ApoE基因分型。采集所有研究對象的晨起空腹靜脈血2mL，EDTA-2Na抗凝，提取全血基因組DNA，使用美國ABI 7500型PCR擴增儀進行PCR擴增，引物序列：①上游：5’-TCCAAGGAGCTGCA GGCGGCGCA-3’；②下游：5’-ACAGAATYCGCCCCG GCCTGGTACACTGCCA-3’。反應條件：95℃預變性5 min，，95℃30 min→65℃30 min→72℃30 min循環45次，72℃延伸10 min，2%凝膠瓊脂糖電泳。ApoE基因酶切10%聚丙烯酰胺凝膠電泳、酶切、銀染，在紫外線凝膠成像儀下觀察電泳結果。

1.4.3 分組方法對觀察組患者隨訪1年，隨訪方式為門診復查、電話。根據1年內腦梗死復發情況，將觀察組患者分為復發組、未復發組。

1.5 統計學方法采用SPSS 22.0軟件分析數據，計量資料均以mean±SD表示，對先對計量資料首行正態性檢驗，滿足正態性且組間方差齊，采用兩樣本獨立t檢驗、單因素方差分析比較組間差異，兩兩比較采用SNK檢驗；計數資料均以（%）表示，采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組ApoE基因型及等位基因分布對比2組患者中，最常見的ApoE基因型均為ε3/3（觀察組58.97%、對照組63.75%）；經比較，2組的ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4基因型頻率無明顯差異（P>0.05），但觀察組的ε4/4基因型頻率明顯高于對照組（P<0.05）。2組患者中，最常見的等位基因均為ε3（觀察組70.51%、對照組78.75%），其次是ε4、ε2；經比較，2組的ε2、ε3等位基因頻數無明顯差異（P>0.05），但觀察組的ε4等位基因頻數明顯高于對照組（P<0.05），見表1。

表1 兩組ApoE基因型及等位基因分布對比［n（%）］

2.2 不同ApoE基因亞型患者的MOCA、MMSE評分對比腦梗死患者中，攜帶ε4等位基因患者的MoCA、MMSE評分均明顯低于攜帶ε2、ε3患者（P<0.05），見表2。

表2 不同ApoE基因亞型患者的MOCA、MMSE評分對比

2.3 不同復發情況患者的臨床資料對比觀察組78例患者均獲隨訪，隨訪率100%。據統計，有26例患者在為期1年的隨訪中出現腦梗死復發，復發率33.33%。經比較，復發組和未復發組患者在性別、年齡、合并疾病及文化程度方面均無明顯差異（P>0.05），見表3。

表3 觀察組不同復發情況患者的臨床資料對比［n（%）］

2.4 不同復發情況患者ApoE基因型及等位基因分布對比對比不同復發情況患者ApoE基因型及等位基因分布情況發現，復發組和未復發組的ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4各基因型頻率無明顯差異（P>0.05），ε2、ε3等位基因頻數無明顯差異（P>0.05），但復發組的ε4等位基因頻數明顯高于未復發組（P<0.05），見表4。

表4 不同復發情況患者ApoE基因型及等位基因分布對比［n（%）］

3 討論

ApoE屬于載脂蛋白家族成員，主要在肝臟合成、代謝，其作為一種多態性蛋白，能夠參與多種脂蛋白的代謝和運輸，其不僅與血漿脂蛋白水平高度相關，也與機體的血脂水平關系密切［13］。ApoE編碼基因位于第19號染色體長臂13區2帶，其多態性的產生是由于第4號外顯子編碼112位、158位氨基酸密碼子表達ε2、ε3、ε4共3種等位基因，根據不同的組合方式可形成ε2/2、ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4共6種基因型［14］。

近些年研究顯示，ApoE基因多態性具有多重生物學意義，其與認知功能障礙有一定聯系。羅伏鋼等［15］分析了腦梗死后血管性癡呆（vascular dementia，VD）患者的ApoE基因多態性分布情況，發現腦梗死后VD患者的ε4等位基因頻率明顯高于健康人群，ApoE ε4基因可能是腦梗死后VD發生的易感基因，且其可縮短患者出現VD的時間。朱燁等［16］研究指出，不同年齡段的老年阿爾茨海默病（Alzheimer disease，AD）患者ApoE基因表達不一，且ApoE ε4基因與認知功能障礙關系密切。本研究結果顯示，觀察組的ε4/4基因型頻率明顯高于對照組，觀察組的ε4等位基因頻數明顯高于對照組，提示ε4/4基因型在腦梗死認知障礙患者中可能是潛在的危險性因素，ApoE ε4基因可能與腦梗死認知障礙發生有關，與國內外學者研究結論類似。同時，本研究對比不同ApoE基因亞型患者的MOCA、MMSE評分發現，與ApoE ε2、ε/3基因等位基因攜帶者相比，ApoE ε4基因攜帶者的上述認知功能評分顯著下降，進一步證實了ApoE ε4基因可能是導致腦梗死認知障礙發生的危險因素。目前，有關ApoE ε4基因在腦梗死認知障礙中的作用機制尚未明確，推測其可能與以下因素有關：①ApoE ε4活性增加，可引發大量脂質內吞，提升機體的膽固醇水平，造成血脂代謝紊亂，加速動脈粥樣硬化的形成；②在神經元損傷后的修復過程中，髓鞘磷脂代謝起到了重要作用，ApoE正是髓鞘磷脂代謝關鍵因子，然而這一作用是E3單體特異性的，E4無此功能，因此攜帶ε4基因可能會阻礙神經細胞損傷后神經功能的恢復；③與ε3相比，ε4的抗氧化能力更弱，其對缺血性神經元損傷的保護作用也更差，因此ApoE ε4基因攜帶者出現神經細胞缺血性損傷的程度也會較重。

ApoE基因多態性與動脈粥樣硬化的發生具有密切關聯，在冠心病、腦梗死等心腦血管疾病的發生、發展中有一定的作用［17-18］。吉維忠等［19］的研究顯示，青海世居藏族人群腦血管病患者中ApoE基因型以ε2/3最常見，ε3等位基因可能是藏族人群腦梗死的易感因素。張晉霞等［20］則認為ε4等位基因是漢族人群缺血性腦卒中患者危險及遺傳易感因素。目前，關于何種ApoE基因多態性對腦梗死復發的影響最大尚未見報道，本研究對比不同復發情況患者ApoE基因型及等位基因分布情況發現，復發組的ε4等位基因頻數明顯高于未復發組，提示ε4等位基因則是腦梗死復發的潛在危險因素。推測其原因可能是ε4基因則具有升高膽固醇的作用，患者體內的血脂紊亂狀態更易造成疾病復發。

ApoE基因多態性與腦梗死認知障礙及復發存在相關性，攜帶ε4基因可能是腦梗死認知障礙及復發的易感因素。