ELISA法檢測(cè)抗核小體抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中的應(yīng)用①

劉曉奇

(平頂山市第二人民醫(yī)院，河南 平頂山 467000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是臨床常見的一種自身免疫性疾病，早期、輕型和不典型的病例日漸增多[1～3]。SLE發(fā)病進(jìn)展過程中伴隨著自身的抗體水平的變化，這可能對(duì)于SLE疾病的診斷提供一定的思路[4，5]。既往的臨床上對(duì)于SLE常規(guī)診斷方法有癥狀檢查及結(jié)合血象指標(biāo)檢查進(jìn)行診斷確診，但存在著靈敏度低、特異性差等問題，在臨床上易出現(xiàn)誤診和漏診，影響患者病情的診療活動(dòng)[6]。在免疫性檢測(cè)中也有著多種檢測(cè)抗體的技術(shù)手段，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)和線性免疫印跡法(LIA)是兩種常用的免疫性檢測(cè)方法，但何種檢測(cè)方法對(duì)于SLE疾病的自身抗體檢測(cè)有更高的準(zhǔn)確率，在臨床上還未有深入的研究。本文探討ELISA法及LIA法檢測(cè)SLE患者自身抗體水平的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017-10～2019-10平頂山市第二人民醫(yī)院收治的疑似SLE患者200例為研究對(duì)象納入SLE組，男109例,女91例，年齡35～69歲，平均(51.28±9.28)歲，基礎(chǔ)疾病：高血壓52例、糖尿病39例、高脂血癥28例。

1.2 方法

ELISA法檢測(cè)自身抗核小體抗體(ANAs)、抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)操作方法：SLE組患者和對(duì)照組受試者入院后采集患者的空腹靜脈血約3mL，經(jīng)KDC—40型低速離心機(jī)(安微中科中佳)離心，轉(zhuǎn)速3000r/min，離心10min，分離得到血清樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(上海羅氏診斷試劑公司)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)儀器為安圖2010型多功能酶標(biāo)儀(鄭州安圖公司)，按照廠商試劑說明書操作，將標(biāo)本血清用配制好的樣本稀釋液稀釋 101倍后加入微孔板中，同時(shí)還應(yīng)在相應(yīng)微孔板中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)過25℃孵育3h后，然后加入適量緩沖液進(jìn)行洗滌，然后在每孔中加入終止液，然后采用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，讀取在450nm波段的吸光度。結(jié)果判斷：濃度>15U/mL時(shí)為陽性。

LIA法檢測(cè)自身抗體操作方法：SLE組患者和對(duì)照組受試者入院后采集患者的空腹靜脈血約3mL，經(jīng)KDC—40型低速離心機(jī)(安微中科中佳)離心，轉(zhuǎn)速3000r/min，離心10min，分離得到血清樣本，采用線性免疫印跡法試劑盒(德國(guó)默克公司)進(jìn)行檢測(cè)，將檢測(cè)膜條放入EUROBlotCamera印跡法自動(dòng)操作儀(歐蒙醫(yī)學(xué)診斷中國(guó)有限公司)的溫育槽中進(jìn)行孵育，30min后吸出液體用緩沖液清洗，然后加入酶結(jié)合底物繼續(xù)溫育30min，再次用清水洗滌后，把膜條置于綠色紙的黏性塑料膜上對(duì)齊，待膜條干透后用掃描儀掃描檢測(cè)，結(jié)果判斷為：>25時(shí)為陽性。

1.3 評(píng)價(jià)方法

SLE金標(biāo)準(zhǔn)診斷方法[7]：(1)頰部紅斑；(2)盤狀紅斑；(3)光過敏；(4)口腔潰瘍；(5)關(guān)節(jié)炎；(6)胸膜炎或心包炎；(7)腎臟病變；(8)神經(jīng)病變；(9)血液學(xué)疾??；(10)免疫學(xué)異常；(11)抗核抗體；符合上述11項(xiàng)中任何4項(xiàng)或4項(xiàng)以上者，除外感染、腫瘤和其他結(jié)締組織疾病后，可診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡。

對(duì)SLE組和對(duì)照組受試者的兩種檢測(cè)方法檢出自身抗體的陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比，并根據(jù)ELISA法、LIA法檢測(cè)出SLE、對(duì)照組的自身抗體陽性率，對(duì)兩種檢測(cè)方法的診斷性指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比，診斷性指標(biāo)包括靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)性、準(zhǔn)確度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩種檢查方法的陽性例數(shù)對(duì)比

根據(jù)金標(biāo)準(zhǔn)診斷方法，200例疑似SLE患者中確診為SLE陽性患者183例，陰性患者17例(系統(tǒng)性血管炎7例、成人斯蒂爾病6例、皮肌炎4例)。見表1。

表1 兩種檢查方法的陽性例數(shù)對(duì)比

2.2 兩種檢查方法的診斷性指標(biāo)對(duì)比

在診斷性指標(biāo)對(duì)比中，ELISA法的檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度均高于LIA法(P<0.05)，見表2。

表2 兩種檢查方法的診斷性指標(biāo)對(duì)比[n(%)]

3 討論

有研究表明在SLE發(fā)病進(jìn)展過程中伴隨著自身的抗體水平的變化，隨著抗核抗體檢測(cè)方法的不斷進(jìn)展和技術(shù)更新，抗體水平檢測(cè)在診斷自身免疫性疾病中具有重要的臨床實(shí)用價(jià)值[8，9]。在目前的臨床上對(duì)于SLE自身抗體的檢測(cè)，其中以ELISA法和LIA法居多，成為臨床實(shí)驗(yàn)室最常用的兩種檢測(cè)自身抗體的方法。但在兩種方法間是否還存在著一定的差異，在臨床上未有深入的研究報(bào)道，為此本研究采用的對(duì)比分析的方法對(duì)ELISA和LIA法檢測(cè)SLE患者自身抗體水平的準(zhǔn)確度開展了深入研究。

在本研究中對(duì)SLE患者和健康對(duì)照組分別采用了ELISA法和LIA法檢測(cè)自身抗體的陽性表達(dá)情況，結(jié)果顯示ELISA法檢測(cè)SLE組患者自身抗體陽性率高于LIA法，在對(duì)照組中ELISA法檢測(cè)自身抗體陽性率低于LIA法，方法間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明相比于LIA法，ELISA法能夠更為準(zhǔn)確的檢測(cè)SLE患者的自身抗體表達(dá)。在診斷性指標(biāo)對(duì)比中，ELISA法的檢測(cè)靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均高于LIA法，表明經(jīng)ELISA法檢能夠進(jìn)一步提高患者的SLE檢出率，有助于SLE與疑似患者的區(qū)別診斷。在這是因?yàn)镋LISA法由純化抗原加強(qiáng)細(xì)胞核的提取物組成的商品化試劑盒出現(xiàn)，大大提高了ELISA法檢測(cè)自身抗體敏感性及特異性，并可通過酶標(biāo)儀讀數(shù)排除人為的主觀判斷，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化[10，11]。并且ELISA法具有操作方便，費(fèi)用低廉，不需要特殊設(shè)備的優(yōu)點(diǎn)，適合基層醫(yī)院及標(biāo)本量較多的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行篩查。LIA法可一次性檢測(cè)多種特異性自身抗體，直接用于診斷SLE和鑒別診斷其他自身免疫性疾病，具有較高的特異性，但LIA法是檢測(cè)也存在著特異性抗體種類有限等不足，一定程度上限制了LIA法在SLE檢測(cè)中的應(yīng)用[12，13]。

綜上所述，ELISA、LIA法均可用于SLE患者自身抗體的檢測(cè)，與LIA法相比，ELISA法檢測(cè)的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)性、準(zhǔn)確度更高，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷中有更好的應(yīng)用價(jià)值。