耳聾基因篩查在遺傳性耳聾預防與阻斷中的應用研究

張俊賢 方炳雄 蔡潔娜 翁文婕 劉琪 洪妙玲

現階段，我國二胎政策全面開放，為更好的保障生育質量，需要對其潛在危險因素加強警惕，如先天性耳聾[1]。其是臨床上較為常見的感覺性疾病，是人類最常見的出現缺陷之一，會給患兒的成長發育及社會生活帶來嚴重影響，同樣也會給降低患兒家庭幸福指數。該疾病與醫療環境、創傷以及藥物等存在密切聯系，其中遺傳因素占據60%，嚴重影響出生人口素質[2]。為更好的保障新生兒的健康成長，及時進行聽力篩查，便于早期發現新生兒是否有聽力損失現象，及時進行干預，有助于降低遺傳性耳聾罹患率。以往的聽力篩查只能檢測出已經發生聽力障礙的患兒，對于存在高危風險因素特別是遺傳因素所引起的先天性耳聾很難檢出，具有一定的局限性，易延誤患兒接受治療時機。本次研究就醫院2019年5月—2020年3月出生的新生兒2 280例為研究對象，進行耳聾基因篩查，探討其對在遺傳性耳聾預防與阻斷中的應用研究，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年5月—2020年3月醫院出生的新生兒2 280例為研究對象。其中男性1 120例，女性1 160例；日齡2～6 d，平均日齡（3.49±0.51）d。本次研究符合醫院醫學倫理會標準，并經過委員會同意；所有新生兒的病情資料完整；新生兒家屬均表示自愿參與，并簽署相關文件。

1.2 方法

（1）和新生兒家屬耐心進行溝通后，于新生兒足跟部位進行采血，采血過程中遵循無菌操作原則，收集量為2.0～3.0 mL，采集完畢后，按照血斑卡制作要求進行制作；采用血液基因組DNA提取試劑盒（離心柱型），通過破裂細胞以釋放DNA，在高濃度鹽溶液中，核酸吸附在硅類介質表面，并在低濃度鹽通液洗脫下來，從而達到提取純化DNA的目的[3]。（2）耳聾基因突變檢測：按照耳聾基因檢測試劑盒 [多聚酶鏈反應（PCR）+導流雜交法] 的操作說明書，測定4個我國常見的耳聾易感基因（GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3）的13個突變熱點。（3）PCR反應：核酸擴增反應條件：先預變性95℃，9 min；再95℃ 30 sec，55℃ 30 sec，72℃ 1 min，共40 cycle；最后72℃ 5 min，16℃ 10 sec完成擴增，PCR產物熱變形，成為單鏈DNA，用于與探針雜交[4]。（4）核酸分子雜交技術：一次性可以檢測出4種耳聾易感基因（GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3）的13個突變位點，最終給出肉眼能夠識別的雜交結果。

1.3 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析，計量資料表示為（±s），計數資料采用（n，%）表示，組間比較采用χ2檢驗，不符合正態分布者轉換為正態分布后行統計學分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

基因篩查結果：2 280例新生兒中，檢出耳聾基因突變108例，檢出陽性率為4.74%。其中GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3耳聾基因的突變率依次為2.94%、0.79%、0.53%和0.09%。檢出率最高的是GJB2 235delC雜合突變和SLC26A4 IVS7-2A＞G雜合突變，單基因檢出率為2.02%和0.53%。雙基因突變檢出GJB2 176del16/SLC26A4 IVS7-2雜合5例，GJB2 176del16/SLC26A4 IVS7-2雜合4例，詳見表1。

表1 基因篩查結果（%）（n=2 280）

3 討論

先天性耳聾是一種較為常見的出生缺陷疾病，嚴重影響生育質量，為更好的保障新生兒的健康成長，對該疾病需要做到早發現、早診斷和早治療，便于幫助患兒遠離疾病的困擾。

以往的常規聽力篩查診斷價值有限，患兒家屬接受度不高。而本次研究所采用的的遺傳性耳聾基因診斷芯片具有操作簡單、通量高等特點，能夠彌補常規聽力篩查的不足，在對藥物敏感性耳聾、遲發型耳聾以及漸進性耳聾篩查方面具有較高的應用價值[5-6]。遺傳性耳聾大多是因GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3耳聾基因突變所致，不少研究[7-8]表明，前兩者基因突變是較為常見的耳聾基因，這與本次的研究結果基本一致，其中GJB2基因突變2.94%和SLC26A4基因突變0.79%，通常是常染色體隱性遺傳，后者基因與大前庭導水管綜合征密切相關，會導致遲發型耳聾疾病的發生，其所引起的聽力損失水平大多是中重度，對新生兒造成的影響較大。及時應用耳聾基因芯片篩查方法，能夠提高診斷正確率，建議結合相應的CT、MRI等影像學檢查結果做進一步判斷，有助于提高患兒的治療效果；SLC26A4基因和GJB2基因都是以隱性遺傳方式遺傳，通過耳聾基因篩查，能夠對先天性耳聾疾病進行快速確診，及時采取相應的治療方法，能夠以免由聾致啞，且通過長期監測患兒聽力，便于及早發現異常；及時更換治療藥物；線粒體基因同樣也是聽力障礙中較為重要的影響因素，其屬于母系遺傳，通常表現為藥物性致聾[9-10]。目前為止已發現的線粒體DNA致病變有300多種，其中，聽力障礙和12SRNA基因突變關系較為密切，可能與細菌感染有關，對該類基因突變的處理，應當與抗生素藥物使用史有關[11]。GJB3基因突變攜帶者，通常表現為后感高頻感音性耳聾癥狀，其在少年時期的聽力無異常表現，而在青壯年時期開始出現聽力下降的癥狀[12]。該檢測方法能夠明確病因，將其應用于遺傳性耳聾的預防與阻斷中，將對聾病的診斷、治療和預防產生深遠影響。

綜上所述，應用遺傳性耳聾基因篩查方法，能夠為預防與阻斷耳聾患兒的發生提供參考依據，有助于提高生育質量。