驢人工授精技術在規?；H場的應用效果研究

阿依努爾·亞森，帕熱哈提江·吾普爾，張國庭，范洪先，董 紅，王岳強，高雪峰，鄭新寶

（新疆畜牧科學院，烏魯木齊 830011）

驢全身都是寶，驢皮可熬制阿膠，驢肉是綠色健康食品，驢奶具有清肺功能，對多種疾病有輔助治療作用，驢肝、驢鞭、驢肺等也具有較高的營養價值[1]。驢產業在我國發展迅速，已由役用向藥、肉、乳、保健美容及生物制品等多產業方向發展，呈現良好勢頭[2]。

驢人工授精技術推廣緩慢，絕大多數地區仍以牽引交配或自然交配為主。據報道，國外驢精液的低溫保存時間最長可達48 h，輸精后的情期受胎率為50%～60%；冷凍精液解凍后的直線前進運動率為30%～40%，受胎率為20%～40%[3]。從已發表的研究成果來看，驢精子和母驢對抗凍劑毒性和稀釋液中某些成分的敏感性可能較馬高[4]。另外，有關母驢發情和排卵規律的研究較少，這也是造成輸精后情期受胎率低的原因之一[5]。近幾年，隨著國內驢產業的快速發展，驢精液保存和人工授精技術也取得了顯著進展。驢精液在4 ℃保存4 d后精子直線前進運動率維持在60%以上，情期受胎率在50%左右；冷凍精液解凍后的精子直線前進運動率為50%～60%，情期受胎率為30%～40%，完全可以在驢產業中推廣應用[2]。

2019—2020 年，在南疆地區500 頭以上的規?；H場開展了驢人工授精技術應用推廣，將誘導發情、B超卵泡監測、定時排卵、細管精液人工授精技術進行了集成應用，充分利用了優質母驢的遺傳潛力和優秀種公驢資源，縮短了世代間隔，實現了提高規?；H場經濟效益的目的。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

在和田地區、喀什地區分別選擇2個規模化驢場，存欄量分別為6 000頭、700頭。

選擇3歲以上的健康成年繁殖母驢，品種以德州驢、關中驢、新疆驢及其雜交驢為主。母驢日糧配方：玉米1.0～1.5 kg，麩皮0.5～1.0 kg，干苜蓿草1.0 kg，小麥秸3.0～4.0 kg。自由飲水。

根據體型外貌特征，挑選德州驢種公驢8 頭、和田青驢3 頭、新疆驢2 頭作為采精種公驢，年齡均為5～6 歲。配種期間種公驢日糧配方：玉米2.4 kg，燕麥2.4 kg，麩皮1.0 kg，預混料0.15 kg，干苜蓿草2.0 kg，小麥秸8.0 kg。采精期種公驢每天補飼豆粕1.0 kg，胡蘿卜2.0 kg，雞蛋2個（早、晚各1個）。自由飲水。

采精頻率為每頭種公驢每星期采精2～3 次，間隔1～2 d采精一次。

1.2 藥品和試劑

用于誘導發情和定時排卵的藥品有注射用前列腺素（PG）、人絨毛膜促性腺激素（hCG）等，均購自寧波三生藥業有限公司；一次性輸精外套、輸精器，均購自廣西蔣氏公司；驢鮮精保存稀釋液，自配，配方見表1。

表1 驢鮮精保存稀釋液推薦配方

1.3 試驗步驟

1.3.1 種公驢采精 將種公驢牽入保定欄，刷拭體表，用溫水清洗陰莖、包皮。選擇健壯、性情溫順、營養較好、體格大小與公驢相近的發情母驢做臺驢。保定母驢四肢，清洗后軀和外陰部。技術人員提前將集精杯、離心管、濾紙（布）、燒杯放置于37 ℃恒溫箱內預熱。安裝好假陰道后，灌入40～43 ℃熱水，視采精公驢陰莖直徑調整內胎壓力，在假陰道口端涂抹適量潤滑劑。

將種公驢牽至采精棚，用發情臺驢誘情，當公驢勃起爬跨時，技術人員手持假陰道把柄處，站立于臺驢側后方，將假陰道平放于發情母驢尻側，并迅速將陰莖導入假陰道。公驢射精后，順勢使陰莖從假陰道中退出，將假陰道集精杯端緩慢下傾，精液采集完畢送入驗精室。

1.3.2 精液處理 挑除精液中的副性腺膠狀物，讀取精液體積，取樣并迅速置于37 ℃載玻片上，用顯微鏡對精子活力、密度等指標進行檢測。檢查后的精液過濾后，按1∶1 比例添加經37 ℃預熱過的鮮精稀釋液，混勻后倒入離心管，置于離心機中，2 500g離心5 min。去除離心后的上清液，將剩余的濃縮精液再次稀釋，稀釋后濃度為有效精子數為（1～2）×109個/mL。將精液混勻，吸入0.5 mm細管，備用。

1.3.3 誘導發情處理 直腸檢查或B 超檢查驢卵巢，如果發現有黃體存在則肌肉注射PG 4～6 mL。準確觀察發情，每日記錄并檢查卵泡。

1.3.4 定時排卵 每天利用B 超監測發情驢卵泡，當B 超監測到卵泡直徑≥30 mm 時，注射hCG 2a000 單位。在注射hCG 后的24 h 后進行第一次人工授精，在36～40 h進行第二次人工授精。

1.3.5 人工授精 母驢發情后，技術人員通過直腸檢查或B 超檢查確定卵巢上發情卵泡發育情況，如果發情母驢符合輸精要求，用一次性輸精外套，將0.5 mm 細管精液輸入發情母驢卵泡側子宮角；間隔12 h 再次輸精，直至母驢排卵。18 d 后，利用B 超開展早期妊娠檢查，檢查出的空胎驢繼續進行人工授精，懷孕驢在50～60 d 利用直腸檢查或B超檢查再次確定妊娠情況。

1.4 數據的統計分析

將種公驢采精、誘導發情、定時排卵、人工授精、妊娠檢查等相關數據進行匯總，采用SPSS 軟件中的卡方檢驗法進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同種公驢精液指標測定結果

見表2。

表2 不同品種種公驢精液指標測定結果

由表2 可以看出，采精后原精活力均達到了0.7 以上，密度均在2 億個/mL 以上，德州驢的采精量極顯著高于和田青驢和新疆驢（P＜0.01）。

2.2 誘導發情、定時排卵結果

注射PG 后,73.91%（85/115）的驢在72 h 內發情，16.52%（19/115）的驢在72 h后發情。

當卵泡直徑達到≥30 mm時注射hCG 2 000 IU，77.6%的驢（1 032/1 330）在24～48 h 內排卵；68.0%的驢（904/1 330）通過采用hCG 誘導可以將排卵時間控制在4 h（注射hCG 后36～40 h）內；95%的驢（1 264/1 330）通過hCG 誘導可以將排卵時間控制在8 h（注射hCG后28～44 h）內。

2.3 輸精技術對情期受胎率的影響

見表3。

表3 技術人員對細管人工授精受胎率的影響

由表3可以看出，不同熟練程度技術人員人工授精技術水平差異較大，情期受胎率、平均鮮精量等均有較大差異。

3 討論

本試驗在2 個500 頭以上規模化驢場開展了驢細管精液人工授精技術應用與推廣，細管精液人工授精母驢分別為3 260頭、476頭，情期受胎率平均達到38.12%、47.67%。

隨著冷凍精液和人工授精技術的廣泛推廣，每頭種公驢可承擔上千頭母驢的配種，因此種公驢是影響畜群遺傳品質的最主要因素之一。而種公驢的精液品質與繁殖力是影響其發揮遺傳潛能的重要因素[6]。在不同品種種公驢的精液品質中，德州驢的精子活力和采精量等指標均好于和田青驢、新疆驢。張瑞濤等[7]報道，德州驢單次射精量與體高呈正相關關系。本試驗結果與其結論基本一致，即體格高大健壯的種公驢采精量較大。

國外有研究表明，單獨使用PGF2α 類似物或類固醇類激素與GnRH類似物聯合處理，都能實現同期發情，但同期發情率會有差異[8]。而曾申明[2]研究發現，通過PGF2α和GnRH類似物聯合處理，在5 d 內約80%左右母驢的優勢卵泡直徑超過30amm，可以配種。本試驗中，用PG 處理后72 h內母驢發情率達到73.91%。該方法相對簡單，便于基層技術人員掌握。

卵泡直徑是判斷發情母驢卵泡是否達到能夠對促排卵激素做出應答的依據。近幾年，中國農業大學在驢定時排卵技術方面取得較大進展，母驢優勢卵泡直徑達到30 mm 以上時肌肉注射GnRH 類似物1 mL，85.3%的母驢（295/346）可在注射藥物后的36～44 h 內排卵，95.4% (330/346)可在48 h 內排卵[2]。本試驗利用B 超監測發情母驢卵泡，卵泡直徑達到≥30 mm時注射hCG 2 000 IU也取得了較好的促排卵效果。由于B超監測是促排卵技術的重要技術手段，卵泡直徑的判斷標準就成為促排卵效果好壞的關鍵。

輸精技術人員水平對驢細管精液人工授精受胎率的影響較為明顯。驢細管精液人工授精對輸精時間要求嚴格，準確的發情觀察或試情顯得尤為重要。而在規?；H場無法借助發情監測系統的情況下，技術人員在發情觀察或試情過程中的責任心將決定是否可以準確判斷母驢發情開始時間。由于母驢排卵延遲較為常見，在判斷排卵時間上，不同的輸精技術人員對B 超監測的卵泡直徑大小有不同的判別水平，因此經常會出現多次輸精但仍未排卵或輸精時間超過排卵時間前后6 h 以上，從而對受胎率有較大影響。此外，營養和飼養管理水平對驢繁殖性能影響也較大，特別是精料水平對驢的排卵過程有較大影響。

4 結論

細管精液人工授精技術對迅速擴大良種驢群體、縮短世代間隔、加速品種改良步伐作用巨大。借助B 超卵泡監測技術、定時排卵輸精技術可以有效提高驢細管精液人工授精技術水平。