大型集約化種豬場豬瘟控制與凈化的探討

伍少欽 ， 秦榮香 ， 陸 江 ， 盧 劍 ， 肖有恩 ， 蔣志疆 ， 謝露露 ， 吳志君

(廣西農墾永新畜牧集團有限公司 ， 廣西 南寧 530022)

豬瘟是危害養豬業的重大豬病之一，每年給世界養豬業帶來巨大的經濟損失。豬瘟不僅影響種豬場本身豬群健康，同時影響母豬繁殖性能和對外銷售種豬的健康度。良圻原種豬場作為種豬生產企業，十分重視豬瘟的控制和凈化工作，由專人負責制訂豬瘟控制與凈化實施方案，2005年10月在核心種豬場(第二原種豬場，基礎母豬規模1 200頭)開展豬瘟逐步控制與凈化方案的試點工作。方案中以檢測豬瘟病毒，淘汰免疫缺陷和免疫耐受的種豬； 必要時用免疫熒光抗體或RT-PCR等方法檢測豬瘟病毒。為做到核心群(場)的豬瘟凈化，公司全體技術人員在豬場生物安全體系建設、豬瘟疫苗篩選、免疫程序制定和完善、核心種豬群的多次全群檢測、所有后備豬抗體的合格準入、獸醫實驗室基礎建設(增加設備設施、篩選和比較檢測試劑和方法)等方面開展大量工作。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 豬瘟抗原、抗體ELISA 檢測試劑盒(抗體試驗盒判定標準:阻斷值<30 為陰性;31～40為可疑;阻斷值>40為陽性)，購自美國IDEXX公司；豬瘟疫苗，購自國內多家公司。

1.2 主要儀器 檢測儀器包括不同規格的微量移液器 (瑞士SOCOREX、美國EPPENDORF 等)、美國 Biotek ELX 800 酶標儀、英國UVI凝膠成像系統、日本TaKaRa TP600 梯度PCR儀、美國Baker生物安全柜、微量振蕩器(IKA)、高速離心機、離心管、一次性采血器等。

1.3 實驗動物 斷奶仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬和生產母豬等，良圻原種豬場自繁自養。

1.4 豬瘟凈化主要原理和方案 如果一個豬群體里持續多年保持沒有豬瘟易感個體，就清除了豬瘟。首先，基礎豬群的豬瘟抗體陽性率要在85%以上；第二，豬瘟抗體不合格個體補免疫苗6周后要達標，否則做淘汰處理；第三，補充后備豬的豬瘟抗體要100%合格。2005年，第二原種豬場季度抗體監測發現，該場符合豬瘟凈化標準，決定以第二原種豬場為示范，開展豬瘟凈化工作，以抗體檢測為主，淘汰免疫耐受或免疫缺陷豬只，必要時輔以病原檢測方法；期望通過2～3年完成核心場的豬瘟清除/凈化。凈化技術方案見圖1。

圖1 抗體為主的豬瘟凈化技術方案

1.5 試驗方法

1.5.1 豬瘟疫苗的篩選(2006年) 為評估各廠家豬瘟疫苗是否存在質量差異，特設此試驗。選取第一種豬場斷奶健康保育豬100頭，隨機分成試驗組與對照組，試驗前未免疫豬瘟疫苗。對照組50 d免疫ZM豬瘟脾淋苗，試驗組50 d免疫YS豬瘟脾淋苗，免疫劑量均為2頭份。分別于免疫后1個月和3個月，每組隨機采血18～30頭，評估豬瘟抗體。

1.5.2 母豬豬瘟抗體持續期試驗(2006年) 為驗證豬瘟疫苗能否維持一個繁殖周期，特在楊彭豬場和第一種豬場各固定一批母豬。在斷奶前3天，免疫4頭份的豬瘟疫苗(兔源組織苗)，分別在妊娠40～50 d、80～90 d和產后7～14 d(第一種豬場為斷奶前3天)采血，檢測豬瘟抗體。

1.5.3 產房仔豬超免試驗(2006年) 產房仔豬是否超免，一直存在爭議，為此選擇4個獨立生長育肥場開展超免與不超免的試驗(A、B、C場和D場，前3個場常規免疫，D場超免)，免疫后分不同階段評估豬瘟抗體。D場出生當天(0 d)接種2頭份疫苗，其后4個場均在30 d和60 d各免疫4頭份。A、B、C場和D場，每個豬場分別在一免前(4周)、二免前(7～8周)、 出保育(10周)、育肥12周、16～18周和20～22周隨機抽取健康豬只10頭，共240頭，采血評估豬瘟抗體。

1.5.4 生長育肥豬免疫程序的制定(2006年) 生長育肥豬一般免疫2次，為定制個性化的保育免疫方案，特開展相應試驗，即在常規30 d一免后，分別在50 d(對照組)和60 d(試驗組)進行二免；以試驗組二免6周后，同時采血18～20頭健康豬只檢測豬瘟抗體，評估免疫效果。

1.5.5 核心母豬場的3次全群檢測(2005—2007年) 先對基礎豬場按比例采血檢測豬瘟抗體，若群體抗體符合凈化標準，則進入3次全檢檢測階段。對于首次檢測不合格的豬只，再次免疫疫苗6周后檢測，若還不合格，則進行淘汰處理。期間所有后備豬必須檢測豬瘟抗體，執行合格準入原則。

1.5.6 保育豬豬瘟免疫1次或2次的對比試驗(2010年) 因核心場完成豬瘟凈化，為降低勞動強度，特開展保育豬免疫1次(60 d，2頭份/次)和免疫2次(30 d和60 d，每次1頭份)的大群對比試驗；分別于免疫后1個月和3個月隨機采血30頭豬檢測，比較二者的免疫效果。

1.5.7 保育豬只免1次豬瘟苗，定期監測出欄育肥豬抗體(2010—2019年) 每個月10號定期抽檢各豬場快出欄育肥豬每欄2～3頭，共18～20頭，評估保育場豬瘟疫苗免疫效果，同時監控每批豬瘟疫苗質量。

1.5.8 異常豬只豬瘟的病原學檢測(2007—2019年) 對臨床上觀察到的異常表現，比如母豬流產，公豬精液異常，保育豬發病或死亡等，采集對應樣品(血清、病料或精液等)，送去獸醫實驗室檢測豬瘟病毒。

2 結果

2.1 疫苗的篩選 免疫后1個月和3個月的抗體檢測結果如表1。從表1可知，ZM苗優于YS苗。

表1 保育豬不同豬瘟疫苗的對比試驗

2.2 母豬豬瘟抗體持續期 見表2。由表2分析，隨著時間推移(從妊娠40～50 d到產后7～14 d)，抗體陽性率整體上有所降低，但降幅緩慢；抗體阻斷率平均值和離散度隨時間的推移整體變化不大，母豬在整個妊娠階段豬瘟抗體衰減得很慢；產后7～14 d 豬瘟抗體阻斷率平均值有所下降，離散度比其他階段要大。按胎次分析，1～3胎母豬的豬瘟抗體比較理想，抗體陽性率比其他胎次要高，接近100%，同時1～3胎的離散度相對較小，說明群體抗體水平的一致性好。說明斷奶前3天免疫一針，能夠保護母豬整個妊娠階段和分娩階段。

表2 楊彭豬場妊娠母豬各階段豬瘟抗體檢測結果

由表3可知，第一種豬場從妊娠40～50 d到妊娠80～90 d，豬瘟抗體的陽性率有所降低，但降幅比較緩慢；到斷奶前3天時，豬瘟抗體的陽性率出現相對明顯的下降。抗體阻斷率的平均值和離散度在整個妊娠階段差異不明顯，豬瘟抗體在妊娠階段衰減得比較慢；但斷奶前3天母豬群的抗體平均值出現較明顯下降，離散度也開始增大，表明母豬群在斷奶前表現出豬瘟抗體的衰減。按胎次分析，發現1～3胎妊娠母豬的豬瘟抗體比較理想，抗體陽性率比其他胎次高，都在95%以上，同時離散度相對比較小，表明群體的抗體水平一致性好。

表3 第一種豬場妊娠母豬各階段豬瘟抗體檢測結果

通過上述2個豬場試驗，表明母豬在斷奶前3 d免疫4頭份的豬瘟組織苗，會產生有效的豬瘟抗體并能維持5個月，斷奶前免疫豬瘟疫苗是一種比較合理的免疫方法。

2.3 產房仔豬超免與否 通過4個豬場免疫試驗，證實豬瘟疫苗常規免疫 (30 d～60 d) 整體效果優于乳前免疫(0～60 d)[1]。

2.4 生長育肥豬免疫程序優化 2個保育豬場共6個批次豬瘟疫苗試驗結果一致：30日齡首免豬瘟后，60日齡進行二免的豬瘟抗體各項指標均優于50日齡[2]。

2.5 核心母豬場的3次全群檢測 2005—2007年的3次全群檢測結果如表4。每次全群檢測的數量約為1 500頭(含后備豬)。由表4可知，隨著豬瘟抗體不合格母豬的淘汰，以及持續不斷補充抗體合格后備豬，基礎豬群抗體陽性率得到明顯提升，抗體平均值逐步上升，CV值變得越來越小，群體差異度越來越小，整個種豬群豬瘟抗體分布越來越理想。

表4 核心楊3次豬瘟全群檢測結果

2.6 保育豬豬瘟免疫1次或2次的對比 從2批豬的試驗數據(表5)分析，保育豬群免疫1次(試驗組)的各項豬瘟抗體指標均優于2次免疫(對照組)。1次免疫不僅降低勞動強度，同時提高免疫效果。從2011年2月開始，保育豬的豬瘟免疫更改為60日齡免疫1次，每次2頭份。

表5 試驗組和對照組60日齡免疫豬瘟疫苗后1個月/3個月的豬瘟抗體結果

2.7 保育豬只免1次豬瘟疫苗后，快出欄育肥豬抗體的定期監測 出欄前育肥豬監測結果如表6。由表6分析，2011—2013年出欄前育肥豬的豬瘟抗體水平呈下降趨勢，2014—2015年豬瘟抗體有所上升，均在80%以上，相對比較理想。2013年豬瘟抗體平均陽性率最低，僅82.8%，通過對疫苗追溯，發現抗體較差集中在2012年12月使用批號為130001-1的疫苗，2013年7月份調整疫苗，從11月份開始，豬瘟抗體明顯改善。近幾年育肥出欄前抗體陽性率在91%以上。由此，豬瘟疫苗的常規評估可及時發現疫苗問題。2019年因為周邊非洲豬瘟疫情比較嚴峻，特殊時期為減少交叉污染，沒有開展每個月的采血監督監測。

表6 出欄前育肥豬豬瘟抗體陽性率結果 (2011—2019年)

2.8 異常豬只豬瘟病原學檢測 良圻原種豬場2007—2019年異常豬只的豬瘟病原學檢測如表7。12年間共監測豬瘟病毒1 337份(POSE)，檢測結果均為陰性，表明豬場從2007年以來沒有檢到豬瘟野毒。

表7 異常豬只豬瘟病毒的RT-PCR檢測結果 (2007—2019年)

3 討論

3.1 豬瘟凈化方案的選擇 豬瘟凈化，傳統方法必須要逐頭采集扁桃體進行病原學監測，沒有檢測到豬瘟野毒才算是凈化。在豬場一線的執業獸醫師們以及與豬場接觸多的專家們認為，扁桃體采樣對種豬應激大，經常存在采樣不準的弊端。良圻原種豬場的豬瘟凈化方案(以抗體監測為主，對全部基礎豬群連續多次監測抗體，淘汰免疫缺陷或免疫耐受種豬，對產仔異常的母豬監測豬瘟病原等)，在臨床上顯得方便實用，結果可靠，并有過凈化成功的案例[3-5]。2010年良圻原種豬場建立了大型規模化豬場通過檢測淘汰長期持續保持無豬瘟易感個體的清除豬瘟技術。

3.2 豬場豬瘟苗免疫程序的修正 豬瘟疫苗的免疫程序不是一成不變的，有時要根據實際情況和疫苗特點通過科學合理的試驗進行適當調整。由于實踐中很難保證每頭剛出生的仔豬在吃初乳前接種豬瘟疫苗，同時仔豬的免疫器官也不完善，一般乳前免疫的抗體評估效果較差。有文獻報導[1]，A、B、C三個不進行超免的豬場，其保育豬在7～8周二免后，豬瘟抗體整體上很快升高，在22周時豬瘟抗體陽性率分別為90%、100%和100%，而超免場(D場)二免后豬瘟抗體不升反降；22周時，D場豬瘟抗體才有緩慢上升趨勢，抗體陽性率僅有60%，遠低于其他3個常規免疫場。保育豬30 d首免，60 d進行第2次免疫優于50 d進行第2次免疫[2]。隨著種豬群豬瘟凈化工作的完成，由于群體內沒有豬瘟野毒的存在，保育豬首次免疫可以推遲到母豬抗體基本消失之后，由此保育豬群的免疫次數由原來的2次減少至1次。

3.3 穩定可靠的豬瘟疫苗是實現豬瘟凈化的前提 通過近15年的豬瘟疫苗使用經驗，不同廠家和同一廠家不同批次的疫苗都會存在質量差異，甚至某些廠家的細胞苗中還會檢出牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)[6]，因此對疫苗的篩選顯得十分重要。良圻原種豬場15年來，母豬場始終使用一個集團公司的疫苗，期間出現過個別批次的疫苗質量問題，只要有一個批次的豬瘟疫苗不穩定，就會影響整個豬群的免疫抗體水平，豬瘟凈化成果就有前功盡棄的風險，因此需要與廠家深度溝通，定制高品質疫苗；同時實驗室要做好每批疫苗在正式使用前的質量監測和臨床試驗，通過質量標準后才能正式使用。

3.4 豬瘟E2疫苗的使用效果和應用前景 豬瘟E2基因工程亞單位疫苗于2018年正式在國內上市。王遵寶等用E2疫苗免疫豬瘟抗體陰性仔豬2次，二免2周后用石門毒系血毒攻毒(含106MLD)，免疫豬只全部存活，均無病變，均無排毒[7]。Tran等發現，越南科學家研發的E2亞單位疫苗(來自1.1基因型)可對3個不同基因型的流行毒株(1.1、2.1和2.2)提供全面的同源或者異源交叉保護[8]。Madera等發現E2亞單位疫苗一針免疫后2周提供全面保護，持續期4個月以上[9]。E2基因工程疫苗的推出為國內豬瘟凈化提供了新思路，基因缺失疫苗配合鑒別診斷試劑，理論上規模化豬場凈化豬瘟將會更加便捷，這有待于國內大型規模化種豬場進一步驗證。

3.5 豬瘟凈化后對豬場生產經營的影響 (2005—2015年) 豬場生豬死亡率明顯降低：良圻原種豬場哺乳仔豬死亡率比集團公司5.38%低0.55百分點，保育豬死亡率比集團公司7.81%低1.32百分點，育肥豬死亡率比集團公司6.15%低1.58百分點；豬場獸藥費單位重量開支明顯減少：良圻原種豬場基本豬群藥費開支比集團公司低0.66元/ kg。豬瘟凈化后也有利于豬繁殖與呼吸綜合征的防控：由于豬群內沒有豬瘟和豬偽狂犬病等野毒，當豬繁殖與呼吸綜合征不穩定時，可以方便開展后備豬或發病母豬群的血清馴化，近10年來良圻原種豬場曾多次對母豬場開展血清馴化工作[10-12]，并取得了比較好的成績。

4 小結

從2005年開始，良圻原種豬場在核心種豬場系統地開展豬瘟逐步控制與凈化工作，以檢測豬瘟抗體為主，淘汰豬瘟免疫缺陷或耐受的種豬，后備豬豬瘟抗體保證100%合格準入；2005—2007年在國內首家連續3次在核心種豬場進行全群檢測，且每次種豬群檢測數不低于1 400頭，綜合生物安全防疫措施，2007年完成核心場免疫狀態下的豬瘟凈化，為國內規模種豬場開展豬瘟控制與凈化提供思路與借鑒。其凈化模式被國家生豬產業技術體系疫病控制研究室認可，作為豬瘟控制與凈化的備選方案，面向全國41家綜合試驗站推廣應用。

志謝：曾容愚博士提供E2疫苗的試驗數據和相關文獻。