放牧條件下染氟綿羊肺臟、腎臟抗氧化指標(biāo)測(cè)定與分析

吳祥財(cái) ， 蔡金山 ， 都占林 ， 馬 強(qiáng) ， 盧福山

(1.青海農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院 ， 青海 湟源 812100 ； 2.青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ， 青海 西寧 810001 ； 3.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院 ， 青海 西寧 810003)

氟為機(jī)體內(nèi)的必需元素，但過(guò)量的氟可導(dǎo)致以氟斑齒為典型癥狀的骨相損害外，還會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生過(guò)多的氧自由基，攻擊抗氧化系統(tǒng)，抑制氧化酶活性，破壞肺臟和腎臟等氧化器官細(xì)胞，干擾正常的氧化代謝過(guò)程[1-2]。2016年以來(lái)，青海省某地區(qū)綿羊出現(xiàn)精神沉郁、毛色粗亂、運(yùn)步拘謹(jǐn)、呼吸困難，牙齒釉面出現(xiàn)黃色、黑色或褐色的斑點(diǎn)，甚至出現(xiàn)磨損、斷裂或脫落等典型的氟斑齒。本試驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)放牧條件下染氟組綿羊和健康組綿羊肺臟、腎臟組織中抗氧化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定和分析，判定氟對(duì)肺臟和腎臟功能狀態(tài)的影響，為診斷和預(yù)防氟中毒提供基本的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組 本試驗(yàn)按臨床癥狀將綿羊分為3個(gè)組：精神沉郁，走動(dòng)緩慢，被毛無(wú)光澤，牙齒表面出現(xiàn)黃色或黃褐色斑點(diǎn)，門(mén)牙有一定的磨損為輕微組；精神萎靡，時(shí)不時(shí)臥地不起，被毛粗亂，采食費(fèi)力，門(mén)齒磨損嚴(yán)重或缺失，臼齒齒面發(fā)黑，牙齒磨面凹凸不平為嚴(yán)重組；精神狀態(tài)良好，行動(dòng)靈活，被毛平順整潔，牙面白色且有光澤，牙齒完整為健康組(離疫病區(qū)10 km)。每組各5只羊。

1.2 樣品采集 綿羊頸部放血致死后，打開(kāi)胸腹腔，立即采集肺臟和腎臟，送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行組織勻漿處理。

1.3 項(xiàng)目測(cè)定與方法

1.3.1 勻漿液制備 用預(yù)冷的PBS(0.01 mol/L,pH=7.4)沖洗組織表面血液后，稱取組織樣1 g，剪碎，加入9倍比例PBS，用勻漿器勻漿后，3 000 r/min離心10 min，吸取上清液備用。

1.3.2 項(xiàng)目測(cè)定 采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒(批號(hào):20170613)，總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑盒(批號(hào):20170613)，丙二醛(MDA)測(cè)試盒(批號(hào):20170524)，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)測(cè)試盒(批號(hào):20170524)，過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒(批號(hào):20170524)。以上項(xiàng)目測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 不同組綿羊肺臟組織抗氧化指標(biāo) 結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，健康組綿羊肺組織T-SOD、T-AOC以及CAT活性與輕微組和嚴(yán)重組綿羊的相近(P>0.05)。而健康組的MDA含量以及GSH-Px活性與輕微組無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但顯著低于嚴(yán)重組(P<0.05)。

表1 不同組綿羊的肺組織抗氧化指標(biāo)比較Table 1 Comparison of antioxidation indexes in lung tissue of different groups of sheep

2.2 不同組綿羊腎臟組織抗氧化指標(biāo) 結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，健康組綿羊肺組織T-SOD、GSH-Px活性高于輕微組和嚴(yán)重組綿羊(P<0.05或P<0.01)。而健康組的MDA含量以及CAT活性顯著低于輕微組和嚴(yán)重組(P<0.05或P<0.01)。

表2 不同組綿羊的腎組織抗氧化指標(biāo)比較Table 2 Comparison of antioxidation indexes in kidney tissue of different groups of sheep

注:同一行內(nèi)，肩標(biāo)大寫(xiě)字母不同表示差異極顯著(P<0.01)，肩標(biāo)小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母相同或無(wú)標(biāo)記表示差異不顯著(P>0.05)

Note:In the same line,the data with different majuscule letter superscripts show extremely significant difference (P<0.01)，the data with different lowercase letter superscripts show significant difference (P<0.05)，the data with the same letter or no letter superscript show no significant difference (P>0.05)

3 討論

3.1 放牧條件下染氟綿羊臨床癥狀 有資料表明，氟可以使成釉細(xì)胞發(fā)育不良，導(dǎo)致釉質(zhì)層不規(guī)則,齒質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生異常[3]。從臨床癥狀發(fā)現(xiàn)，染氟綿羊出現(xiàn)氟斑齒，部分羊由于牙齒磨損嚴(yán)重，斷裂甚至脫落，導(dǎo)致采食與咀嚼困難，出現(xiàn)消瘦，精神狀態(tài)不良，步態(tài)蹣跚，四肢無(wú)力，被毛粗亂無(wú)光澤，進(jìn)而抵抗力下降。由試驗(yàn)結(jié)果可知，依據(jù)牙齒狀況判斷氟中毒嚴(yán)重程度具有一定的參考價(jià)值。

3.2 染氟綿羊肺臟抗氧化指標(biāo)分析 翟慎永等[4]報(bào)道了某鋁廠氟污染兒童的某些肺功能指標(biāo)數(shù)據(jù)明顯低于對(duì)照組兒童。而李紹玉等[5]認(rèn)為，體內(nèi)蓄積的氟化物對(duì)肺細(xì)胞膜分子結(jié)構(gòu)造成破壞，導(dǎo)致毛細(xì)血管的通透性增加，進(jìn)而促使血漿滲入肺泡壁或肺泡腔，導(dǎo)致肺部出現(xiàn)肺泡性水腫或者肺間質(zhì)性水腫，引起肺部循環(huán)障礙以及通氣功能的失調(diào)。GSH-Px活性可以降低脂類過(guò)氧化物的形成，從而減輕過(guò)氧化物分解過(guò)多，減輕組織細(xì)胞過(guò)氧化損傷，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性。由表1可知，健康組GSH-Px活性顯著高于嚴(yán)重組(P<0.05)，但MDA含量低于嚴(yán)重組(P<0.05)，表明嚴(yán)重組綿羊肺組織中存在大量自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物—MDA，當(dāng)肺組織細(xì)胞受到大量自由基損傷時(shí)，便會(huì)消耗大量的GSH-Px，以保護(hù)肺細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性。