自噬相關基因Beclin1與乳腺癌病理相關性分析

鄒華偉 陳澎濤 劉 洋

乳腺癌發病率逐年升高，以成為我國女性最好發的腫瘤。當前乳腺癌發病的原因與乳腺癌家族史和易感基因、放射線環境、高脂肪飲食以及體內的雌激素水平等有著很大關系。其并發癥多、危險性大，預后差，早期臨床癥狀并不明顯，大多數病人出現乳房皮膚改變、引流區淋巴結腫大時已是疾病晚期[1-3]。因此，需要更多分子生物學指標來判斷乳腺癌患者對不同治療的反應及惡性程度。Beclin1是在哺乳動物之中發現和自噬相關的1種遺愛基因，它可以激活細胞程序性死亡過程并調節自噬活性。相關研究表明[4-6]，Beclin1能夠抑制腫瘤發展和發生，對于乳腺癌患者的病情惡化程度有著重要價值。因此，本文選取我院收治的120例乳腺癌患者作為研究對象，具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年6月至2020年6月共收治的120例乳腺癌患者作為研究對象，將其分為研究組，所有患者均行手術或空心針穿刺病理證實為乳腺癌，另取同期120例良性乳腺腫瘤患者作為對照組。兩組患者一般資料如下所示，見表 1。

表1 兩組患者一般資料對比分析

1.2 入選標準與排除標準

入選標準：臨床資料與病理資料完整，患者治療依從性好；術后依照乳腺癌診療規范并依照病情進行相應的治療；溝通手術后的病理診斷確診為乳腺癌患者；在術前未經免疫治療、化療以及放療等；無手術禁忌癥，具備手術指征；所有患者對本研究知情并簽署知情同意書。

排除標準：臨床資料不全；嚴重器官功能不全；不愿意接受病理檢查的患者；孕婦或者哺乳期婦女；合并其他惡性腫瘤患者；合并精神類疾病或認知障礙患者。

1.3 方法

免疫組織化學法：將收集的標本在冰上進行石蠟包埋，注意盡量將所有組織覆蓋，然后放入-20℃冰箱20～30 min，設置切片機3 μm，連續切片，認真選取形態較好、組織完整的切片放到35 ℃溫水中，等到切片完全展平后收于防脫載玻片上，晾干后置于玻片架上，放入烤箱，調節烤箱溫度為65 ℃，烘烤2 h。

總RNA提?。簭牧阆?0 ℃的冰箱中取出不同類型的乳腺癌組織，將100 mg組織放入研缽之中加入氮液研磨，最后磨成粉末，加入BufferRLT 1 ml進行反復的吹打，讓樣品能夠充分的裂解，并在室溫5 min等待核酸蛋白復合物分離，之后按照說明嚴格步驟提取RNA，并進行逆轉錄合成cDNA。

免疫組化結果判定：應用半定量計分法，細胞核內和細胞質出現棕黃色顆粒，判定為陽性。并依照切片之中細胞染色強度與陽性細胞總數分析。其中陽性著色重度為3分，中度為2分，輕度為1分，背景清晰無色為0分。陽性細胞數量>75%為3分，25%～75%為2分，<25%為1分?？偡钟?～6分為陽性[7]。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 三組患者自噬相關基因Beclin1mRNA表達水平

通過對比三組中自噬相關基因Beclin1mRNA表達水平發現，良性組和惡性組均顯著低于對照組，且惡性組顯著低于良性組，對比差異顯著(P<0.05)，見表2。

表2 三組患者自噬相關基因Beclin1mRNA表達水平

2.2 三組患者自噬相關基因Beclin1蛋白表達陽性率

通過對比三組自噬相關基因Beclin1蛋白表達陽性率發現，良性組陽性率為60.00%，惡性組陽性率為26.67%，對照組陽性率為91.67%，對比差異顯著(P<0.05)，見表3。

表3 三組患者自噬相關基因Beclin1蛋白表達陽性率(例，%)

2.3 120例乳腺癌患者Beclin1陽性與陰性患者臨床病理特征對比分析

120例乳腺癌患者中，Beclin1陽性與Beclin1陰性患者月經狀態、年齡、腫瘤大小對比無明顯差異(P>0.05)，兩組患者的臨床分期、淋巴結轉移、組織分化程度對比差異顯著(P<0.05)，如表4所示。

表4 120例乳腺癌患者Beclin1陽性與陰性患者臨床病理特征對比分析/例

2.4 自噬相關基因Beclin1與乳腺癌病理相關性分析

Spearman相關分析顯示，月經狀態、年齡、腫瘤大小與自噬相關基因Beclin1不相關(P>0.05)，臨床分期、淋巴結轉移和組織分化程度與自噬相關基因Beclin1呈負相關(P<0.05)，如表5所示。

表5 自噬相關基因Beclin1與乳腺癌病理相關性分析

3 討論

自噬屬于1種細胞維持自身內環境穩定的手段，一旦人體內自噬功能出現異常，可以導致細胞出現異常增生情況，嚴重者會出現癌變現象。因此深入了解細胞的自噬功能與腫瘤細胞的自噬功能，能夠判斷腫瘤患者的預后情況，并研究出針對于腫瘤治療的有效藥物。Beclin1又稱BECN1基因，屬于自噬啟動的關鍵蛋白，其主要作用于細胞自噬成核時期。相關研究表明[8-10]，Beclin1表達在人類的卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌之中分別下降了75%、50%和40%。

本研究結果表明，通過對比三組中自噬相關基因Beclin1mRNA表達水平發現，良性組和惡性組均顯著低于對照組，且惡性組顯著低于良性組，對比差異顯著(P<0.05)，相關研究表明[11]，Beclin1在膀胱癌組織之中的表達量明顯低于正常膀胱組織，而且在膀胱癌的發展與發生過程中具有重要作用，與本研究相一致；通過對比三組自噬相關基因Beclin1蛋白表達陽性率發現，良性組的陽性率為60.00%，惡性組患者的陽性率為26.67%，對照組的陽性率為91.67%，對比差異顯著(P<0.05)，由此證明，Beclin1在乳腺癌患者的陽性表達患者少于良性腫瘤組織和健康者，Beclin1的表達水平也就越低。由此可推測，Beclin1在乳腺細胞發生病變開始，會出現功能缺陷，這可能是因為腫瘤細胞的其他抑癌基因出現相互作用，從而導致Beclin1表達出現異常，對細胞的自噬功能產生抑制作用，從而導致其細胞惡性開始增殖，具體生物學通路還需要更多的細胞學實驗和動物實驗進行驗證[12-14]；120例乳腺癌患者中，Beclin1陽性與Beclin1陰性患者月經狀態、年齡、腫瘤大小對比無明顯差異(P>0.05)，兩組患者的臨床分期、淋巴結轉移、組織分化程度對比差異顯著(P<0.05)；Spearman相關分析顯示，月經狀態、年齡、腫瘤大小與自噬相關基因Beclin1不相關(P>0.05)，臨床分期、淋巴結轉移和組織分化程度與自噬相關基因Beclin1呈負相關(P<0.05)，臨床分期、腫瘤大小、淋巴結轉移以及腫瘤分化程度是體現腫瘤惡性程度的臨床病理指標，對于乳腺癌患者具有重要的預測作用，因此本文以這三個指標來分析Beclin1和病理相關性。陳小林等[15]對上皮性卵巢癌組織中Beclin1表達及相關性研究發現，患者的臨床分期、淋巴結轉移情況與其明顯相關，與本研究相符。

總而言之，自噬相關基因Beclin1在乳腺癌患者的癌組織中表達低于良性腫瘤患者和健康人士，隨著患者病情加重，自噬相關基因Beclin1表達明顯降低，Beclin1與乳腺癌患者的臨床分期、淋巴結轉移和組織分化程度呈負相關，因此可以應用自噬相關基因Beclin1來判斷乳腺癌患者病情的嚴重程度。