中藥乳炎康防治奶牛隱性乳房炎的效果及安全性試驗(yàn)

武果桃 ， 任 杰 ， 牛國慶

(1. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 ， 山西 太原 030032 ； 2.太原市小店區(qū)畜禽繁育工作站 ， 山西 太原 030032)

奶牛乳房炎是影響奶牛乳業(yè)發(fā)展的四大疾病之一，目前奶牛乳房炎仍是導(dǎo)致奶牛場(chǎng)損失最為嚴(yán)重的疾病[1]。根據(jù)國際奶協(xié)數(shù)據(jù)：奶牛乳房炎的發(fā)病率為50%，隱性乳房炎發(fā)病率是臨床型乳房炎的15～40倍[2]，約占乳房炎的90%[3-5]，不但引起產(chǎn)奶量降低4%～10%，還影響乳品質(zhì)量及奶牛繁殖[6-7]，縮短奶牛使用壽命、增加后備奶牛成本，而且延長奶牛產(chǎn)后發(fā)情和妊娠時(shí)間，如不積極采取措施極易轉(zhuǎn)變?yōu)榕R床型乳房炎，給奶牛業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

本試驗(yàn)通過對(duì)防治奶牛隱性乳房炎中藥乳炎康的效果及其安全性的試驗(yàn)，最終確定其療效和安全性，促進(jìn)防治奶牛隱性乳房炎中藥新制劑開發(fā)、減少隱性乳房炎給奶牛業(yè)造成的損失。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 將藥物依據(jù)組方配藥，粉碎為粗粉，制成乳炎康和雙丁散2個(gè)配方，乳炎康由金銀花、紫花地丁、連翹、蒲公英、赤芍、乳香、瓜蔞、黃連、黨參、當(dāng)歸、甘草組成，雙丁散由蒲公英、紫花地丁、赤芍組成，所有中藥均購自安徽省亳州市和河北省安國市。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 經(jīng)加州乳房炎檢測(cè)法(CMT)檢測(cè)為隱性乳房炎的荷斯坦奶牛44頭，由山西省太原市小店區(qū)某規(guī)模化奶牛場(chǎng)提供。

昆明小鼠，體重(20±2)g和(28±2)g，各40只，雌雄各半，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 奶牛隱性乳房炎判定標(biāo)準(zhǔn) 見表1。

表1 奶牛隱性乳房炎CMT法判定標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Criteria of CMT method for recessive mastitis in cows

1.3.2 中藥乳炎康防治奶牛隱性乳房炎的試驗(yàn)方法 山西省太原市小店區(qū)某規(guī)模化奶牛場(chǎng)經(jīng)CMT法檢測(cè)為隱性乳房炎的奶牛44頭，隨機(jī)分為3組，即乳炎康組、雙丁散組和抗生素組，乳炎康組及雙丁散組分別按每天每頭奶牛在飼料中添加200 g中藥乳炎康及雙丁散,抗生素組按規(guī)定注射頭孢噻呋鈉，每組分別為15、15頭和14頭，試驗(yàn)共進(jìn)行10 d，預(yù)試驗(yàn)3 d，正式試驗(yàn)7 d。

1.3.3 中藥乳炎康急性、毒性試驗(yàn)方法 取體重(20±2)g小鼠40只，隨機(jī)分成4組，將中藥乳炎康制成1 g原生藥/mL湯劑，高、中、低劑量組分別按0.4、0.3 mL/(10 g·bw)和0.2 mL/(10 g·bw)中藥乳炎康進(jìn)行灌胃，空白對(duì)照組按0.4 mL/(10 g·bw)灌服生理鹽水，給藥后觀察24 h。

1.3.4 中藥乳炎康最大耐受性試驗(yàn)方法 方法同急性毒性試驗(yàn)。但需24 h內(nèi)連續(xù)灌胃投藥2次，給藥后持續(xù)觀察7 d。

1.3.5 中藥乳炎康亞急性、毒性試驗(yàn)方法 取體重(28±2)g小鼠40只，將中藥乳炎康制成1.5 g/mL 湯劑，方法及分組同急性毒性試驗(yàn)，高、中、低劑量組分別按0.28、0.14 mL/(d·只)和0.07 mL/ (d·只)灌胃給藥，連續(xù)給藥14 d，空白對(duì)照組不給藥，組內(nèi)雌雄分開飼養(yǎng)，觀察持續(xù)28 d。試驗(yàn)結(jié)束后每組隨機(jī)選3只小鼠剖檢觀察內(nèi)臟變化，并測(cè)定肝體比、腎體比、脾體比。

1.3.6 采血測(cè)定血液生化指標(biāo)方法 各組隨機(jī)抽取5只小鼠，禁食12 h并于次日早晨空腹采血0.5 mL 注入干燥真空采血管內(nèi)以制備血清,血清透明、無溶血現(xiàn)象,4 ℃保存?zhèn)溆谩２捎萌詣?dòng)化分析儀測(cè)定血液生化指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)，多個(gè)樣本均數(shù)的比較用單因素方差分析，檢驗(yàn)結(jié)果均取P<0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 奶牛隱性乳房炎檢測(cè)及中藥乳炎康防治奶牛隱性乳房炎對(duì)比試驗(yàn) 奶牛隱性乳房炎檢測(cè)結(jié)果見表2，中藥乳炎康防治奶牛隱性乳房炎對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果見表3。結(jié)果表明：乳炎康組治療奶牛隱性乳房炎有效率比雙丁散組及抗生素組分別提高13.34%(P<0.05)和15.24%(P<0.01)，治愈率比雙丁散組及抗生素組分別提高6.66%(P<0.05)和9.04%(P<0.01)，乳炎康組平均產(chǎn)奶量提高20.92%，雙丁散組平均產(chǎn)奶量提高11.02%，抗生素組平均產(chǎn)奶量提高7.23%，乳炎康組比雙丁散組及抗生素組平均產(chǎn)奶量分別提高1.21 kg/(頭·d)和1.45 kg/(頭·d)，差異極顯著(P<0.01)。說明中藥乳炎康對(duì)防治奶牛隱性乳房炎及提高生產(chǎn)性能有良好效果。

表2 奶牛隱性乳房炎檢測(cè)結(jié)果Table 2 Detection results of recessive mastitis in cows (頭)

表3 中藥乳炎康防治奶牛隱性乳房炎對(duì)比試驗(yàn)Table 3 Comparative test on the prevention and treatment of recessive mastitis in dairy cows with traditional Chinese medicine Ruyankang

2.2 中藥乳炎康安全性試驗(yàn) 選臨床效果好的中藥乳炎康進(jìn)行安全性試驗(yàn)。

2.2.1 急性、毒性試驗(yàn) 急性毒性試驗(yàn)中，各組小鼠精神狀態(tài)良好，呼吸正常，采食、飲水以及在籠中的活動(dòng)狀態(tài)未見異常，各組均無小鼠死亡。推測(cè)本中藥制劑給藥安全性高，不會(huì)引起毒性作用。

2.2.2 最大耐受性試驗(yàn) 最大耐受性試驗(yàn)中，乳炎康高劑量組小鼠在給藥后28 h采食、飲水及活動(dòng)顯著減少，后期逐漸恢復(fù)正常；中劑量組給藥后第2天活動(dòng)減少，但在之后活動(dòng)恢復(fù)正常；低劑量組和對(duì)照組小鼠在觀察期內(nèi)未見明顯異常，各組小鼠未見死亡。乳炎康高、中、低劑量組試驗(yàn)藥量分別相當(dāng)于臨床防治用量的400、300倍和200倍。最大耐受性試驗(yàn)前后小鼠體重變化結(jié)果見表4。結(jié)果表明，中藥乳炎康各劑量組小鼠增重均極顯著高于空白對(duì)照組 (P<0.01)。說明中藥乳炎康不僅使用安全性高，耐受性好，而且具有提高增重效果。

表4 最大耐受性試驗(yàn)前后小鼠體重變化Table 4 Weight changes of mice before and after the maximum tolerance test (n=10,g)

2.2.3 亞急性、毒性試驗(yàn) 試驗(yàn)前后小鼠體重變化結(jié)果見表5。結(jié)果表明，中藥乳炎康各組小鼠增重情況差異不顯著(P>0.05)。說明中藥乳炎康長期使用無蓄積性毒性，使用安全性高，對(duì)小鼠生長性能無不良影響。

表5 試驗(yàn)前后小鼠體重變化結(jié)果Table 5 Weight change results of mice before and after the experiment (n=10，g)

試驗(yàn)后各組小鼠肝體比、腎體比、脾體比測(cè)定結(jié)果見表6。結(jié)果表明，中藥乳炎康各組小鼠肝體比、腎體比、脾體比差異不明顯(P>0.05)。說明中藥乳炎康長期使用安全性高，耐受性好，無蓄積性毒性反應(yīng)。

各組血液生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見表7。結(jié)果表明，中藥乳炎康各組小鼠血液常規(guī)及生化指標(biāo)差異不明顯(P>0.05)，說明中藥乳炎康長期使用對(duì)小鼠血液生理指標(biāo)無不良影響。試驗(yàn)選在7、8月份進(jìn)行，部分受影響指標(biāo)可能與試驗(yàn)期間熱應(yīng)激及喂藥應(yīng)激有關(guān)。

表7 試驗(yàn)后各組小鼠血液生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Table 7 Results of blood biochemical indexes of mice in each group after the test

3 討論

近年來，奶牛隱性乳房炎呈上升趨勢(shì)，對(duì)該病至今沒有徹底的解決辦法，抗生素替代品和抗菌新藥防治奶牛隱性乳房炎一直是該病研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)[8-13]。本課題組根據(jù)奶牛乳房炎的臨床表現(xiàn)，認(rèn)為奶牛乳房炎即乳癰，是疼、濕、氣、血郁結(jié)不散，化而為炎，按照中獸醫(yī)藥理論及中藥方劑學(xué)組方原則，擬以清熱解毒、消腫散結(jié)、抗菌消炎、行氣活血、調(diào)節(jié)代謝為治療原則，以蒲公英、連翹清熱解毒、消腫散結(jié)為君藥；紫花地丁、金銀花等加強(qiáng)君藥清熱解毒、瀉火燥濕作用為臣藥；赤芍、乳香消腫止痛、當(dāng)歸活血和血、黨參和中益氣為佐藥；甘草清熱解毒、調(diào)和諸藥為使藥，諸藥共用可達(dá)補(bǔ)氣、固本、衛(wèi)外、安神之功用。最后達(dá)到治療奶牛隱性乳房炎，提高平均產(chǎn)奶量等作用。

安全性試驗(yàn)是開發(fā)研制中藥新藥不可缺少的環(huán)節(jié)，為了檢驗(yàn)中藥制劑的安全性，做急性、毒性試驗(yàn)和耐受性試驗(yàn)是必要的[14]。本試驗(yàn)進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)中，小鼠無不良反應(yīng)和死亡現(xiàn)象，表明自制中藥乳炎康安全無毒，耐受性較高。在亞急性和耐受性試驗(yàn)中各組小鼠生長發(fā)育良好，體質(zhì)量、臟器系數(shù)和血液生化指標(biāo)與空白對(duì)照組之間無明顯差異，且均在正常范圍；在添加中藥乳炎康的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其具有促進(jìn)生長作用，其中母鼠體質(zhì)量、增重等較公鼠低，為性別差異所致。本復(fù)方中藥長期使用毒副作用小，使用安全性高。

試驗(yàn)結(jié)果表明，中藥乳炎康防治奶牛隱性乳房炎有效率、治愈率及提高平均產(chǎn)奶量都優(yōu)于其他組，且有良好效果。同時(shí)乳炎康毒副作用小，使用安全性高，可在臨床推廣使用。