廣西特色藥材光莖栓果菊中脂溶性成分的GC-MS分析

張穎，張赟赟，巫凱，陳鋒，李嘉，楊海船*（1.廣西壯族自治區中醫藥研究院化學所，南寧 530022；2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，南寧 530022）

光莖栓果菊（Launaea acaulis）為菊科栓果菊屬植物，又稱土蒲公英、滑背草鞋，主要分布于廣西、廣東、貴州、云南等地。全草或根入藥，具有清熱解毒、利尿之功效，用于癰疽疔瘡、尿路感染[1-2]。廣西民間將其煮水服用治療乳腺癌，有較好的療效。本實驗前期采用MTS法檢測細胞活性，發現光莖栓果菊醇提物的石油醚萃取部位在體外對乳腺癌MCF-7細胞、白血病HL-60細胞和結腸癌SW480細胞的增殖有抑制作用，抑制率分別為90.61%、91.36%、84.44%。目前，光莖栓果菊的化學成分、藥理作用研究等仍處于空白，栓果菊屬植物化學成分相關研究也未見報道。光莖栓果菊的藥效物質基礎不明確，不能指導其臨床的使用。為填補其研究空白，也為開發抗腫瘤的新藥物提供依據，本研究對光莖栓果菊醇提物的石油醚萃取部位進行甲酯化處理，采用GC-MS對其進行分析，為系統地研究光莖栓果菊化學成分提供參考。

1 儀器與材料

Agilent 6890A氣相色譜-5973N質譜聯用儀（美國Agilent 公司）；FA1004 N分析天平（上海精科，精度：0.1 mg）；石油醚（60～90℃，廣東光華科技股份有限公司，批號：20191214，分析純），正己烷（廣東光華科技股份有限公司，批號：20191010，分析純）；無水硫酸鈉（廣州化學試劑廠，批號：20180718，分析純）；光莖栓果菊購自南寧水街草藥市場，經廣西中醫藥研究院黃云峰副研究員鑒定為光莖栓果菊（Launaea acaulis）的全草。

2 方法

2.1 供試品制備

稱取光莖栓果菊全草10 kg，粉碎，用95%乙醇回流提取3 次，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，得總浸膏，加水混懸，用石油醚萃取，回收溶劑得石油醚萃取物。取石油醚萃取物1 g，置于50 mL具塞燒瓶中，加正己烷20 mL溶解，加1%硫醇甲醇溶液10 mL，搖勻，于70℃恒溫水浴1 h，加純凈水20 mL，振搖，靜置待分層清晰后取上清液，經無水硫酸鈉脫水，過濾，濾液作為供試品。

2.2 GC-MS分析條件

2.2.1 GC條件 RTX-5MS毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；升溫程序：初始溫度60℃，以5℃·min－1升溫至100℃，以10℃·min－1升溫至200℃，以5℃·min－1升溫至260℃保持10 min；載氣為He；進樣量1.0 μL；分流比為50∶1。

2.2.2 MS條件 電離方式EI，電離能量70 eV，進樣口溫度230℃，離子源溫度230℃，掃描質量范圍為50～1000 amu，掃描時間100 s，柱流量1.0 mL·min－1。

2.3 分析方法

取“2.1”項下供試品，采用GC-MS分析，所得的MS圖通過HPMSD化學工作站NIST98標準質譜數據庫檢索，分別對各色譜峰進行確認，并按峰面積歸一化法計算各化合物的百分含量。

3 結果與分析

按“2.2”項下條件對供試品進行GC-MS測定，得到光莖栓果菊醇提物的石油醚部位脂溶性成分的總離子流圖，見圖1（各峰號對應成分見表1）。

圖1 光莖栓果菊脂溶性成分總離子流圖Fig 1 Total ion flow chart of liposoluble components in Launaea acaulis

按峰面積歸一化法計算各化合物的百分含量，本實驗從光莖栓果菊石油醚部位鑒定出29個化合物，主要為有機酸類化合物，其中棕櫚酸占18.08%，亞麻酸占16.83%，亞油酸占15.22%，硬脂酸占12.90%，10-甲基十八烷酸占8.14%。這些成分均為首次從光莖栓果菊中鑒定出來。結果見表1。

表1 光莖栓果菊脂溶性成分GC-MS 分析結果Tab 1 GC-MS analysis of liposoluble components in Launaea acaulis

續表1

4 討論

近年來，中草藥抗腫瘤活性成分已成為研究熱點。本研究從光莖栓果菊抗腫瘤活性部位共鑒別出29 個成分，其中有機酸類化合物的含量較高，依次為棕櫚酸、亞麻酸、亞油酸、硬脂酸、10-甲基十八烷酸。亞油酸、亞麻酸為多不飽和脂肪酸，且為必需脂肪酸。有學者從體外細胞實驗角度探討多不飽和脂肪酸對結腸癌細胞LoVo和RKO的生長抑制、線粒體損傷、脂肪酸代謝等方面的影響，結果表明亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、γ-亞麻酸在濃度大于 120 μmol·L－1時均能顯著抑制LoVo和RKO細胞的生長，誘導細胞凋亡，但對正常細胞HUVEC影響較小[3]。而棕櫚酸可通過內質網應激途徑濃度和時間依賴性地降低成骨細胞增殖活性，增加細胞凋亡，增高細胞內質網應激相關蛋白和基因的表達[4-5]。因此，亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸可能為光莖栓果菊抗腫瘤活性成分。本研究結果可為廣西特色藥材光莖栓果菊的藥效物質基礎研究提供參考依據，促進該藥材資源的合理開發和利用。