IL-32表達(dá)與食管鱗癌放療后預(yù)后的關(guān)系

馬志宇，郭加友，董 振，郭嘉漪，程貝貝，馬建新

食管癌在中國的發(fā)病率居于世界前列[1]。其中食管鱗癌的新發(fā)病例數(shù)約占世界新發(fā)食管癌總數(shù)的53%[2]。目前放療是臨床上食管癌綜合治療的關(guān)鍵手段之一，主要包括術(shù)前放療、同步放化療，但是食管癌病人的5年存活率僅為15%～25%[3]。大量飲酒和吸煙及其協(xié)同作用是食管癌的主要危險(xiǎn)因素[1]。此外，腫瘤與炎癥之間存在一定聯(lián)系[4]。2005年，KIM等[5]首次正式報(bào)道了一種新的促炎癥因子-自然殺傷細(xì)胞轉(zhuǎn)錄物4的基因產(chǎn)物，并命名為白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-32。近年有研究[6-11]表明，IL-32表達(dá)的高低與腫瘤細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)移、侵襲存在一定關(guān)系，甚至抑制腫瘤生長，但這種關(guān)系在不同的腫瘤中存在差異，并且對(duì)預(yù)后也產(chǎn)生不同的影響。基于此，本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測95例食管鱗癌病人腫瘤組織，了解IL-32在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況，探討病人IL-32與放療預(yù)后關(guān)系。現(xiàn)作報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2014年1月至2016年1月連云港東方醫(yī)院及連云港市第二人民醫(yī)院收治的食管鱗癌病人95例。納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為食管鱗癌病人，行根治性放射治療，臨床病理信息完整。所有病人均行食管鏡活檢，經(jīng)病理診斷確診為鱗癌，并在放療前行胸部CT，腹部及鎖骨上彩超等基線檢查。其中男66例，女29例；年齡39～83歲；腫瘤位置：胸上段19例，胸中段42例，胸下段34例；根據(jù)UICC/AJCC第七版食管癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅱ期49例，Ⅲ期46例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性36例，陰性59例；中-高分化60例，低分化35例。其中行單純放射治療40例，行同步放化療55例(化療方案為以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療或多西他賽單藥化療)。

1.2 放療方法 所有病人均行6 mV高能X線放射治療。食管病灶區(qū)域放射治療為60～66 Gy，各段相應(yīng)淋巴結(jié)引流區(qū)域放射治療為50 Gy。單次劑量為2 Gy，每天1次，每周5次。危及器官控制劑量：肺V20≤30%，V30≤20%；心臟V40≤40%；脊髓最大劑量<45 Gy。

1.3 觀察指標(biāo) 采用免疫組織化學(xué)法檢測病人食管鱗癌組織中IL-32表達(dá)。兔抗人IL-32多克隆抗體購自美國Proteintech公司，免疫組織化學(xué)染色試劑盒購自武漢Servicebio公司。嚴(yán)格按照試劑說明完成實(shí)驗(yàn)。組織切片使用二甲苯、各濃度乙醇梯度脫蠟，使用檸檬酸鈉-EDTA抗原修復(fù)液修復(fù)。3%H2O2孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，BSA血清封閉30 min。加入稀釋的兔抗IL-32抗體孵育，4 ℃過夜，選擇相應(yīng)的二抗室溫孵育2 h，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封片，顯微鏡采集圖像并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為IL-32陽性細(xì)胞，400倍顯微鏡下觀察并對(duì)陽性細(xì)胞和所有細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，根據(jù)細(xì)胞染色程度和陽性細(xì)胞相對(duì)總細(xì)胞百分比，對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析。細(xì)胞染色程度：0分為無色或淡藍(lán)色無顆粒，1分為淺黃色顆粒，2分為較多棕黃色顆粒，3分為大量棕黃色或深棕色顆粒。每張切片陽性細(xì)胞占總細(xì)胞百分比：0分為<5%，1分為5%～<25%，2分為25%～<50%，3分為50%～<75%，4分為≥75%。兩項(xiàng)評(píng)分乘積<4分計(jì)為陰性，其余計(jì)為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)、Kaplan-Meier生存分析、log-rank檢驗(yàn)和Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型。

2 結(jié)果

2.1 IL-32高表達(dá)與低表達(dá)病人的相關(guān)特征比較 95例中IL-32低表達(dá)54例(56.84%)，高表達(dá)41例(43.16%)。高表達(dá)組與低表達(dá)組病人性別、年齡、腫瘤位置、是否合并化療差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而2組腫瘤分化程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見圖1、表1)。

表1 不同臨床病理特征病人的IL-32表達(dá)(n)

2.2 IL-32與預(yù)后影響因素分析 Kaplan-Meier生存分析顯示，IL-32高表達(dá)組與IL-32低表達(dá)組預(yù)后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見圖2)。Cox多因素分析顯示，合并化療和IL-32高表達(dá)是食管鱗癌放療病人預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)(見表2)。

3 討論

25%的上皮源性腫瘤由慢性感染或者慢性炎癥導(dǎo)致[12]。作為一種新的促炎癥因子，IL-32基因位于人類染色體16p13.3上。IL-32有9種可變剪接的亞型，分別為IL-32α、IL-32β、IL-32γ、IL-32δ、IL-32ε、IL-32ζ、IL-32η、IL-32θ、IL-32small。就分子量及對(duì)細(xì)胞作用而言，IL-32γ是最大最有效的亞型[13]。研究[14]表明，IL-32的結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)典型的α-螺旋，類似于黏附激酶的黏附靶區(qū)(FAT)，而這是整合素結(jié)合后的重要信號(hào)傳導(dǎo)介質(zhì)。所以因IL-32類似于FAT的結(jié)構(gòu)，其可能成為FAT活化的天然調(diào)節(jié)因子。

IL-32通過對(duì)許多癌癥細(xì)胞的代謝和調(diào)亡產(chǎn)生不同作用而影響腫瘤進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，IL-32高表達(dá)組與IL-32低表達(dá)組預(yù)后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-32高表達(dá)是食管鱗癌放療病人預(yù)后的獨(dú)立影響因素。提示IL-32高表達(dá)病人放療后預(yù)后優(yōu)于IL-32低表達(dá)者。而DONNEM等[8]在腎透明細(xì)胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-32過表達(dá)與高復(fù)發(fā)率呈正相關(guān)關(guān)系，與無病生存率和總生存率呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。不過有研究[15]發(fā)現(xiàn)，在人IL-32γ過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠模型中，IL-32γ會(huì)通過抑制持續(xù)激活的NF-κB和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)3來抑制體外和體內(nèi)黑素瘤和結(jié)腸癌腫瘤生長。STAT3是STAT蛋白家族的主要成員和重要的核轉(zhuǎn)錄因子。STAT3目前被認(rèn)為是增加放射敏感性的關(guān)鍵基因，抑制STAT3/HIF-1α/VEGF信號(hào)通路可以逆轉(zhuǎn)食管癌細(xì)胞的放射抵抗[16-17]。因此，有理由認(rèn)為高表達(dá)的IL-32可能通過抑制STAT3信號(hào)通路增強(qiáng)食管癌放療效果，繼而影響食管癌預(yù)后。同時(shí)本研究結(jié)果也顯示，合并化療是食管鱗癌放療病人預(yù)后的獨(dú)立影響因素。有研究[18]表明，不同亞型的急性白血病血清中IL-32表達(dá)程度不同。化療與IL-32亦可能發(fā)生協(xié)同作用，增加化療效果，延長病人總生存時(shí)間。

綜上，IL-32高表達(dá)是中期食管鱗癌放療后預(yù)后的獨(dú)立影響因素，IL-32可能作為一種新的治療靶點(diǎn)，為食管鱗癌的治療提供新的方法。但本研究屬于回顧性研究，且總樣本量較少，仍需要開展大樣本、多中心的前瞻性研究進(jìn)一步驗(yàn)證。未來還需進(jìn)一步闡明IL-32及各種亞型對(duì)食管鱗癌細(xì)胞放療作用的分子機(jī)制。