TH1/TH2/TH17細(xì)胞因子與造血干細(xì)胞移植術(shù)后甲狀腺功能的相關(guān)性研究*

馮 秋，夏 寧，梁瑜禎△

(1.四川省成都市第五人民醫(yī)院內(nèi)分泌科 610000；2.廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，南寧 530000)

造血干細(xì)胞移植術(shù)(HSCT)是目前治療惡性血液病、非惡性難治性血液病、遺傳性疾病、免疫系統(tǒng)疾病效果顯著的治療手段[1]。HSCT患者在術(shù)前接受大劑量的清髓性放化療，術(shù)后免疫抑制劑的使用及手術(shù)應(yīng)激常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子風(fēng)暴的發(fā)生，在術(shù)后發(fā)生眾多并發(fā)癥。然而，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)HSCT術(shù)后并發(fā)癥的研究都集中在移植物抗宿主疾病(GVHD)[2-6]。HSCT術(shù)后內(nèi)分泌系統(tǒng)的并發(fā)癥在近年也逐漸受到臨床醫(yī)師的重視，主要表現(xiàn)為甲狀腺功能異常、性腺功能障礙、生長(zhǎng)發(fā)育障礙、糖脂代謝紊亂[7-9]。

機(jī)體內(nèi)活化的T淋巴細(xì)胞分為T(mén)H1、TH2、TH17、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞4個(gè)大亞群[10]：(1)TH1細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-12、γ干擾素(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，介導(dǎo)機(jī)體的炎性反應(yīng)和組織損傷；(2)TH2細(xì)胞分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13，介導(dǎo)機(jī)體的免疫抑制；(3)TH17細(xì)胞分泌IL-17、IL-23，介導(dǎo)機(jī)體變應(yīng)反應(yīng)、抗感染、自身免疫；(4)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞則抑制抗原特異性免疫應(yīng)答。細(xì)胞因子是甲狀腺的生物調(diào)節(jié)因素，在甲狀腺的生長(zhǎng)及功能分化過(guò)程中有重要作用。普遍認(rèn)為，TH1細(xì)胞因子介導(dǎo)免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生，導(dǎo)致甲狀腺功能異常；但近年來(lái)報(bào)道，TH2、TH17細(xì)胞因子對(duì)甲狀腺的影響也逐漸增多。

目前很少有研究報(bào)道HSCT術(shù)后TH1/TH2/TH17細(xì)胞因子對(duì)甲狀腺功能的影響。本研究通過(guò)對(duì)HSCT術(shù)后存活1年以上的51例患者進(jìn)行橫斷面研究，探討其甲狀腺功能及TH1/TH2/TH17系細(xì)胞因子的變化，以及二者之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年1月至2016年4月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院復(fù)診的51例HSCT術(shù)后存活1年以上的患者為試驗(yàn)組，其中男29例，女22例，平均年齡(35.88±9.91)歲。術(shù)前相關(guān)疾病的診斷均經(jīng)血常規(guī)、骨髓穿刺活檢、基因?qū)W檢查明確，且術(shù)后均恢復(fù)造血重建，術(shù)前無(wú)甲狀腺相關(guān)疾病，甲狀腺功能均在正常范圍。根據(jù)相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)后有24例發(fā)生慢性移植物抗宿主疾病(cGVHD)。另選擇該院同期健康體檢者51例為對(duì)照組，其中男25例，女26例，平均年齡(34.74±6.74)歲。兩組性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

試驗(yàn)組排除標(biāo)準(zhǔn)：血液系統(tǒng)疾病二次復(fù)發(fā)，伴有急慢性感染，其他原發(fā)性自身免疫性疾病(如風(fēng)濕性疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡)，既往有甲狀腺疾病、妊娠及其他惡性腫瘤。

1.2 方法

1.2.1檢測(cè)指標(biāo)

對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行甲狀腺功能、甲狀腺抗體及TH1/TH2/TH17細(xì)胞因子檢測(cè)。

1.2.2儀器與試劑

采集研究者的臨床資料，如原發(fā)血液系統(tǒng)疾病種類(lèi)、術(shù)前清髓治療方案、存活時(shí)間、體格檢查等。空腹抽取患者靜脈血進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。其中甲狀腺功能[游離甲狀腺三碘原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)]及甲狀腺抗體均由全自動(dòng)免疫檢測(cè)儀測(cè)定。IL-23采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自中國(guó)聯(lián)科試劑公司。IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ采用流式液相多重蛋白定量技術(shù)測(cè)定(CBA)，試劑盒購(gòu)自美國(guó)BD公司(貨號(hào)560484)。

1.2.3CBA試驗(yàn)方法

依照CBA試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)已留樣的血清進(jìn)行稀釋?zhuān)尤階ssay Diluent稀釋液、混合細(xì)胞因子捕獲微球，孵育，加入50 μL 藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的細(xì)胞因子檢測(cè)抗體，調(diào)節(jié)流式細(xì)胞儀質(zhì)控，使用BD FACS Calibur流式儀檢測(cè)。

1.2.4ELISA方法

依照人血IL-23 ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行洗液稀釋?zhuān)瑱z測(cè)緩沖液，重溶，加入IL-23標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)抗體，封板震蕩、孵育，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，再次封板孵育，加入顯色底物TMB，加入終止液，使用酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值(A值)，回歸擬合生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，確定濃度值。在最高濃度點(diǎn)2 000 pg/mL時(shí)Recovery為110.3%。計(jì)算樣品濃度時(shí)乘以稀釋因子2。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 試驗(yàn)組的甲狀腺功能

試驗(yàn)組51例患者中有17例(33.3%)發(fā)生甲狀腺功能異常，分別為甲狀腺功能減低2例(11.8%)，亞臨床甲狀腺功能減低3例(17.6%)，低甲狀腺素血癥10例(58.8%)，甲狀腺功能亢進(jìn)2例(11.8%)。17例甲狀腺功能異常者中有8例(47.0%)甲狀腺抗體陽(yáng)性。

2.2 試驗(yàn)組和對(duì)照組檢測(cè)指標(biāo)比較

試驗(yàn)組FT4、IL-23水平低于對(duì)照組，TSH、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ水平高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組FT3水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)組和對(duì)照組檢測(cè)指標(biāo)比較

2.3 甲狀腺功能正常組和甲狀腺功能異常組檢測(cè)指標(biāo)比較

試驗(yàn)組根據(jù)甲狀腺功能檢測(cè)結(jié)果分為甲狀腺功能正常組和甲狀腺功能異常組。甲狀腺功能異常組FT4水平低于甲狀腺功能正常組，而TSH、IL-2、IL-6、IL-17水平、cGVHD發(fā)生率高于甲狀腺功能正常組(P<0.05)。兩組間FT3、IL-4、IL-10、IL-23、IFN-γ、TNF-α水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 甲狀腺功能正常組和甲狀腺功能異常組檢測(cè)指標(biāo)比較或n(%)]

2.4 甲狀腺抗體陽(yáng)性組和甲狀腺抗體陰性組檢測(cè)指標(biāo)比較

將甲狀腺功能異常組根據(jù)甲狀腺抗體結(jié)果，再分為抗體陽(yáng)性組和抗體陰性組。由表3可見(jiàn)，抗體陽(yáng)性組TSH、IL-6水平高于抗體陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而兩組FT3、FT4、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IL-23、IFN-γ、TNF-α水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表3 抗體陽(yáng)性組和抗體陰性組檢測(cè)指標(biāo)比較

2.5 TH1/TH2/TH17細(xì)胞因子與甲狀腺功能的相關(guān)性

由以上結(jié)果得知，HSCT術(shù)后甲狀腺功能、細(xì)胞因子均有部分異常，應(yīng)進(jìn)一步使用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析。由于抗體陰性者其抗體含量極低，并沒(méi)有具體數(shù)值，因此未對(duì)抗體進(jìn)行相關(guān)性分析。由表4所示，F(xiàn)T3與IL-6、IL-17有相關(guān)性(r=0.014、-0.011，P<0.05)；FT4與IL-2、IL-6有相關(guān)性(r=-0.127、0.047，P<0.05)；TSH與IL-17、TNF-α有相關(guān)性(r=-0.024、-1.391，P<0.05)。

表4 細(xì)胞因子與甲狀腺功能的相關(guān)性

2.6 logistic回歸分析

將試驗(yàn)組患者是否發(fā)生甲狀腺功能異常作為因變量，進(jìn)行多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示，術(shù)后發(fā)生cGVHD、IL-2是患者發(fā)生甲狀腺功能異常的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表5。

表5 logistic回歸分析

3 討 論

HSCT術(shù)后容易發(fā)生甲狀腺功能異常，本研究中51例研究對(duì)象中有1/3的患者發(fā)生甲狀腺功能異常，這與眾多的研究報(bào)告一致。甲狀腺激素決定著機(jī)體的基礎(chǔ)代謝情況，有研究表明，HSCT患者體內(nèi)甲狀腺激素水平可以預(yù)測(cè)患者的預(yù)后，因此，及早發(fā)現(xiàn)甲狀腺功能的變化對(duì)提高患者術(shù)后生存質(zhì)量較為重要。

由于HSCT術(shù)前患者會(huì)接受大劑量的放化療清髓，產(chǎn)生細(xì)胞因子風(fēng)暴，不可避免地會(huì)導(dǎo)致患者術(shù)后免疫功能及內(nèi)分泌紊亂。原因是：大劑量的放化療會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)大量炎性細(xì)胞、趨化因子、促炎性細(xì)胞因子、粗纖維化細(xì)胞因子在局部器官的堆積，最終導(dǎo)致組織細(xì)胞的損傷。為避免手術(shù)導(dǎo)致的急性應(yīng)激反應(yīng)，如感染、骨髓抑制、術(shù)后造血功能再生等導(dǎo)致的免疫紊亂，本研究選取HSCT術(shù)后存活1年且近期無(wú)應(yīng)激事件發(fā)生的患者作為研究對(duì)象，并設(shè)為試驗(yàn)組，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ水平均高于對(duì)照組，推測(cè)HSCT術(shù)后患者的Th系細(xì)胞功能與健康者不同。

體內(nèi)的Th系細(xì)胞因子主要參與調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答、免疫細(xì)胞分化發(fā)育和介導(dǎo)炎性反應(yīng)等功能，同時(shí)也是重要的甲狀腺生物調(diào)解素，介導(dǎo)甲狀腺組織細(xì)胞的分化、發(fā)育、激素分泌[11-12]。根據(jù)甲狀腺功能進(jìn)行亞組分析發(fā)現(xiàn)，甲狀腺功能異常者的IL-2、IL-6、IL-17水平高于甲狀腺功能正常者，同時(shí)發(fā)現(xiàn)FT3與IL-6、IL-17有相關(guān)性(r=0.014、-0.011,P<0.05)，F(xiàn)T4與IL-2、IL-6有相關(guān)性(r=-0.127、0.047,P<0.05)，TSH與IL-17、TNF-α有相關(guān)性(r=-0.024、-1.391,P<0.05)。雖然TSH與IL-23的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是其P值為0.061，處于臨界值，可能與研究對(duì)象較少有關(guān)，擴(kuò)大樣本量后該相關(guān)性可能會(huì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，IL-2是HSCT術(shù)后甲狀腺功能異常的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=1.12，95%CI：1.01～1.25，P<0.05)。IL-2介導(dǎo)甲狀腺疾病的機(jī)制可能為：IL-2可以激活甲狀腺組織內(nèi)巨噬細(xì)胞，上調(diào)甲狀腺濾泡細(xì)胞上主要組織相容性復(fù)合體的殺傷作用，加劇自身甲狀腺上皮細(xì)胞(TEC)的抗原提呈作用，最終導(dǎo)致甲狀腺組織損傷。增多的IL-2還可以通過(guò)刺激產(chǎn)生更多的TNF-α、IFN-γ來(lái)影響甲狀腺的生長(zhǎng)分化，降低腺體對(duì)TSH的反應(yīng)，最終使甲狀腺功能發(fā)生異常[13-14]。IL-6、IFN-γ能夠抑制TSH對(duì)TEC的刺激，抑制大鼠甲狀腺細(xì)胞鈉-碘轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)及減少碘的攝取[15]。

本研究中cGVHD的發(fā)生率較高。而cGVHD可以通過(guò)誘導(dǎo)體內(nèi)細(xì)胞因子異常分泌，以及治療過(guò)程中糖皮質(zhì)激素的使用直接或間接影響甲狀腺功能[16-18]。

本研究中HSCT術(shù)后已有患者發(fā)生甲狀腺異常，主要為甲狀腺功能低下，也易發(fā)生TH1/TH2/TH17細(xì)胞因子紊亂。體內(nèi)紊亂的細(xì)胞因子直接或間接導(dǎo)致cGVHD的發(fā)生，最終也可影響患者的甲狀腺功能。

綜上所述，臨床醫(yī)生應(yīng)重視HSCT術(shù)后檢測(cè)患者甲狀腺功能，在術(shù)后1周、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月進(jìn)行甲狀腺功能測(cè)定，盡早發(fā)現(xiàn)甲狀腺疾病，必要時(shí)進(jìn)行臨床干預(yù)。有條件者可進(jìn)一步檢測(cè)Th系細(xì)胞因子，從根本上解決可能導(dǎo)致甲狀腺功能異常的原因，從而提高患者術(shù)后的生存率及生存質(zhì)量。