無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測在篩查胎兒染色體非整倍體中的應(yīng)用價(jià)值

黃淑瑜，眭建忠，嚴(yán)金梅，歐水英

（佛山市第一人民醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

0 引言

出生缺陷指的是新生兒在出生的時(shí)候，身體伴有某種結(jié)構(gòu)缺陷或是功能缺陷，這種缺陷可以發(fā)生在全身任何部位；出生缺陷可導(dǎo)致新生兒的肢體、智力、發(fā)育等出現(xiàn)不同程度障礙，進(jìn)而對(duì)新生兒的健康成長、生存質(zhì)量造成嚴(yán)重影響，嚴(yán)重可直接導(dǎo)致新生兒在出生后短期內(nèi)死亡[1]。其中引起新生兒出生缺陷最為常見的因素之一就是染色體異常[2]，由于臨床目前無治愈染色體異常的方法，所以孕婦產(chǎn)前篩查、產(chǎn)前診斷對(duì)降低出生缺陷的發(fā)病率、提高出生質(zhì)量等具有極其重要的意義。因此，本文主要將進(jìn)行無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測篩查染色體非整倍體的11472例孕婦作為研究對(duì)象，并對(duì)其應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探析，為臨床提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究一共納入11472例研究對(duì)象，其中高風(fēng)險(xiǎn)因素者有123例（包含氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)、高齡孕婦、既往不良孕產(chǎn)史、超聲軟指標(biāo)者），所有高風(fēng)險(xiǎn)因素者均2017年02月至2020年12月在佛山市第一人民醫(yī)院進(jìn)行胎兒無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測的孕婦。年齡為21～47歲，平均（29.35±1.87）歲；孕周為12～24周，平均（16.82±1.24）周。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均對(duì)本研究知情，并簽訂同意書；②均為單胎妊娠者；③本次研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近期內(nèi)接受過異體輸血、細(xì)胞治療與移植手術(shù)等者；②伴有血液疾病者③存在溝通障礙者；④存在認(rèn)知障礙者；⑤伴有精神疾病者；⑥臨床資料不完整者；⑦中途退出本次研究者。

1.2 方法

孕婦外周血胎兒游離DNA 無創(chuàng)檢測：

（1）抽取孕婦12～24妊娠時(shí)的外周血液（10mL）作為標(biāo)本，進(jìn)行離心處理后，分離血漿，然后將血漿中游離的DNA 提取出來，PCR 擴(kuò)增。

（2）應(yīng)用第2代高通量大規(guī)模平行測序，且通過生物信息分析，可計(jì)算出胎兒患染色體非整倍體的發(fā)生率，包含唐氏綜合征（①21-三體綜合征；②18-三體綜合征、③13-三體綜合征）與性染色體異常。

檢測結(jié)果正常判斷標(biāo)準(zhǔn)：-3.0～+3.0者為正常；待胎兒出生之后，對(duì)其進(jìn)行電話隨訪；對(duì)于檢測結(jié)果異常者，需再次進(jìn)行羊水穿刺診斷。

羊水染色體核型分析：①對(duì)無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測結(jié)果異常者，需在產(chǎn)婦妊娠18～22周時(shí)行超聲引導(dǎo)下羊膜腔穿刺術(shù)，抽取羊水（20mL）；②將抽取的羊水送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)，選擇合適的時(shí)間收獲細(xì)胞，經(jīng)過滴片后G 顯代分析，每例分析20個(gè)分裂相。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)無創(chuàng)DNA 產(chǎn)前檢測異常情況，并對(duì)檢測結(jié)果異常者進(jìn)行羊水染色體核型分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

研究所得到的數(shù)據(jù)均錄入至Excel 2010中予以校對(duì)，采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行處理。百分比（%）表示計(jì)數(shù)資料，計(jì)數(shù)資料用卡方（χ2）檢驗(yàn)。P評(píng)定檢驗(yàn)結(jié)果，P ＞0.05提示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P ＜0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測異常結(jié)果

表1結(jié)果顯示，123例高危因素孕婦經(jīng)無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測后，染色體非整倍體疾病高風(fēng)險(xiǎn)者有43例（34.96%）。

表1 無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測異常結(jié)果[n（%）]

2.2 無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果與羊水染色體核型結(jié)果比較

表2結(jié)果顯示，43例染色體非整倍體疾病孕婦，經(jīng)無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測中，21-三體綜合征18例、18-三體綜合征11例、13-三體綜合征9例、性染色體異常5例，與羊水產(chǎn)前診斷確診率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由此表明，無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測在診斷染色體整倍體中具有較高的準(zhǔn)確性。

表2 無產(chǎn)前DNA檢測與羊水體核型結(jié)果比較[n（%）]

3 討論

出生缺陷在我國具有較高的發(fā)病率，指的是新生兒在出生之前身體結(jié)構(gòu)與功能、代謝就已經(jīng)出現(xiàn)異常；包含：①先天性疾病；②遺傳性代謝性疾病；③染色體異常等[3]。有資料顯示[4]，我國每年大約有1600萬左右的新生兒出生，其中因染色體異常導(dǎo)致的出生缺陷大約占比0.6%左右。目前，我國暫時(shí)還未有治愈染色體非整倍體疾病的方法，主要以控制出生缺陷與預(yù)防出生缺陷為主，以此來提高人口素質(zhì)，降低出生缺陷率。現(xiàn)階段，孕婦在進(jìn)行產(chǎn)前篩查的時(shí)候，主要采用血清學(xué)生化篩查法，孕中期階段進(jìn)行血清學(xué)三聯(lián)篩查法檢出唐氏綜合征、部分其他非整倍體染色體異常的幾率大約在60%～70%左右；由于該檢測方法的靈敏性以及準(zhǔn)確性不高，所以容易出現(xiàn)假陽性率。介入性產(chǎn)前診斷技術(shù)作為臨床以往診斷染色體非整倍體疾病的“金標(biāo)準(zhǔn)”；它屬于一種有創(chuàng)方式，不僅會(huì)對(duì)孕婦造成一定的創(chuàng)傷，同時(shí)還可能會(huì)增大孕婦發(fā)生宮內(nèi)感染、早產(chǎn)、流產(chǎn)等風(fēng)險(xiǎn)，從而增大孕婦的心理壓力，導(dǎo)致其應(yīng)用受到限制。因此，臨床還需積極探尋一種準(zhǔn)確率高、安全性高的方法進(jìn)行產(chǎn)前胎兒染色體非整倍體檢測。

本次研究中，11472例孕婦中有123例為高危險(xiǎn)因素孕婦，經(jīng)無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 篩查染色體非整倍體后，結(jié)果顯示：有43例（占比34.96%）確診為染色體非整倍體疾病，經(jīng)羊水產(chǎn)前診斷確診43例，染色體異常見檢出率為100.00%；且無創(chuàng)產(chǎn)前DNA篩查中21-三體綜合征18例、18-三體綜合征11例、13-三體綜合征9例、性染色體異常5例，與羊水產(chǎn)前診斷確診率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測技術(shù)是從母體外周血中胎兒游離DNA 片段發(fā)現(xiàn)而來的。當(dāng)胎兒染色體出現(xiàn)異常后，其母體中的DNA 含量也會(huì)出現(xiàn)微量的變化，從而通過深度測序與生物信息分析便可以檢測到該變化，進(jìn)而為項(xiàng)目提供可靠的理論依據(jù)[5]。對(duì)于孕婦來講，無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測只是一項(xiàng)簡單的血清學(xué)檢測，只需要抽取孕婦的靜脈血5mL 便可進(jìn)行胎兒染色體非整倍體篩查，它除了能避免能有創(chuàng)檢查為孕婦造成的傷害，還能降低孕婦發(fā)生宮內(nèi)感染、流產(chǎn)等風(fēng)險(xiǎn)。目前，無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測適用于以下幾種情況：①孕婦的年齡不超過35歲；②經(jīng)超聲檢查，結(jié)果顯示胎兒非整倍體發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加；③孕婦以往妊娠中曾出現(xiàn)過三體綜合征胎兒的情況；④經(jīng)早期超聲、血清學(xué)或是聯(lián)合篩查后，結(jié)果顯示為高危因素孕婦；⑤家族中有13號(hào)、21號(hào)染色體平衡攜帶者。無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測作為一種產(chǎn)前篩查方式，應(yīng)在充分進(jìn)行產(chǎn)前咨詢與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估后，再進(jìn)行檢查；最佳檢測時(shí)間建議在妊娠12～24周時(shí)無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測，因此需要在孕早期階段確定妊娠周數(shù)，并排除多胎妊娠者。值得注意的是，無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測方式，主要集中于高危因素且單胎的妊娠孕婦中；目前還缺乏與低危因素、多胎妊娠孕婦的相關(guān)研究。

綜上所述，采用無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測方式篩查胎兒染色體非整倍體疾病，準(zhǔn)確率比較高，可提高新生兒的出生質(zhì)量，同時(shí)該方式還具有檢測方法便捷、安全、快速等優(yōu)點(diǎn)，可將其作為產(chǎn)前篩查染色體非整倍體疾病的首選方式。