HDAC2轉染對骨髓干細胞成骨細胞分化的影響△

李 曄，孫仁義，呂 明，王鵬云

（淄博市中心醫院創傷骨科，山東 淄博 255036）

人骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是組織工程領域重要的種子細胞之一。目前，BMSCs向成骨細胞誘導技術多采用三維結構為細胞分化創造適宜的微環境，但存在誘導周期長、誘導后細胞性質不均一等弊端［1］。因此，探討BMSCs成骨分化及調控機制有重要意義。BMSCs向成骨分化受多種基因調控。表觀遺傳學研究發現，組蛋白修飾、DNA甲基化、Hedgehog信號通路激活等過程與多能干細胞向成骨分化關系密切［2］。近年來研究表明，組蛋白乙酰化可促進BMSCs向成骨分化，組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制劑可通過抑制HDAC2參與調控骨髓干細胞向成骨分化過程［3，4］。另研究表明，Hedgehog信號通路與骨形成關系密切，該信號通路的激活可促進BMSCs向成骨分化［5］。目前，關于調控HDAC2對BMSCs向成骨分化影響的報道尚少，為此，本研究通過體外分離大鼠BMSCs，并應用RNA干擾技術抑制HDAC2基因表達，探討其是否通過Hedgehog信號通路參與調控BMSCs向成骨細胞分化過程，為骨組織缺損體內修復提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康SPF級雄性Wistar大鼠5只，4周齡，體質量90～110 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號SCXK（京）2017-0014。

1.2 大鼠BMSCs分離培養及鑒定

脫頸處死大鼠，取股骨、脛骨，DMEM-L完全培養基反復沖洗骨髓腔獲得骨髓腔細胞，37℃、5% CO2、飽和濕度下培養5 d，更換培養基，去除未貼壁細胞，每3 d換液1次，收集傳至第3代細胞進行流式細胞術鑒定免疫表型，取符合BMSCs生物學特征的細胞進行后續實驗。

1.3 細胞分組及轉染處理

取第……