趨化因子12對足月妊娠急性胎兒窘迫的預測價值

霍春霞，謝 玲，趙得雄

（青海紅十字醫院產科，西寧810000）

胎兒窘迫（fetal distress，FD）是指多種原因造成的胎兒在子宮內急性或慢性缺氧的綜合癥狀。研究顯示，FD可影響患兒智力發育，嚴重者將威脅胎兒的生命安全[1-2]。因此，對FD作出早期診斷并采取及時有效的干預措施是管理FD最有效的手段。趨化因子12（chemokine 12，CXCL12）是趨化因子家族中的一員。據報道[3-5]，缺氧是CXCL12表達上調的驅動因素，其表達水平在FD新生兒腦損傷中具有診斷價值。然而，CXCL12在母體和胎盤中的表達與FD的發生是否存在潛在聯系以及母體外周中CXCL12的表達水平對FD的發生是否具有預測價值仍是未知的。本研究將通過測定胎盤組織、臍血、母血中CXCL12的表達以及臍血各項血氣參數，探討其與急性FD的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2017年5月至2019年5月在青海紅十字醫院收治的孕婦共148例。其中臨產后診斷為FD的產婦共74例，歸類為FD組。選取同期74例正常足月產婦作為對照組。急性FD診斷標準包括胎心基線改變至＞160次/min或＜110次/min持續10 min以上；胎心監護提示胎心變異小，重度變異減速或頻發晚期減速；胎動減少或消失；胎兒生物物理評分≤4分[6]。

1.2 納入與排除標準

納入標準：產婦年齡在24歲至28歲；孕周37周至42周；單胎妊娠且胎位為頭位置；產程發動后進入該院分娩中心待產，即產程進入潛伏期。排除標準：產婦診斷為妊娠期高血壓疾病、妊娠期糖尿病、HIV及其他病毒或細菌感染、胎兒畸形、先天性心臟病。研究通過醫學倫理委員會批準，并獲取孕婦或其近親屬知情同意。

1.3 樣本采集

分娩前抽取孕婦外周靜脈血4 mL（順產產婦在產程發動后立即取血，剖宮產產婦在術前6～12 h內取血），離心（40℃，3500 r·min-1，10 min），取上清液-80℃低溫冰箱保存；胎兒娩出后1～3 min使用止血鉗夾畢臍帶，抽取臍動脈血2 mL，離心后凍存待檢測。臍動脈血血氣分析：在胎兒娩出后尚未建立呼吸前，延遲結扎臍帶，用肝素化的1 mL注射器抽臍動脈血0.5~1 mL，使用自動血氣分析系統進行血氣分析，包括血樣的pH值、動脈血二氧化碳分壓（PaCO2）、動脈血氧分壓（PaO2）、剩余堿等參數。胎盤組織置于福爾馬林中固定，脫水、石蠟包埋后制作切片備用。

1.4 主要試劑盒、儀器

酶聯免疫吸附檢測試劑盒組（武漢華美生物科技，catalog number：CSB-E04 722 h）；anti-CXCL12（Proteintech，catalog number：17402-1-AP）。自動血氣分析系統（GEM Premier 3500）；常規低速離心機（Eppendorf）；Synergy2多功能酶標儀（Biotek）等。

1.5 方法

1）Apgar評分：新生兒出生后1 min，根據新生兒的皮膚顏色、心搏脈率、呼吸、肌張力及運動、反射五項體征進行Apgar評分，滿分10分；2）免疫組化染色：胎盤組織石蠟切片經脫蠟后行EDTA抗原修復；加入3% H2O2室溫靜置15 min；BSA封閉30 min；傾去封閉液后加入CXCL12抗體（1∶200），4℃孵育過夜；加入對應二抗室溫孵育20 min；顯微鏡下觀察DAB顯色情況；蘇木精復染；經分化、脫水、透明后封片；3）免疫熒光染色：胎膜組織切片脫蠟后進行抗原修復；BSA封閉后加入CXCL12抗體（1∶100），4℃孵育過夜；孵育Alexa Fluor 488 goat熒光二抗，室溫孵育2 h；DAPI標記細胞核；封片后使用熒光顯微鏡（Olympus）觀察各組胎盤組織中CXCL12的表達和分布情況；4）酶聯免疫吸附試驗：ELISA試劑盒檢測血清中CXCL12的表達水平，操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.6 統計學方法

數據采用SPSS 16.0軟件進行統計學分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。CXCL12水平與胎兒臍動脈血pH值等指標的關系采用Pearson相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料

兩組新生兒在體質量及性別方面差異均無統計學意義（P均＞0.05），而FD組剖宮產所占比例較對照組高（P＜0.05）。見表1。

表1 FD組與對照組一般資料比較

2.2 CXCL12在FD母血、臍帶血及胎盤組織中表達升高

免疫組化及免疫熒光染色結果顯示，FD組胎膜組織中CXCL12蛋白的表達量高于對照組胎盤組織（圖1）。與對照組相比，母血和臍帶血中CXCL12的表達量均升高（P均＜0.05）。見表2。

圖1 CXCL12在對照組及FD組胎盤中的表達

表2 母血、臍血CXCL12水平及新生兒血氣分析值在FD組與對照組中的比較（±s）

表2 母血、臍血CXCL12水平及新生兒血氣分析值在FD組與對照組中的比較（±s）

指標 對照組（n=74） FD組（n=74） t值 P值母血CXCL12/（ng·mL-1） 33.38±10.03 69.81±12.63 5.486 ＜0.001臍血CXCL12/（ng·mL-1） 3.78±1.08 17.97±2.10 13.580 ＜0.001 pH值 7.28±0.05 7.19±0.04 10.66 ＜0.001 PaCO2/mmHg 51.83±1.93 62.19±2.74 7.425 ＜0.001 PaO2/mmHg 17.18±0.72 15.46±0.57 6.715 ＜0.001堿剩余/（mmol·L-1） -4.04±0.32 -6.50±0.24 13.891 ＜0.001 Apgar評分 9.12±0.91 8.46±0.83 4.793 0.0090

2.3 兩組新生兒臍動脈血氣分析值及Apgar評分的比較

與對照組新生兒臍動脈血的各項血氣參數相比，FD組臍動脈血的pH值和PaO2均較低（P均＜0.05）；堿剩余負值及PCO2均較高（P均＜0.05）。FD組Apgar評分7分以下者（6例）多于對照組（0例），且FD組Apgar評分均值低于對照組（P＜0.05）。見表2。

2.4 急性FD母血及臍血CXCL12水平與新生兒血氣參數的相關性

經Pearson相關性檢驗，急性FD臍血中CXCL12與pH值、PaO2、堿剩余均呈負相關（P均＜0.05），與PaCO2呈正相關（P＜0.05）；急性FD母血CXCL12與pH值、堿剩余均呈負相關（P均＜0.05），與PaCO2呈正相關（P＜0.05），與PaO2無相關性（P＞0.05）。見表3。

表3 急性FD組母血、臍血CXCL12水平與新生兒血氣分析相關性

3 討論

FD是產科的常見疾病，我國每年約有30萬例新生兒因窒息而致殘[7]。及時地診斷FD是臨床上有效應對和管理FD的關鍵。

臍血血氣分析已被國際圍生醫學界推薦為評價胎兒宮內氧合情況及酸堿平衡狀況最客觀可靠的指標[8]。楊喜惠[9]的研究結果顯示聯合臍血血氣分析與胎心監護技術對FD的診斷具有重要意義，有利于提高診斷準確率并進一步減輕胎兒神經系統后遺癥、降低圍產兒致殘率及病死率等。通過臍血血氣分析結果結合產前胎心監護、羊水胎糞污染程度、新生兒Apgar評分等方法，目前臨床已不難實現對FD的準確診斷。然而，包括臍血血氣分析在內的檢查結果大都在胎兒分娩后才能獲取，不具備反映分娩前胎兒缺氧情況和指導娩出前FD的預防和管理策略的能力。因此，探索具有高度敏感性和特異性的，能夠精準地預測FD發生的新型實驗室檢查方法是當前婦產科亟待解決的問題。

近年來，大量研究者致力于尋找用于預測急性FD的生物標志物并取得一定的進展。張婷婷等[10]發現激活素A在FD的母血和臍帶血中的表達顯著升高，對FD早期的診斷具有指導意義。除此之外，研究還顯示血清β-人絨毛膜促性腺激素（β-human chorionic gonadotropin，β-HCG）、CRP、氧自由基及缺氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor，HIF-1α）等在母血或臍帶血中的表達水平與FD均存在密切的聯系[11-13]。CXCL12是一類由細胞分泌的小細胞因子或信號蛋白，其表達水平與胎盤的形成和胎盤-胎兒血管交通的建立密切相關。本研究中，CXCL12在FD組胎盤組織中表達顯著升高。同時，FD組母血及臍帶血中CXCL12的表達量也顯著高于健康的對照組。該結果提示CXCL12與FD的發生存在密切聯系，母血中CXCL12的表達是潛在的急性FD的診斷標記物。此外，本文還發現CXCL12與臍帶血的血氣參數存在相關性，臍血中CXCL12的表達與PaCO2呈正相關。有研究顯示，CXCL12具有依賴受體的糖代謝調節活性，并且缺氧是激活CXCL12轉錄翻譯的重要因素[14]。而FD時，胎兒-胎盤血流灌注不足將導致胎兒各組織器官嚴重缺氧。因此，本文推測缺氧環境下糖酵解增強等代謝改變是CXCL12在胎盤、母血和臍帶血中表達上調的可能機制。

綜上所述，CXCL12在FD母體胎盤、外周血及臍帶血中的表達被顯著上調。母體外周血中CXCL12的表達水平具備預測急性FD診斷潛力和應用前景。