蘭州市女性人乳頭瘤病毒感染狀況和基因型分布*

郭雅瓊，劉科鵬，趙 彬，張 笠，成 慧，劉 媛△

1.西北民族大學醫學檢驗技術系，甘肅蘭州 730000；2.西北民族大學附屬醫院檢驗科，甘肅蘭州 730000；3.蘭州大學第一醫院生殖中心，甘肅蘭州 730000

人乳頭瘤病毒(HPV)可引起人黏膜鱗狀上皮改變和皮膚疾病。根據HPV的致癌性，可分為低危型HPV(LR-HPV)和高危型HPV(HR-HPV)[1]。持續性HR-HPV感染是宮頸癌發生的主要高危因素[2]。目前的疫苗并沒有對所有HR-HPV基因型進行免疫[3]，因此，早期發現HPV感染并鑒別其基因型對宮頸癌的及時防治具有重要臨床意義。目前許多國家已經報告了HPV感染的患病率和基因型地理區域分布，結果差異很大[4]。我國不同地區HPV感染的患病率和基因型分布也各不相同，HPV在華中地區[5]以及東南沿海地區[6]的感染率高于華北[7]和西部地區[8]，同時，HPV在經濟發達城市的感染率高于經濟欠發達的中小城市[9]。目前關于西北地區蘭州市HPV感染流行的報道較少，因此，本課題組通過這項回顧性橫斷面研究，分析蘭州市女性HPV感染狀況，從而為改進HPV防治策略和疫苗開發提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1一般資料 以2018年1月至2019年12月于西北民族大學附屬醫院和蘭州大學第一醫院體檢中心及婦產科門診就診的女性為研究對象。納入標準：既往無宮頸細胞學異常病史、手術史，近1周內無性生活史和陰道用藥史的女性，在月經干凈后1周內進行檢查。排除重復就醫(具有多次HPV基因分型結果)和檢測結果記錄不明的女性,最終符合納入標準的女性受試者21 918例，年齡16～83歲，平均(38.5±19.4)歲。按照年齡段將21 918例受試者分為5組，≤25歲組(3 775例)，>25～35歲組(3 520例)，>35～45歲組(5 141例)，>45～55歲組(9 095例)和>55歲組(387例)。本研究經西北民族大學附屬醫院和蘭州大學第一醫院倫理委員會批準。

1.2儀器和試劑 熒光定量PCR擴增儀ABI7500來自美國應用生物系統公司，分子雜交儀FYY-3來自江蘇興化分析儀器廠，HPV基因分型試劑盒購自亞能生物技術有限公司。

1.3方法

1.3.1標本采集和保存 受試者取截石位，無菌棉簽擦拭宮頸分泌物，用專用宮頸采樣拭子于宮頸口旋轉1周，采集宮頸脫落細胞于采集器中，密封保存送檢。

1.3.2檢測方法 HPV基因分型檢測采用PCR-反向斑點雜交法，可檢測23種基因型別，包括17種HR-HPV(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82)及6種LR-HPV(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV81、HPV83)。實驗嚴格按照試劑盒說明書進行操作，即標本核酸提取→加樣→PCR擴增→反向斑點雜交→數據分析→結果審核→報告結果。實驗全過程均在質控范圍內。

1.4統計學處理 應用SPSS22.0統計軟件和Excel2010進行數據匯總與統計學分析。計數資料以頻數、率表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV感染情況 21 918例受試者中，共檢出HPV感染者4 524例，總感染率為20.64%。感染類型以單一HPV感染為主，占75.04%(3 395/4 524)，其中HR-HPV感染比例最高，為66.03%(2 987/4 524)，LR-HPV感染為9.02%(408/4 524)；多重HPV感染相對較少，占24.96%(1 129/4 524)，其中以雙重HPV感染比例最高，為76.44%(863/1 129)，且以多重HR-HPV感染比例最高，為57.84%(653/1 129)。見表1和2。

表1 蘭州地區女性HPV感染情況(%)

表2 蘭州地區女性HR-HPV、LR-HPV感染情況(%)

2.2HPV基因分型檢測情況 在4 524例HPV感染者中可檢測到21種HPV基因型，其中HR-HPV陽性率前6種基因型分別為HPV16(14.04%)、HPV52(13.06%)、HPV58(12.58%)、HPV68(9.20%)、HPV53(8.22%)和HPV56(8.22%)；LR-HPV感染率最高的為HPV42(10.17%)。見表3。

表3 HPV基因分型檢測情況(%)

續表3 HPV基因分型檢測情況(%)

2.3不同年齡組HPV感染類型分布情況 5個年齡組中，以>55歲組感染率最高(29.46%)，其次為≤25歲組(25.75%)，>25～35歲、>35～45歲和>45～55歲3個年齡組感染率相對較低，依次為13.58%、20.02%和21.23%，HPV感染率整體呈現“U”型分布，不同年齡組感染率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。分析比較各年齡組中不同HPV感染類型的感染率發現，各年齡組中單一HPV感染的比例均為最高，且以單一HR-HPV感染為主；多重HPV感染率相對較低，主要以多重HR-HPV感染為主。各組間單一HPV感染率、單一LR-HPV感染率、單一HR-HPV感染率、多重HPV感染率、多重HR-HPV感染率、多重混合型感染率比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同年齡組HPV感染類型分布情況比較[n(%)]

3 討 論

宮頸癌是全球婦女中最常見的婦科惡性腫瘤之一，由多種因素共同作用所致。HPV是一種嗜上皮性DNA病毒，屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，能引起人體皮膚黏膜鱗狀上皮增殖。在目前已知的HPV基因亞型中，LR-HPV一般不誘發癌變，HR-HPV感染宿主后很容易發生突變而發展為癌，HR-HPV感染是宮頸癌的主要危險因素[10]。因此，早期發現HPV感染，對于預防宮頸癌的發生、發展顯得尤為重要。

本研究通過PCR-反向斑點雜交技術對入選的21 918例女性宮頸脫落細胞進行HPV檢測發現，蘭州市女性HPV總感染率達到20.64%，高于新疆(14.0%)、陽曲(8.9%)、佛山(13.5%)等地區的HPV感染率[11-13]，但低于華中地區，如長沙(26.5%)[6]、重慶(26.2%)[14]，提示HPV在中國不同地區其感染率不同。本研究顯示，所有HPV感染者中以單一HPV感染率最高，為15.49%(3 395/21 918)，與相關文獻報道一致[15]。說明由于不同地區經濟、文化等多因素差異的影響，HPV感染狀況存在一定的地域差異，但基本以單一HPV感染為主。同時，超過80%的單一HPV感染者是HR-HPV感染，這也與先前的多項研究一致[16-17]。這些結果表明，HR-HPV感染的篩查和控制是我國宮頸癌防治面臨的嚴峻挑戰。

本研究中HPV多重感染率為5.15%。目前關于多重HPV感染是否能夠促進宮頸病變的發生、發展，觀點尚不一致。有文獻報道，多重HPV感染會增加HPV感染的持續時間、宮頸癌及癌前病變的患病風險[18]；另有文獻報道，與單一HPV16感染相比，HPV16合并其他亞型多重HPV感染的女性其患宮頸癌的風險并沒有增加[19]。因此，有關多重HPV感染對女性宮頸癌及癌前病變的作用有待于進一步研究證實。

本研究中共檢出21種HPV基因型別，HR-HPV中危害性最大的HPV16陽性率最高，這與先前文獻報道一致[20]，同時還發現HPV52和HPV58也是本地區常見的HR-HPV感染基因型，而LR-HPV則以HPV42最為常見。目前在我國應用于臨床的預防性二價疫苗(HPV16、HPV18)和四價疫苗(HPV16、HPV18、HPV6、HPV11)均未涵蓋HPV52、HPV58，而預防性九價疫苗(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52和HPV58)雖涵蓋了本地區感染率較高的基因型別，但由于該疫苗接種的最佳年齡為16～26歲，且以無性生活者為宜，因此不完全適用于蘭州地區女性。本研究通過對蘭州地區女性HPV感染基因型的分布特點進行研究發現，除HPV16外，蘭州地區還應重點預防HPV52和HPV58兩種亞型的感染，同時，通過本研究為蘭州地區疫苗接種和研發提供更全面的流行病學資料。本研究中感染率較高的3種HR-HPV與國內其他地區基本相同，但陽性率不同。說明HPV基因型別在各地區的感染率具有地域差異。這種差異可能與本地區的地理位置、自然條件、居民生活習慣及其就醫觀念有關。

通過對本地區不同年齡女性HPV感染情況的分析發現，不同年齡組間HPV感染率差異有統計學意義(P<0.05)，且存在2個感染高峰，>55歲組感染率最高(29.46%)，其次為≤25歲組(25.75%)，>25～35歲組最低(13.58%)；>35～45歲組、>45～55歲和>55歲組3組HPV感染率為20.02%、21.23%和29.46%，呈現隨年齡增長感染率逐漸增加的趨勢。HPV感染率整體呈現“U”型分布，與國外有關報道類似[21]。≤25歲組感染率高可能與該年齡段女性性生活活躍、生殖道尚未完全發育成熟等有關，但因該年齡組女性自身免疫力強，故少有造成癌變，多為一過性感染，大多數會在1～2年內自愈[22]，因此，對該年齡段女性的性教育、HPV感染知識普及和HPV疫苗接種等顯得尤為重要。>55歲組感染率最高，可能由于該年齡段女性機體免疫力和激素水平降低所致，該年齡段女性容易發生HPV感染，且HPV潛伏感染易轉變為持續感染，而HR-HPV的持續感染更容易使宮頸發生癌變，因此，對本地區>55歲女性的防治措施應以宮頸癌篩查為主，在篩查HPV感染情況的同時進行液基薄層細胞學檢查，從而更有效地降低本地區宮頸癌的發生率。

綜上所述，蘭州市女性HPV感染率較高的3種HR-HPV為HPV16、HPV52、HPV58，單一HPV16感染是最常發生和最具持續感染傾向的基因型；35歲后HPV感染率隨年齡的增加而增加，尤其以>55歲女性HPV感染率增加最為明顯。