蘭州市女性人乳頭瘤病毒感染狀況和基因型分布*

郭雅瓊，劉科鵬，趙 彬，張 笠，成 慧，劉 媛△

1.西北民族大學醫(yī)學檢驗技術系，甘肅蘭州 730000；2.西北民族大學附屬醫(yī)院檢驗科，甘肅蘭州 730000；3.蘭州大學第一醫(yī)院生殖中心，甘肅蘭州 730000

人乳頭瘤病毒(HPV)可引起人黏膜鱗狀上皮改變和皮膚疾病。根據(jù)HPV的致癌性，可分為低危型HPV(LR-HPV)和高危型HPV(HR-HPV)[1]。持續(xù)性HR-HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要高危因素[2]。目前的疫苗并沒有對所有HR-HPV基因型進行免疫[3]，因此，早期發(fā)現(xiàn)HPV感染并鑒別其基因型對宮頸癌的及時防治具有重要臨床意義。目前許多國家已經(jīng)報告了HPV感染的患病率和基因型地理區(qū)域分布，結果差異很大[4]。我國不同地區(qū)HPV感染的患病率和基因型分布也各不相同，HPV在華中地區(qū)[5]以及東南沿海地區(qū)[6]的感染率高于華北[7]和西部地區(qū)[8]，同時，HPV在經(jīng)濟發(fā)達城市的感染率高于經(jīng)濟欠發(fā)達的中小城市[9]。目前關于西北地區(qū)蘭州市HPV感染流行的報道較少，因此，本課題組通過這項回顧性橫斷面研究，分析蘭州市女性HPV感染狀況，從而為改進HPV防治策略和疫苗開發(fā)提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1一般資料 以2018年1月至2019年12月于西北民族大學附屬醫(yī)院和蘭州大學第一醫(yī)院體檢中心及婦產科門診就診的女性為研究對象。納入標準：既往無宮頸細胞學異常病史、手術史，近1周內無性生活史和陰道用藥史的女性，在月經(jīng)干凈后1周內進行檢查。排除重復就醫(yī)(具有多次HPV基因分型結果)和檢測結果記錄不明的女性,最終符合納入標準的女性受試者21 918例，年齡16～83歲，平均(38.5±19.4)歲。按照年齡段將21 918例受試者分為5組，≤25歲組(3 775例)，>25～35歲組(3 520例)，>35～45歲組(5 141例)，>45～55歲組(9 095例)和>55歲組(387例)。本研究經(jīng)西北民族大學附屬醫(yī)院和蘭州大學第一醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2儀器和試劑 熒光定量PCR擴增儀ABI7500來自美國應用生物系統(tǒng)公司，分子雜交儀FYY-3來自江蘇興化分析儀器廠，HPV基因分型試劑盒購自亞能生物技術有限公司。

1.3方法

1.3.1標本采集和保存 受試者取截石位，無菌棉簽擦拭宮頸分泌物，用專用宮頸采樣拭子于宮頸口旋轉1周，采集宮頸脫落細胞于采集器中，密封保存送檢。

1.3.2檢測方法 HPV基因分型檢測采用PCR-反向斑點雜交法，可檢測23種基因型別，包括17種HR-HPV(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82)及6種LR-HPV(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV81、HPV83)。實驗嚴格按照試劑盒說明書進行操作，即標本核酸提取→加樣→PCR擴增→反向斑點雜交→數(shù)據(jù)分析→結果審核→報告結果。實驗全過程均在質控范圍內。

1.4統(tǒng)計學處理 應用SPSS22.0統(tǒng)計軟件和Excel2010進行數(shù)據(jù)匯總與統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料以頻數(shù)、率表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1HPV感染情況 21 918例受試者中，共檢出HPV感染者4 524例，總感染率為20.64%。感染類型以單一HPV感染為主，占75.04%(3 395/4 524)，其中HR-HPV感染比例最高，為66.03%(2 987/4 524)，LR-HPV感染為9.02%(408/4 524)；多重HPV感染相對較少，占24.96%(1 129/4 524)，其中以雙重HPV感染比例最高，為76.44%(863/1 129)，且以多重HR-HPV感染比例最高，為57.84%(653/1 129)。見表1和2。

表1 蘭州地區(qū)女性HPV感染情況(%)

表2 蘭州地區(qū)女性HR-HPV、LR-HPV感染情況(%)

2.2HPV基因分型檢測情況 在4 524例HPV感染者中可檢測到21種HPV基因型，其中HR-HPV陽性率前6種基因型分別為HPV16(14.04%)、HPV52(13.06%)、HPV58(12.58%)、HPV68(9.20%)、HPV53(8.22%)和HPV56(8.22%)；LR-HPV感染率最高的為HPV42(10.17%)。見表3。

表3 HPV基因分型檢測情況(%)

續(xù)表3 HPV基因分型檢測情況(%)

2.3不同年齡組HPV感染類型分布情況 5個年齡組中，以>55歲組感染率最高(29.46%)，其次為≤25歲組(25.75%)，>25～35歲、>35～45歲和>45～55歲3個年齡組感染率相對較低，依次為13.58%、20.02%和21.23%，HPV感染率整體呈現(xiàn)“U”型分布，不同年齡組感染率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。分析比較各年齡組中不同HPV感染類型的感染率發(fā)現(xiàn)，各年齡組中單一HPV感染的比例均為最高，且以單一HR-HPV感染為主；多重HPV感染率相對較低，主要以多重HR-HPV感染為主。各組間單一HPV感染率、單一LR-HPV感染率、單一HR-HPV感染率、多重HPV感染率、多重HR-HPV感染率、多重混合型感染率比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同年齡組HPV感染類型分布情況比較[n(%)]

3 討 論

宮頸癌是全球婦女中最常見的婦科惡性腫瘤之一，由多種因素共同作用所致。HPV是一種嗜上皮性DNA病毒，屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，能引起人體皮膚黏膜鱗狀上皮增殖。在目前已知的HPV基因亞型中，LR-HPV一般不誘發(fā)癌變，HR-HPV感染宿主后很容易發(fā)生突變而發(fā)展為癌，HR-HPV感染是宮頸癌的主要危險因素[10]。因此，早期發(fā)現(xiàn)HPV感染，對于預防宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展顯得尤為重要。

本研究通過PCR-反向斑點雜交技術對入選的21 918例女性宮頸脫落細胞進行HPV檢測發(fā)現(xiàn)，蘭州市女性HPV總感染率達到20.64%，高于新疆(14.0%)、陽曲(8.9%)、佛山(13.5%)等地區(qū)的HPV感染率[11-13]，但低于華中地區(qū)，如長沙(26.5%)[6]、重慶(26.2%)[14]，提示HPV在中國不同地區(qū)其感染率不同。本研究顯示，所有HPV感染者中以單一HPV感染率最高，為15.49%(3 395/21 918)，與相關文獻報道一致[15]。說明由于不同地區(qū)經(jīng)濟、文化等多因素差異的影響，HPV感染狀況存在一定的地域差異，但基本以單一HPV感染為主。同時，超過80%的單一HPV感染者是HR-HPV感染，這也與先前的多項研究一致[16-17]。這些結果表明，HR-HPV感染的篩查和控制是我國宮頸癌防治面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。

本研究中HPV多重感染率為5.15%。目前關于多重HPV感染是否能夠促進宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展，觀點尚不一致。有文獻報道，多重HPV感染會增加HPV感染的持續(xù)時間、宮頸癌及癌前病變的患病風險[18]；另有文獻報道，與單一HPV16感染相比，HPV16合并其他亞型多重HPV感染的女性其患宮頸癌的風險并沒有增加[19]。因此，有關多重HPV感染對女性宮頸癌及癌前病變的作用有待于進一步研究證實。

本研究中共檢出21種HPV基因型別，HR-HPV中危害性最大的HPV16陽性率最高，這與先前文獻報道一致[20]，同時還發(fā)現(xiàn)HPV52和HPV58也是本地區(qū)常見的HR-HPV感染基因型，而LR-HPV則以HPV42最為常見。目前在我國應用于臨床的預防性二價疫苗(HPV16、HPV18)和四價疫苗(HPV16、HPV18、HPV6、HPV11)均未涵蓋HPV52、HPV58，而預防性九價疫苗(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52和HPV58)雖涵蓋了本地區(qū)感染率較高的基因型別，但由于該疫苗接種的最佳年齡為16～26歲，且以無性生活者為宜，因此不完全適用于蘭州地區(qū)女性。本研究通過對蘭州地區(qū)女性HPV感染基因型的分布特點進行研究發(fā)現(xiàn)，除HPV16外，蘭州地區(qū)還應重點預防HPV52和HPV58兩種亞型的感染，同時，通過本研究為蘭州地區(qū)疫苗接種和研發(fā)提供更全面的流行病學資料。本研究中感染率較高的3種HR-HPV與國內其他地區(qū)基本相同，但陽性率不同。說明HPV基因型別在各地區(qū)的感染率具有地域差異。這種差異可能與本地區(qū)的地理位置、自然條件、居民生活習慣及其就醫(yī)觀念有關。

通過對本地區(qū)不同年齡女性HPV感染情況的分析發(fā)現(xiàn)，不同年齡組間HPV感染率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且存在2個感染高峰，>55歲組感染率最高(29.46%)，其次為≤25歲組(25.75%)，>25～35歲組最低(13.58%)；>35～45歲組、>45～55歲和>55歲組3組HPV感染率為20.02%、21.23%和29.46%，呈現(xiàn)隨年齡增長感染率逐漸增加的趨勢。HPV感染率整體呈現(xiàn)“U”型分布，與國外有關報道類似[21]。≤25歲組感染率高可能與該年齡段女性性生活活躍、生殖道尚未完全發(fā)育成熟等有關，但因該年齡組女性自身免疫力強，故少有造成癌變，多為一過性感染，大多數(shù)會在1～2年內自愈[22]，因此，對該年齡段女性的性教育、HPV感染知識普及和HPV疫苗接種等顯得尤為重要。>55歲組感染率最高，可能由于該年齡段女性機體免疫力和激素水平降低所致，該年齡段女性容易發(fā)生HPV感染，且HPV潛伏感染易轉變?yōu)槌掷m(xù)感染，而HR-HPV的持續(xù)感染更容易使宮頸發(fā)生癌變，因此，對本地區(qū)>55歲女性的防治措施應以宮頸癌篩查為主，在篩查HPV感染情況的同時進行液基薄層細胞學檢查，從而更有效地降低本地區(qū)宮頸癌的發(fā)生率。

綜上所述，蘭州市女性HPV感染率較高的3種HR-HPV為HPV16、HPV52、HPV58，單一HPV16感染是最常發(fā)生和最具持續(xù)感染傾向的基因型；35歲后HPV感染率隨年齡的增加而增加，尤其以>55歲女性HPV感染率增加最為明顯。