急性冠脈綜合征患者血漿miR-122、miR-29b、miR-30d水平變化及診斷價值

郝春霞 張小光 李偉 張穎

經調查［1］發現，急性冠脈綜合征（Acute coro-nary syndrome，ACS）是導致心血管疾病患者死亡的主要原因。同時也是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中的急危重癥；若是早期能夠準確識別，對控制病情發展及改善預后具有重要意義。有研究［2］指出，血脂、高敏C 反應蛋白等指標在冠狀動脈粥樣硬化心臟病的發生及發展中起到重要意義?；诖?，探尋一種特異性、敏感度較高的指標用于預測急性冠脈綜合征病情發展十分重要，也一直是臨床研究的重點。有研究［3］指出，miRNA 異常表達與急性冠脈綜合征的發生密切相關，但臨床上關于其研究報道較少，尚不清楚miR-122、miR-29b、miR-30d等作用機制，故本次旨在探討急性冠脈綜合征患者血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 水平變化及診斷價值。現將其報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

分析2017年1月至2020年1月診治的102 例急性冠脈綜合征患者（觀察組）和40 例健康體檢人員（對照組）的臨床資料。診斷標準：符合《急性冠脈綜合征急診快速診治指南（2019）》［4］的診斷標準，經冠狀動脈造影等技術確診。納入標準：①首次發病；②年齡>18 歲；③無腦出血等疾病。排除標準：①存在全身性感染等疾病；②伴有先天性心臟??；③接受過冠脈支架植入治療。觀察組中男性52 例、女性50 例；年齡平均（51.23±2.45）歲；其中非ST 段抬高型肌梗死51 例、不穩定型心絞痛51 例；NYHA 心功能分級［5］：Ⅰ級15 例、Ⅱ級28例、Ⅲ級35 例、Ⅳ級24 例；對照組中男性21 例、女性19 例；年齡平均（51.32±2.41）歲；兩組在性別、年齡等資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 試劑與方法

實時熒光定量PCR 檢測后的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 等資料。操作步驟如下：于空腹狀態下抽取受檢人員外周靜脈血5 mL，5 000 rpm離心20 min，取上清液至干凈離心試管中待檢；采用血液RNA 分離試劑盒（美國賽默飛世爾科技有限公司）提取血漿RNA，將100 ng 總RNA 進行1%瓊脂糖凝膠電泳，以此保證RNA 的完整性，并采用紫外分光光度計（美國賽默飛世爾科技有限公司）檢測吸光值，確定提取RNA 純度是否合格，其次采用RNA 逆轉錄試劑盒（美國Takaya 科技有限公司）對提取RNA 進行逆轉錄，且選擇SYBR-Green 熒光定量PCR 檢測試劑盒（美國賽默飛世爾科技有限公司）對血漿miR-122；miR-29b；miR-30d 進行熒光定量PCR 檢測；其中，miR-29b 反應體系為SYBR mix12.5 μL，miR-30d 為25 μL，miR-29b 為20 μL。PCR 擴增條件為95℃，40 s；96℃，10 s；59℃，50 s，進行36 個循環。最后根據2-△△Ct法計算miR-122、miR-29b、miR-30d 相對表達量，并以其相對表達量來表示血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 的表達水平。三項聯合=miR-122+（β miR-29b/β miR-122）×miR-30d（β miR-30d/β miR-122）×miR-29b，β 以組別為因變量，以miR-122、miR-29b、miR-30d 為自變量進行二元logistic 回歸的回歸系數。miR-29b 上游引物：5′GGCCTTAAGTCAAATGTCGGCT-3′；下游引物：5′-AAAGGATCACTGGAACCTGCC-3′；miR-122 上游引物：5′-GTTCGTGGGAGCTACATCTG-GC-3′；下游引物：5′-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3′；miR-30d 上游引物：5′-AACCTGAGTGGAGCA-GA-3′；下游引物：5′-TGTAAACATCCCCGAC-3′。

1.3 觀察指標

①評估觀察組與對照組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d。②分析miR-122、miR-30d、miR-29b及三項聯合的ROC 曲線，并評估其敏感度、特異度、約登指數。③評估A 組與B 組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d。④分析血漿miR-122、miR-29b、miR-30d與急性冠脈綜合征患者嚴重程度的相關性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行數據分析；計量資料用（）表示，行獨立樣本t檢驗；預測價值評估采用ROC 曲線分析；相關性采用Spearman 法分析；以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較

觀察組的miR-122、miR-30d 高于對照組，而miR-29b 低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 1 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between 2 groups（±s）

表1 兩組血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 1 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between 2 groups（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值n 102 40 miR-122 4.83±1.94 1.02±0.14 12.382<0.001 miR-29b 0.70±0.23 1.45±0.49 12.404<0.001 miR-30d 5.01±1.14 1.98±0.32 13.238<0.001

2.2 診斷效能

ROC 曲線分析顯示，miR-122、miR-30d、miR-29b、三項聯合診斷急性冠脈綜合征的AUC 分別為0.959、0.966、0.936、0.999（P<0.05）。見表2、圖1。

表2 血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 及三項聯合的診斷效能分析Table 2 Analysis of the diagnostic efficacy of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d and the combination of three items

圖1 miR-122、miR-29b、miR-30d 及三項聯合的ROC 曲線分析Figure 1 ROC curve analysis of miR-122，miR-29b，miR-30d and the combination of three

2.3 急性冠脈綜合征患者的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較

A 組血漿miR-122、miR-30d 高于B 組，而miR-29b 低于B 組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 A、B 組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 3 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between group A and group B（±s）

表3 A、B 組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 3 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between group A and group B（±s）

組別A 組B 組t 值P 值n 51 51 miR-122 6.68±0.69 2.98±0.42 35.775<0.001 miR-29b 0.45±0.10 0.95±0.16 20.697<0.001 miR-30d 7.95±0.75 2.54±0.47 47.739<0.001

2.4 相關性分析

Spearman 相關性顯示，miR-122、miR-30d 與急性冠脈綜合征患者病情的嚴重程度呈負相關（r=-0.937、-0.857，P<0.05），而miR-29b 與急性冠脈綜合征患者病情嚴重程度呈正相關（r=0.854，P<0.05）。

3 討論

流行病學［6］調查發現，急性冠脈綜合征在臨床上具有較高的發病率和死亡率。經分析發現，該病的發生與動脈粥樣硬化斑塊破裂、血小板聚集、血栓形成、血管痙攣等病因具有直接關系，均是導致急性冠脈綜合征患者冠狀動脈管腔出現完全或不完全閉塞的重要原因，最終引起心肌急性缺血或壞死［7］。有研究［8］指出，miRNA 的異常表達與心血管疾病的發生、發展密切相關。也有研究表示，miRNA 參與血管脂質斑塊形成、斑塊破裂、糜爛、血小板聚集及心肌細胞壞死、凋亡等過程［9］。鑒于miRNA 異常表達與急性冠脈綜合征的發生、發展具有一定相關性。本次從分析血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 等因子入手，以期為臨床診斷急性冠脈綜合征及評估預后篩選實用指標。本研究結果提示血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 異常表達與急性冠脈綜合征發生、發展密切相關。其中，miR-122 是一種由肝臟特異性編碼的多聚腺苷酸。經分析發現，其表達水平受miR-370 的調控，且參與體內脂肪酸和三酰甘油的合成。也有研究［10］指出，miR-122 參與膽固醇及脂肪酸代謝的調控，若是抑制血漿miR-122 的表達量，能有效降低總膽固醇水平，以及減少肝臟三酰甘油的含量。在侯素芝等［11］學者研究中可見，急性冠脈綜合征組的TG、TC 顯著高于穩定性心絞痛組和健康對照組，從中說明TG、TC 水平的升高能增加動脈粥樣硬化的風險，導致急性冠脈綜合征的發生。而miR-122 又參與了TG、TC 水平的升高，故本文推測miR-122 可能是膽固醇和脂肪酸代謝的調節器，可將其作為急性冠脈綜合征診療的靶點。

有研究發現，miR-29b 異常表達與T 淋巴細細胞瘤、動脈粥樣硬化、心肌纖維化等疾病的發生密切相關。譬如其在急性心肌梗死、心肌纖維化等疾病發生中均能起到一定調節作用，故臨床將其作為多種疾病的診斷標志物分子［12-13］。在本研究中可見，miR-29b 與miR-122、miR-30d 不同，在患者中其血漿miR-29b 表達量呈明顯下降趨勢，經分析為，血管內皮細胞中的miR-29b 具有抑制核因子kB 信號通路活化的作用，在正常表達情況下，能抑制炎癥反應對細胞的損害，使血管內皮細胞在細胞脂多糖的刺激下仍存活。當血漿miR-29b 表達量下降，則無法抑制核因子kB 信號通路的活化，并且會導致炎癥因子水平升高，加大對心肌細胞的損傷，最終引發急性冠脈綜合征［14］。miR-30d 作為microRNA-30 家族中的一員，參與了多種細胞的分化。有研究指出，miR-30d 表達量變化能調節硫化氫的分泌，保護缺血缺氧狀態下的心肌細胞。在石萍等［15］學者研究中可見，急性冠脈綜合征患者血漿中的miR-30d 表達量會隨著胸痛時間呈動態變化，從中說明miR-30d 表達量會隨病情發生改變。在本文Spearman 相關性顯示，miR-30d 與急性冠脈綜合征嚴重程度呈負相關，佐證上述說法的可靠性。在本文研究中也可看到，miR-122、miR-30d、miR-29b 預測急性冠脈綜合征的AUC 分別為0.959、0.966、0.936；說明其預測價值較高，若是聯合診斷，有利于提高診斷確診率，即三項聯合的AUC為0.999，說明其預測價值較miR-122、miR-30d、miR-29b 單獨檢測高。

綜上所述，miR-122、miR-30d、miR-29b 用于診斷急性冠脈綜合征患者具有較高的臨床價值，其表達量會隨著病情的嚴重程度上升或下降。