血清uMtCK、AHSG及NGAL與胃癌患者病理參數及臨床預后的關系

陳瑤

胃癌是我國常見的消化道惡性腫瘤疾病之一，且多數患者胃癌早期癥狀隱匿，確診時多于處于胃癌進展期或晚期，患者生存預后較差。因此，對于探索胃癌相關的腫瘤標志物和血清學指標，反映胃癌的生物學特點，提高胃癌的診斷率和患者生存率一直是臨床研究的熱點內容。近年來，關于血清中線粒體肌酸激酶（mitochondrial creatine kinase，MtCK）在腫瘤中的異常表達及作用引起了臨床學者的關注，其包括廣泛型線粒體肌酸激酶（uMtCK）和肌節線粒體肌酸激酶（sMtCK）2 種，其中uMtCK 被認為在前列腺癌、肝癌等惡性腫瘤中存在過表達［1］。胎球蛋白A（alpha2-Heremans-Schmid glycoprotein，AHSG）為肝細胞合成和分泌的一類糖蛋白，其可通過基質膠促進腫瘤細胞的侵襲轉移，AHSG 在多種惡性腫瘤中均存在異常表達［2］。中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipo-calin，NGAL）為lipocalin 家族的一員，研究證明NGAL 與炎癥、細胞分化與凋亡、免疫反應、組織重構及多種腫瘤的發生發展密切相關；且其表達與腫瘤浸潤、轉移和預后關系密切［3-4］。因此，本研究對血清uMtCK、AHSG 及NGAL 與胃癌患者病理參數及臨床預后的關系進行了探究，以探討三者作為胃癌有效診斷和預后指標的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院消化內科2017年1月至2019年1月收治的85 例胃癌患者作為研究組，納入標準：①均符合中華醫學會消化內鏡學分會及中國抗癌協會腫瘤內鏡專業委員會制定的《中國早期胃癌篩查及內鏡診治共識意見（2014年）》［5］關于胃癌的診斷標準；②均對本研究知情自愿簽署知情同意書；③此前未接受放化療、手術及其他抗腫瘤藥物治療；④臨床資料完整。排除標準：①合并肝腎等器質性病變者；②合并其他惡性腫瘤者；③復發性胃癌患者及其他胃腸道疾病者；④感染、免疫系統疾病、造血系統疾病者；⑤無法配合完成研究者。其中，男44 例，女41 例，年齡平均（61.5±3.8）歲，患者組織類型、Lauren's 分型、腫瘤分化程度、TNM 分期、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、血管侵犯患者分布見表2。另選擇同期于本院門診健康體檢的志愿者85 例作為對照組，其中男46 例，女39 例，年齡平均（61.1±3.5）歲，均自愿參與本研究，能夠配合完成各項檢查。本研究獲得醫院倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 病理參數統計

統計所有胃癌患者性別、年齡（≤60 歲，>60歲）、組織類型（未分化腺癌、管狀腺癌、粘液腺癌、印戒細胞癌）、Lauren's 分型（腸型胃癌、彌漫性胃癌、混合型胃癌）、腫瘤分化程度（低分化、中分化、高分化）、TNM 分期（Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期）、浸潤深度（T1、T2、T3、T4）、淋巴結轉移（N0、N1、N2、N3）、遠處轉移（M0、M1）、血管侵犯（有或無）等臨床病理參數。

1.2.2 血清指標檢測

所有研究對象均收集5 mL 空腹靜脈血，3 000 r/min 離心10 min，收集血清。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平，uMtCK 試劑盒購自上海圻明生物科技有限公司，AHSG 試劑盒購自美國Epitope Diagnostics，Inc 公司，NGAL 試劑盒購自上海依科賽生物制品有限公司。均按照試劑盒說明書所述進行步驟操作，讀取吸光度值，繪制標準曲線，并計算血清uMtCK、AHSG 及NGAL 濃度。

1.2.3 隨訪

所有胃癌患者隨訪2～3年，統計期間患者任何原因導致的死亡情況，并分為生存組和死亡組，對比2 組胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平差異情況。

1.3 統計學分析

采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料以（）表示，兩兩比較用t檢驗，多組間采用單因素方差分析；Cox 多因素回歸分析影響胃癌患者預后的獨立因素。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組和對照組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較

研究組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 研究組和對照組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 比較Table 1 Comparison of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels between the study group and the control group

2.2 胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平與臨床病理參數的相關性分析

不同年齡、性別、組織類型、Lauren's 分型胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較均差異無統計學意義（P>0.05）。不同腫瘤分化程度、TNM 分期、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、血管侵犯胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平與臨床病理參數的相關性分析（±s）Table 2 Correlation analysis of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels and clinicopathological parameters in patients with gastric cancer（±s）

表2 胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平與臨床病理參數的相關性分析（±s）Table 2 Correlation analysis of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels and clinicopathological parameters in patients with gastric cancer（±s）

參數性別n男女44 41 t 值P 值年齡（歲）≤60>60 t 值P 值腫瘤大小（cm）≤4>4 t 值P 值Lauren's 分型腸型胃癌彌漫性胃癌混合型胃癌F 值P 值組織類型未分化腺癌管狀腺癌粘液腺癌印戒細胞癌F 值P 值腫瘤分化程度低分化中-高分化t 值P 值TNM 分期Ⅰ+ⅡⅢ+Ⅳt 值P 值浸潤深度T1/T2 T3/T4 t 值P 值淋巴結轉移N0 N1+N2+N3 t 值P 值遠處轉移M0 M1 t 值P 值血管侵犯39 46 37 48 44 34 7 3 54 16 12 36 46 38 47 33 52 31 54 63 22有無69 16 t 值P 值uMtCK（μ/L）24.2±3.1 24.5±3.6 0.413 0.681 24.0±2.8 24.4±2.4 0.705 0.483 20.1±2.2 26.1±2.9 10.792 0.000 24.2±3.2 24.1±2.9 24.4±3.1 0.307 0.759 24.0±3.0 24.3±3.1 24.5±3.6 24.1±3.4 0.146 0.885 17.5±2.2 27.4±2.9 17.001 0.000 19.2±2.5 26.1±3.2 10.873 0.000 17.0±2.0 27.2±2.8 19.558 0.000 17.1±2.6 27.8±2.5 18.720 0.000 17.5±2.4 26.8±2.3 15.812 0.000 27.1±3.0 18.5±1.9 10.940 0.000 AHSG（μg/mL）325.7±44.6 322.2±41.2 0.375 0.709 318.7±44.2 324.3±40.9 0.605 0.547 295.7±39.9 332.1±55.1 3.467 0.001 320.2±43.4 323.8±44.1 326.5±47.1 0.671 0.504 323.6±44.5 327.9±49.1 321.1±41.8 322.7±40.6 0.101 0.922 265.1±33.5 341.9±56.9 7.621 0.000 275.2±36.6 336.7±41.5 7.157 0.000 301.3±39.2 329.7±45.1 2.973 0.004 296.3±46.5 360.4±55.1 5.454 0.000 299.2±36.7 331.6±42.5 3.420 0.001 360.8±43.8 244.8±3.1 21.765 0.000 NGAL（ng/mL）16.9±1.9 16.8±1.5 0.268 0.789 16.6±2.0 17.0±1.6 1.013 0.314 14.4±1.9 17.8±1.3 9.684 0.000 16.7±1.9 16.8±1.5 17.1±1.8 1.047 0.298 16.6±1.7 17.0±2.2 17.1±2.3 16.8±1.8 0.560 0.571 15.0±1.2 17.4±1.9 6.973 0.000 15.1±1.1 17.3±1.6 7.488 0.000 15.5±1.5 17.8±2.3 5.580 0.000 12.5±1.2 18.5±2.9 13.343 0.000 15.1±1.5 17.6±1.9 6.268 0.000 18.2±1.9 13.1±1.5 10.021 0.000

2.3 存活組與死亡組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較

直至本研究隨訪結束，85 例胃癌患者中存活62 例，死亡23 例。存活組胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平均低于死亡組，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 存活組與死亡組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 比較Table 3 Comparison of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels between the survival group and the death group

2.4 Cox 多因素回歸分析

Cox 多因素回歸分析結果顯示，uMtCK、AHSG 及NGAL 升高為影響胃癌患者預后的獨立危險因素。見表4。

表4 Cox 多因素回歸分析結果Table 4 Cox multivariate regression analysis results

3 討論

近年來，惡性腫瘤的發病率在全球范圍內呈逐漸上升的趨勢，嚴重威脅了人類的身體健康和生存質量。胃癌等惡性腫瘤的早發現與其預后關系密切，因此對于臨床尋求敏感性和特異性高、無創、易操作的理想腫瘤標志物具有重要意義。

MtCK 為肌酸激酶（creatine kinase，CK）的同工酶之一，可催化肌酸和三磷酸腺苷之間的磷酸鍵可逆轉移并促進三磷酸腺苷的生成。MtCK 又可分為uMtCK 與sMtCK，uMtCK 為低聚的線粒體CK，是巨分子酶的一種，uMtCK 在腎臟、腦和平滑肌等組織或器官中表達，近年來多項研究報道uMtCK 在腫瘤患者病理組織或（和）血清中存在過表達，uMtCK常伴隨各種腫瘤出現，提示其可能為一種有效的潛在腫瘤標志物［6-7］。AHSG 是肝細胞合成的一種磷酸化糖蛋白，為半脫氨酸蛋白酶抑制因子超家族成員。AHSG 參與了人體胰島素抵抗、骨骼代謝調節、惡性腫瘤遷移和侵襲過程［8-9］。研究顯示［10］，AHSG可介導腫瘤細胞黏附作用，其可激活腫瘤細胞MAP和P13K/AKT 激酶信號，還可介導腫瘤外泌體形成，促進腫瘤細胞生長、運動和侵襲。NGAL 在多種腫瘤發生發展紅發揮重要作用，但其在不同腫瘤中的作用有所差異。研究認為［11］，NGAL 可抑制機體基質金屬蛋白酶降解，參與食管癌、乳腺癌等腫瘤細胞的分化、侵襲和轉移，并具有加速腫瘤進程的作用。本研究結果顯示，在胃癌患者中血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平相較于健康人群血清水平明顯升高，在研究中，NGAL 可作為潛在的新型新型綜合治療靶標［12］；Shi 等［13］研究認為，AHSG 與胃癌的發生發展關系密切，可作為為鑒定為胃癌的診斷生物標志物；而等研究對于uMtCK 的生物學特性闡述中指出，其與腫瘤的發生發展及預后的關系密切。

本研究結果提示，血清uMtCK、AHSG 及NGAL與胃癌臨床病理特征指標存在密切相關性。uMtCK可提高腫瘤細胞對能量需求的適應性，保護腫瘤細胞抵抗凋亡，并參與線粒體凋亡途徑和腫瘤細胞適應性代謝過程。有研究指出［14］，AHSG可作為血清化學引誘劑，通過基質膠促進腫瘤細胞的侵襲。研究認為［15］，NGAL 還可促進皮-間質轉化，從而改變腫瘤微環境，進而在腫瘤的侵襲和轉移中發揮作用。本研究中結果提示，血清uMtCK、AHSG 及NGAL 高水平患者往往在近期隨訪期間面臨著更高的死亡風險。Cox 多因素回歸分析結果提示，uMtCK、AHSG及NGAL 升高不僅與胃癌額惡性程度及病情嚴重程度存在相關性，也預示著胃癌患者預后不良，可作為胃癌患者評估病情嚴重程度和預后的潛在指標。

綜上所述，胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 存在異常升高的情況，且與胃癌進展、轉移及不良預后存在密切相關性，檢測相關指標水平有助于胃癌患者的診斷和預后評估。