發酵中藥對免疫應激肉雞生長性能和免疫功能的影響

張桂枝，王 晶，靳雙星*

(1.河南牧業經濟學院，河南 鄭州 450046；2.河南省家禽疾病防控工程技術研究中心，河南 鄭州 450046)

免疫應激影響畜禽生長發育，降低生產性能，增加發病率和死亡率。研究表明，在飼料或飲水中添加中藥或中藥提取物可以緩解免疫應激造成的生產性能下降、免疫功能降低、死淘率增加等負面效應[1-3]。但關于發酵中藥對免疫應激肉雞影響的相關研究還未見報道。發酵中藥是利用益生菌在生長代謝過程中產生的系列酶類代謝產物分解植物細胞壁，促使有效成分溶出[4]；或將中藥中糖類、蛋白質、脂肪、纖維素等營養成分進一步分解、轉化為小分子物質[5]；或與中藥中的某些特殊成分發生互作，對其活性成分進行修飾，促使新物質的產生[6]。因此，通過發酵可以分解中藥的粗纖維，提高藥物溶出度；轉化產生新生活性成分；對大分子物質降解，提高吸收率。在豬[7]、禽[8]、奶牛[9]等動物上具有較好的利用效果。為尋求綠色安全高效的抗應激添加劑，課題組通過注射脂多糖(LPS)的方法構建肉雞免疫應激模型，探討發酵中藥對免疫應激肉雞的生長性能和免疫功能的影響，對研發抗免疫應激添加劑，消除或減少免疫應激的發生具有十分重要的應用價值。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和藥品

免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)和細胞因子(IFN-γ、IL-2)ELISA檢測試劑盒(購于南京建成生物工程研究所)，LPS(sigma公司)，雞新城疫疫活苗(LaSota株，哈藥集團生物疫苗有限公司)。復方中藥由黃芪、黨參、白術、茯苓、刺五加、酸棗仁、甘草按一定比例配制而成。取上述復方中藥調整物料含水量為50%，pH為6.0左右，按4%接種量(調整枯草芽孢桿菌∶產朊假絲酵母∶嗜酸乳桿菌=1∶1∶1比例)接入物料中，攪拌均勻后裝入不透氣的塑料袋中，壓實，封口，置于31 ℃的環境中培養72 h，烘干即得[10]。

1.2 試驗動物與設計

1日齡AA 肉雞300只，隔離飼養至7日齡，選取健康肉雞200只隨機分為5組：對照組(基礎日糧)和4個處理組，即Ⅰ組 (基礎日糧+LPS)、Ⅱ組(基礎日糧+LPS+1%未發酵中藥)、Ⅲ組(基礎日糧+LPS+0.5%發酵中藥)、Ⅳ組(基礎日糧+LPS+1%發酵中藥)，每組8個重復，每個重復5只雞。按常規方式飼養，自由采食和飲水，7日齡進行2倍量新城疫點眼滴鼻免疫接種，21日齡進行3倍量新城疫飲水免疫接種。飼養至15、17、19、21、23、25、27日齡，分別按照100、200、200、250、250、400、400 μg/kg的劑量對4個處理組腹腔注射LPS，對照組注射等量生理鹽水。

1.3 指標測定

以組為單位，從7日齡開始記錄試驗雞日采食量，于28日齡，飼喂前稱重，計算平均日增重和料重比。最后一次注射LPS后24 h，每組采集血清16份，每個重復2份，按照血凝抑制(HI)試驗方法檢測新城疫抗體效價；按照ELISA檢測試劑盒的操作說明測定免疫球蛋白和細胞因子含量。稱重、采血后，每組宰殺16只雞，每個重復2只，摘取法氏囊、脾臟和胸腺，稱重，計算臟器指數。

1.4 數據統計分析

各指標檢測結果以平均值±標準差表示，采用SPSS25.0統計軟件進行單因素方差分析，多重比較采用LSD檢驗，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 發酵中藥對免疫應激肉雞生長性能的影響

從表1可看出，Ⅰ組肉雞平均日增重顯著低于對照組(P<0.05)，料重比與對照組相比有所升高，但差異不顯著(P>0.05)；3個中藥組肉雞的平均日增重顯著高于LPS應激組(P<0.05)，而料重比顯著低于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅳ組與Ⅱ組相比肉雞的平均日增重有所提高，料重比有一定的降低，但二者之間差異不顯著(P>0.05)。

表1 肉雞的生長性能指標Table 1 Growth performance of broilers

2.2 發酵中藥對免疫應激肉雞免疫功能的影響

2.2.1 新城疫抗體效價和免疫器官指數 從表2可看出，Ⅰ組與對照組相比肉雞新城疫抗體效價下降1個滴度；脾臟指數有所升高，胸腺指數和法氏囊指數有所下降，但二者差異均不明顯(P>0.05)。與Ⅰ組相比，3個中藥組不同程度地提高新城疫抗體效價，Ⅳ組和Ⅱ組新城疫抗體效價顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；3個中藥組不同程度地提高脾臟指數，Ⅲ組肉雞脾臟指數顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；3個中藥組不同程度地提高法氏囊指數，Ⅲ組和Ⅱ組法氏囊指數極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)。胸腺指數各組間無顯著差異(P>0.05)。

表2 新城疫抗體效價和免疫器官指數Table 2 Newcastle disease antibody titer and immune organ indexes

2.2.2 免疫球蛋白和細胞因子 發酵中藥對肉雞免疫球蛋白和細胞因子的影響見表3。由表3可看出，Ⅰ組與對照組相比，肉雞血清中IgM、IgG和IgA濃度均有一定的提高，其中IgM和IgG顯著高于對照組(P<0.05)；Ⅰ組IFN-γ和IL-2也有一定的提高，但與對照組差異不顯著(P>0.05)。3個中藥組與Ⅰ組相比，IgM、IgG和IgA濃度均有所下降，添加中藥可以使LPS應激引起的IgM和IgG濃度上升幅度降低到與對照組無顯著差異(P>0.05)，Ⅲ組對IgM濃度恢復效果更好，Ⅳ組對IgG和IgA濃度恢復效果更好。3個中藥組與Ⅰ組血液中的IFN-γ和IL-2濃度無顯著差異(P>0.05)。

表3 免疫球蛋白及細胞因子Table 3 Immunoglobulins and cytokines

3 討 論

3.1 發酵中藥對免疫應激肉雞生長性能的影響

免疫應激可引起甲狀腺激素分泌受到抑制，進而使胃腸道蠕動速率減緩，胃腸排空延遲，信號反饋到食欲中樞，從而使采食量下降，是造成生產性能降低的主要原因[1,11-12]。動物機體在沒有免疫應答反應的情況下，攝入的營養物質用于生命維持代謝和生長、生產。而在發生免疫應激狀態下，機體增加了用于維持免疫系統高度激活狀態的比重，消耗更多的能量來應對應激，減少了用于動物生產部分的比重，降低了營養物質利用率，可導致生長性能下降[1,13]。研究表明,加味四君子湯在調節胃腸運動，促進消化吸收功能和免疫調節、促進代謝等方面具有重要作用，有明顯的促生長效果[14-15]。本試驗所用復方中藥是在四君子湯的基礎上加減黃芪、酸棗仁、刺五加而成，不僅具有益氣健脾之功效，而且具有鎮靜安神之效果，即可促進胃腸運動，增強食欲提高采食量，又可使肉雞在免疫應激條件下保持安靜，減少營養物質消耗。試驗結果表明：肉雞發生免疫應激時，平均日增重顯著降低，料重比略有增加，日糧中添加復方中藥可以克服免疫應激帶來的不良影響，使平均日增重顯著升高和料重比顯著降低。

3.2 發酵中藥對免疫應激肉雞免疫功能的影響

新城疫HI抗體滴度高低是衡量機體特異性體液免疫的重要指標[16]。馬邯生等[17]研究報道脂多糖(LPS)應激可顯著降低肉仔雞新城疫疫苗免疫效果。本試驗結果顯示肉雞發生LPS應激時新城疫抗體效價降低；與LPS應激組相比，中藥組新城疫抗體效價顯著提高(P<0.05)。說明復方中藥可以對抗LPS應激影響，促進機體免疫抗體產生。

免疫器官指數是評價畜禽免疫狀態的主要指標。胸腺和法氏囊是家禽的中樞免疫器官，是免疫細胞發生、發育、分化和成熟的主要場所；脾臟是外周免疫器官，是成熟T、B淋巴細胞移居和接受抗原刺激后發生免疫應答的場所，通常認為免疫器官指數增加可間接說明機體免疫功能增強[18]。LPS應激對免疫器官指數的影響報道不一，劉水平等[19]研究發現，低劑量 LPS組對胸腺指數和法氏囊指數影響差異不顯著，但能夠顯著提高脾臟指數；中劑量 LPS組可以提高胸腺指數、法氏囊指數和脾臟指數；馬邯生等[17]研究報道，LPS應激能顯著降低肉仔雞的胸腺指數、脾臟指數、法氏囊指數，提高肝臟指數。鄭肖川[20]研究發現，注射LPS造成脾臟指數顯著升高，與應激組相比，飼糧中添加冬凌草甲素能夠緩解LPS應激造成的脾臟指數的升髙。劉磊等[21]研究表明，免疫應激顯著提高肉雞脾臟指數，而不影響胸腺和法氏囊指數。本試驗結果顯示，LPS應激肉雞的脾臟指數有一定升高，胸腺和法氏囊指數有一定下降，但差異不顯著(P>0.05)。與LPS應激組相比，0.5%發酵中藥組可以使肉雞脾臟指數顯著提高(P<0.05)；0.5%發酵中藥組和1%未發酵中藥組極顯著增加法氏囊指數(P<0.01)。不同的試驗結果有所差異，可能與LPS處理劑量、處理日齡、處理時間長短等有關。如馬邯生等[17]分別在16、18、20日齡，分別三次腹腔注射100、500、1000 μg/kg的脂多糖；劉磊等[21]分別在22、24和26日齡按500 μg/kg腹腔注射LPS；而本試驗則是在15、17、19、21、23、25、27日齡，分別按照100、200、200、250、250、400、400 μg/kg·bw劑量對4個處理組腹腔注射LPS，從LPS處理劑量、時間長短更趨于模擬是慢性免疫應激，免疫器官發育雖受到一定影響，但在日糧中添加一定劑量的中藥和發酵中藥，能緩解或克服免疫應激造成的不良影響，顯著地增加脾臟和法氏囊指數。

IgM、IgA和IgG為主要的血清免疫球蛋白，它們是機體體液免疫的重要參與者。康保聚等[22]研究報道LPS 攻毒可顯著提高斷奶仔豬的血清 IgG 和 IgM 含量(P<0.05) 。本研究發現，LPS刺激使肉雞血清免疫球蛋白IgM和IgG的含量顯著升高(P<0.05)，添加復方中藥能夠使LPS應激引起的IgM和IgG濃度上升幅度降低到與對照組無顯著差異(P>0.05)。

在前期研究中，采用本試驗發酵的方法對加減四君子湯進行固態發酵，結果表明，粗蛋白、粗脂肪含量顯著提高，中性洗滌纖維含量顯著降低；多糖得率和多糖含量極顯著提高[23]。韓春楊等[24]發現中藥制劑經微生物發酵后一些中藥成分含量增加1～4倍，同時增加了某些新的藥物成分。谷巍等[25]研究發現，復方中藥經嗜酸乳桿菌發酵后主要成分發生了轉變，產生了一種新的特征吸收峰，同時引起藥效的變化，對腹瀉小鼠產生了積極的影響。本試驗研究結果表明，發酵中藥組和未發酵中藥組相比在生產性能和免疫功能上對肉雞影響雖然沒有達到顯著水平，但從作用效果看發酵中藥優于不發酵中藥。

4 結 論

在肉雞日糧中添加一定量復方中藥能夠顯著提升免疫應激肉雞生產性能，顯著提高新城疫抗體效價、法氏囊指數和脾臟指數。這些結果說明復方中藥能夠有效緩解LPS應激對肉雞生長性能和免疫功能的影響，發酵中藥優于未發酵中藥。