柑橘提取物對仔豬血漿和肝臟生化指標的影響

崔藝燕，鄧 盾，田志梅，王 剛，魯慧杰，陳衛東，馬現永

(廣東省農業科學院 動物科學研究所，畜禽育種國家重點實驗室，農業農村部華南動物營養與飼料重點實驗室，廣東省畜禽育種與營養研究重點實驗室，廣東畜禽肉品質量安全控制與評定工程技術研究中心，廣州 510640)

抗生素由于具有良好的促生長作用而被廣泛用于飼料中，但是濫用抗生素很容易引起食品危害，環境污染，進而危害人類。目前，植物提取物作為抗生素替代品的前景較為樂觀。植物提取物可以改善動物的生產性能，提高產品質量，增強免疫力，預防疾病等。植物提取物的研究與應用對我國養豬業的可持續發展具有重要意義。柑橘含多種生物活性成分，如檸檬烯、檸檬醛、酚、類黃酮、維生素C等，對健康有很多好處[1]。柑橘提取物具有抗霉菌、抗誘變、抗氧化和抗炎活性[2-4]。其強大的抗氧化和抗炎作用在改善動物健康方面特別有價值[5-6]。試驗表明，橙皮提取物可改善肉雞的免疫應答和抗病性[7]。柑橘類黃酮可以延長雞蛋的貨架期，而不會對雞蛋的性能或品質產生副作用[5]。但是，柑橘提取物很少用于仔豬的生產，并且對仔豬的具體作用機理尚不清楚。前期研究結果表明，柑橘提取物可以改善仔豬免疫及抗氧化功能[8]。這項研究考察柑橘提取物是否對仔豬血液、肝臟等生化指標有負面影響，為柑橘提取物在仔豬生產的推廣提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

15%金霉素購自廣東新南都飼料科技有限公司，柑橘提取物由廣東潤森環保科技發展有限公司提供。柑橘提取物含有3.04%維生素C、2.38%維生素E、2.89%檸檬酸和20.77%總黃酮。

1.2 試驗動物和試驗處理

選取144頭28日齡(8.39±1.06)kg杜×長×大仔豬。隨機分配到3個組，每組6個欄，每欄8頭豬(公母各半)。試驗期28 d。處理組分別為：對照組飼喂基礎飼糧；抗生素組，在基礎飼糧上添加75 g/t金霉素；柑橘提取物組，在基礎飼糧上添加300 mL/t柑橘提取物。

1.3 試驗飼糧

基礎飼糧組成和營養水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis)

1.4 飼養管理與屠宰采樣

試驗在廣東省新興縣某農業發展有限公司豬場進行，半封閉式豬舍，仔豬采用群養，自由采食、飲水。免疫、消毒、驅蟲等根據豬場常規程序進行飼養管理。記錄每天的腹瀉次數，腹瀉率(%)=腹瀉仔豬頭次/(試驗仔豬頭數×試驗天數)×100%。試驗結束，每組選取每欄接近平均體重的2頭仔豬，進行前腔靜脈采血。血液經3 500 r/min、4 ℃離心10 min，收集血漿，-80 ℃保存。采血后屠宰，收集肺、心臟、肝臟、脾臟、胃、腎臟進行稱重，器官指數=器官重量(g)/ 活重(kg)。取肝臟(右下葉)于液氮速凍，-80 ℃保存。

1.5 生化指標

總膽固醇(F002-1-1，總膽固醇酶法)、甘油三酯(F001-1-1，甘油三酯酶法)、葡萄糖(F006-1-1，葡萄糖氧化酶法)、尿素氮(C013-2-1，脲酶法)、白蛋白(A028-2-1，溴甲酚綠法)、總蛋白(A045-2-1，考馬斯亮藍法)、谷草轉氨酶(GOT，C010-1-1，比色法)、谷丙轉氨酶(GPT，C009-1-1，比色法)和堿性磷酸酶(AKP，A059-1-1，可見光比色法)等測試盒購于南京建成生物工程研究所，具體步驟按說明書進行。

1.6 組織勻漿

取0.1 g肝臟，加入9倍體積的生理鹽水制成10%組織勻漿液，4 ℃，3 500 r/min 離心15 min，取上清測定生化指標。

1.7 數據處理

用Excel 2010整理數據，用SPSS 19.0進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并用Duncan 氏法進行多重比較。結果用平均值±標準差表示，P<0.05為差異顯著，0.05≤P<0.10為有趨勢。

2 結果與分析

2.1 柑橘提取物對仔豬腹瀉率和器官指數的影響

柑橘提取物對仔豬腹瀉率和器官指數的影響見表2。由表2可知，與柑橘提取物組和對照組相比，抗生素組的胃指數分別提高15.73%和20.80%(P=0.025)。各組間其他器官指數和腹瀉率沒有顯著差異(P>0.05)。

表2 柑橘提取物對仔豬腹瀉率和器官指數的影響Table 2 Effects of citrus extract on diarrhea rate and organ index of piglets

2.2 柑橘提取物對仔豬血漿生化指標的影響

柑橘提取物對仔豬血漿生化指標的影響見表3。由表3可知，三組間血漿甘油三酯、總膽固醇、血糖水平差異不顯著(P>0.05)。

表3 柑橘提取物對仔豬血漿生化指標的影響Table 3 Effects of citrus extract on plasma biochemical indexes of piglets

2.3 柑橘提取物對仔豬肝臟生化指標的影響

由表4可以看出，與柑橘提取物和對照組相比，抗生素組肝臟總膽固醇水平分別提高了39.60%和39.99%(P=0.010)。與對照組相比，抗生素組和柑橘提取物組肝臟葡萄糖水平分別提高了19.23%(P=0.057)。與對照組和柑橘提取物組相比，抗生素組的肝臟尿素氮水平顯著降低(P=0.001)，而總蛋白(P=0.001)、白蛋白(P<0.001)水平和白蛋白/總蛋白比值(P=0.001)顯著提高。

表4 柑橘提取物對仔豬肝臟生化指標的影響Table 4 Effects of citrus extract on liver biochemical indicators of piglets

2.4 柑橘提取物對仔豬血漿和肝臟肝功能指標的影響

仔豬血漿和肝臟肝功能指標列于表5。與對照組和抗生素組相比，柑橘提取物組血漿GPT活性分別增加39.75%和25.99%(P=0.013)，GOT活性有提高的趨勢(P=0.056)。各組間的血漿AKP活性和GOT/GPT比值無顯著差異(P>0.05)。與對照組和柑橘提取物組相比，抗生素組肝臟AKP活性分別顯著提高37.02%和43.60%(P=0.005)。與對照組相比，抗生素組和柑橘提取物組肝臟的GOT活性分別降低了14.81%和10.89%(P=0.006)。

表5 柑橘提取物對仔豬血漿和肝臟肝功能指標的影響Table 5 Effects of citrus extracts on piglet plasma and liver function indexes

3 討 論

一般認為，植物提取物可以有效降低斷奶仔豬的腹瀉率。斷奶仔豬飼喂紅辣椒精油和絲蘭提取物的腹瀉率明顯降低[9-10]。連翹提取物有降低腹瀉率和糞便評分的顯著作用[11]。然而，在本研究中，未觀察到柑橘提取物降低仔豬腹瀉率的現象，這與先前的研究一致[12-13]。這可能涉及到嚴格的衛生條件。仔豬舍每天和每周都要進行清潔和消毒，仔豬生活在更好的環境中。此外，商業農場仔豬腸道中的微生物群落似乎更穩定，受精油的影響較小，這說明了農場衛生條件的重要性[14]。

抗生素組的胃指數顯著增加，目前尚不清楚抗生素對胃發育的影響。通常，植物提取物可改善飼料的適口性，但是一些濃郁風味的提取物可能會降低適口性。柑橘提取物組和對照組之間的胃指數沒有差異，這沒有反映出柑橘提取物對飼料的適口性的作用。其他器官指數沒有差異，這與以往研究一致[9]。補充百里香、肉桂、桉樹、茶樹精油、姜和胡椒提取物對仔豬器官重量沒有影響[15]。然而，120 mg/kg絲蘭提取物可以增加仔豬胸腺指數，但其他濃度無積極作用[10]。可以看出，植物提取物對器官指數的作用是不一致的。此外，植物提取物需要在動物受到應激和破壞時發揮作用，對健康動物的器官重量沒有影響。辣木提取物不能改變正常血壓大鼠的器官重量，但能顯著減少高血壓大鼠的肝臟、附睪和褐色脂肪重量[16]。橙皮苷會增加肉仔雞免疫器官指數(脾臟、胸腺和法氏囊)[17]。柑橘提取物的效果也許與動物品種有關。

動物體內的代謝過程是動態平衡的，血液生化指標是反映機體物質合成代謝和組織器官功能變化的重要指標。血液中總蛋白、白蛋白和尿素氮的濃度通常被用作指示機體蛋白質代謝水平的指標。在一定范圍內，總蛋白濃度越高，機體合成和利用蛋白質的能力越強[18]。肝臟合成尿素氮，這直接反映了體內蛋白質的降解水平[19]。如果蛋白質代謝良好，尿素氮水平將降低[20]。研究表明，植物提取物可以促進仔豬的消化、吸收、生長和養分代謝[21]。假蒟、杜仲和紫蘇籽的提取物提高了仔豬血清總蛋白水平，降低了尿素氮水平[22-24]。但是，有研究表明，牛至精油、甘草提取物、植物精油復合物、抗菌肽等植物提取物對仔豬血液中蛋白質的沉積和代謝沒有影響[19]。不同植物的次生代謝物復雜多樣，從中提取的成分也不同，因此它們對蛋白質沉積和代謝的影響也不同。橙皮苷可使荷瘤小鼠血清總蛋白和白蛋白水平接近正常水平[25]。以往的結果表明，柑橘提取物組血漿白蛋白水平和白蛋白/總蛋白比值顯著高于對照組和抗生素組，并且各組之間的尿素氮水平相同[26]。這意味著柑橘提取物可以在蛋白質代謝和分解的相同條件下促進仔豬中的蛋白質沉積。同時，與對照組相比，抗生素增加了肝臟白蛋白水平和白蛋白/總蛋白比值，降低了肝臟的尿素氮水平。結果表明，抗生素和柑橘提取物在仔豬中具有較強的蛋白質合成和代謝能力。總之，抗生素和柑橘提取物可以改善蛋白質的合成和利用，并促進仔豬的生長發育。

血糖水平的升高可以反映出抗生素替代品對體內營養物質消化吸收的增強作用[19]。葡萄糖是細胞代謝的主要能源，可用于測量機體的健康狀況[24]，衡量機體能量代謝[27]。牛至精油可以顯著提高仔豬的血清葡萄糖水平。植物精油復合物、甘草提取物、抗菌肽、紫蘇種子提取物等對血液葡萄糖水平的影響很小[19,24]。本試驗中，抗生素和柑橘提取物增加了仔豬血漿葡萄糖水平，并顯著增加了肝臟葡萄糖水平。仔豬對血液葡萄糖的吸收主要通過小腸黏膜，柑橘提取物能夠改善仔豬腸道粘膜形態[26]，促進葡萄糖的吸收。也就是說，抗生素和柑橘提取物可以增強仔豬營養物質的消化吸收，能量營養狀況要好于對照組。具體機制有待進一步研究。

甘油三酯和總膽固醇主要在肝臟中合成，并參與各種脂質的合成，這可以反映體內脂質代謝的狀況。葡萄籽葡萄渣提取物、植物精油復合物、抗菌肽、牛至精油和甘草提取物對血清甘油三酯無顯著影響[19,28]。本研究與以往研究一致，柑橘提取物對血漿脂質沒有影響。Attakpa等[16]研究報道，辣木提取物可顯著降低高血壓大鼠血甘油三酯和總膽固醇水平，但可增加正常大鼠的低密度脂蛋白膽固醇水平。Donia等[25]發現，橙皮苷可顯著降低荷瘤小鼠血清總脂質水平。這些研究表明，柑橘提取物對脂質的影響可能與動物健康有關，健康仔豬的健康狀況不同于高血壓和荷瘤動物，因此結論不一致。一項研究報道，葡萄籽渣提取物對仔豬肝臟甘油三酯濃度沒有影響[28]。本研究中，抗生素提高了仔豬肝臟的總膽固醇水平，而柑橘提取物則無此效果。這種差異可能是由于提取物的活性成分不同，它們對脂質合成和代謝的影響不同。此外，本試驗中血漿和肝臟中甘油三酯和總膽固醇的水平不一致。這表明抗生素可以增強仔豬肝臟中脂質的合成代謝的能力，從而使血漿脂質含量保持在較低水平。總體而言，柑橘提取物對仔豬脂質代謝無負面影響。

AKP在骨形成中起重要作用。它在成骨過程中會水解各種磷脂，為機體提供無機磷，并參與脂肪和蛋白質的代謝[29]。抗生素組血漿中的AKP活性略高于對照組和柑橘提取物組，而肝臟中的AKP活性顯著更高。說明抗生素具有較高的骨形成、脂肪和蛋白質代謝能力，促進仔豬生長。然而，一項研究報道，八角、杜仲提取物、抗生素會顯著降低血清AKP活性[29]。這可能是由于仔豬斷奶應激強度不同所致。快速斷奶和突然斷奶可能會導致仔豬更大的應激和更高的AKP活性，這可以通過添加植物提取物和抗生素來緩解。

血清GPT和GOT是特異性肝損傷和功能障礙的敏感標志物[30]。它們可以反映肝臟的功能，體內營養物質的代謝，并且是應激反應的標志[31]。據報道，八角和杜仲提取物飼喂仔豬的血清GPT活性明顯低于對照組和抗生素組，但GOT活性無差異[29]。牛至精油、甘草提取物和抗菌肽顯著降低GPT活性，而抗菌肽增強GOT活性[19]。由以上研究得，不同的植物提取物對轉氨酶的作用不同。柑橘提取物組血漿中兩種轉氨酶升高，但GOT/GPT與抗生素組幾乎相同，比對照組低18.06%。轉氨酶在一定范圍內的增加可以促進蛋白質的代謝。

4 結 論

本研究結果表明，柑橘提取物改善了仔豬的血液生化指標和肝功能。